Гуанг Вей Жао

1 Център за бърза диагностика на болести по животните, Югозападен университет, Чунцин, Китай;

2 Chongqing Sanjiezhongxin Bioengineering Co. Ltd., Чунцин, Китай;

Tingting Huang

1 Център за бърза диагностика на болести по животните, Югозападен университет, Чунцин, Китай;

Ди Ву

1 Център за бърза диагностика на болести по животните, Югозападен университет, Чунцин, Китай;

Liwu Zhang

2 Chongqing Sanjiezhongxin Bioengineering Co. Ltd., Чунцин, Китай;

3 Chongqing Health-Forever Biotech Co. Ltd., Чунцин, Китай .

Зели Луо

1 Център за бърза диагностика на болести по животните, Югозападен университет, Чунцин, Китай;

Джия Лиу

1 Център за бърза диагностика на болести по животните, Югозападен университет, Чунцин, Китай;

Сяоуей Ян

1 Център за бърза диагностика на болести по животните, Югозападен университет, Чунцин, Китай;

2 Chongqing Sanjiezhongxin Bioengineering Co. Ltd., Чунцин, Китай;

Резюме

Синдром на атрофия на патешки клюн и нанизъм (BADS) е новопоявило се заболяване в Китай от 2015 г. През октомври 2017 г. неразпозната болест се е появила в патиците Cherry Valley, община Чунцин, югозападната част на Китай. Засегнатите птици показват клинични признаци с къс клюн и забавяне на растежа. Болестта причинява приблизително 20,00% заболеваемост и сериозна загуба на тегло поради забавен растеж. За да се идентифицира причинителят на BADS, бяха взети проби от черен дроб, далак, бял дроб и сърце за изолиране на вируса, тест за хемаглутинация, PCR идентификация и частично генно секвениране. Изолираният вирус беше условно наречен SC16. Тестът за хемаглутинация показва, че вирусът е отрицателен към пилешките червени кръвни клетки. Въз основа на резултатите от PCR и секвенирането, причинителят на BADS е нов гъши парвовирус с патешки произход (DGPV), докато в този случай не е открит друг патоген за коинфекция. По-нататъшният анализ може да даде представа за стратегиите за контрол на DGPV при патици.

Въведение

Атрофия на патешки клюн и синдром на нанизъм (BADS), характеризираща се с дисплазия на клюна и езика, е нововъзникнала болест в Китай от 2015 г. 1

Поради поразителната загуба на тегло и размери, причинена от BADS, болестта причинява значителни икономически загуби на китайската патическа индустрия. Въз основа на изолиране на вируса и експериментална инфекция на животни, новият гъши парвовирус (GPV) е идентифициран като причинител на BADS при патетата. 2 GPV е член на рода Dependovirus, семейство Parvoviridae, и е един от причинителите на болестта на Derzsy на гъски и патета от мускус. 3 Доказано е обаче, че неотдавнашното появяване на BADS в патиците на Cherry Valley е причинено от нов вирус, свързан с GPV, наречен GPV от патешки произход (DGPV) или нов вирус, свързан с GPV (NGPV). 2 В Китай щамовете на DGPV, изолирани от патица и мулешка патица от Cherry Valley с BADS, споделят 90,80% до 94,60% идентичност на нуклеотидната последователност с класическите изолати на GPV показват, че това е производен щам на GPV. 4

Избухването на BADS в Китай беше много бързо и широко. През последните две години случаи на BADS бяха открити в някои провинции, които произвеждат главно патици, включително Фуджиан, Дзянсу, Шандонг, Анхуей, Жежианг и Гуангдонг. 3, 5 Община Чунцин, разположена в югозападната част на Китай, също е основна зона за производство на патици, където BADS никога не е докладвано. Наскоро BADS беше намерен във ферма за патици в квартал Dazu в Чунцин. Този доклад описва диагнозата и характеристиката на BADS, идентифицирани в Чунцин, Китай.

Описание на случая

През октомври 2017 г. огнище на BADS в патици Cherry Valley, което се характеризира с къс клюн и силно забавяне на растежа (фиг. 1 A и B), се случи във ферма за патици в Dazu (община Chongqing), югозападен Китай. Болестта причинява приблизително 20,00% заболеваемост и сериозна загуба на тегло, причинена от забавен растеж. За да се характеризира причинителят на болестта и еволюционните връзки между идентифицирания агент и известните в момента птичи парвовируси, е построено филогенетично дърво. Чернодробни, далачни, белодробни и сърдечни проби бяха събрани от болни патици и всяка тъканна проба беше отделно хомогенизирана във фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS; Sangon Biotech, Шанхай, Китай), за да се получи 10% (w/v) суспензия. След трикратно замразяване и размразяване на пробите суспензиите се избистрят чрез центрофугиране при 12 000 g в продължение на 10 минути при 4 ° C и след това се филтрират през 0.22 μm филтър (Sangon Biotech, Шанхай, Китай). Филтрираните суспензии се използват за изолиране и идентифициране на вируса.

характеризиране

A и Б) Патици от черешовата долина с типични признаци на BADS (къс клюн с изпъкнал и увиснал език, червени стрелки) се срещат във ферма за патици в Dazu (община Чонгкинг), югозападна Китай

Първо, приготвените филтрирани суспензии се инокулират в 9-дневни зародиши SPF яйца от патица през алантоисната кухина. Резултатите показват, че патешките ембриони умират от 84 до 144 часа след инокулация чрез последователно преминаване за три пъти. Заразените алантоисни течности се събират, концентрират и пречистват чрез утаяване на полиетилен гликол -6000 (Sangon Biotech). След това пречистените проби бяха изследвани с помощта на тест за хемаглутинация според Johnston et al. 6 Резултатите показват, че изолираният патоген не може да аглутинира пилешките червени кръвни клетки.

За да се изследва генетичната връзка между SC16 изолат и известните парвовируси на водолюбивите птици, бе генерирано филогенетично дърво, базирано на протеинови последователности VP3, използващо метода на присъединяване на съседи, базиран на модел на 3-параметър Tamura и анализ на зареждане в софтуера MEGA 5.0 (Biodesign Institute, Tempe, САЩ). 7

Резултатите ясно показаха, че SC16 изолатът е тясно групиран с DGPV (фиг. 2), потвърждавайки, че принадлежи към рода parvovirus и е свързан с щамове DGPV.

Генерираното филогенетично дърво на GPV, DPV, MDPV и SC16 изолира въз основа на частични последователности на гена VP3. Филогенетичната връзка беше оценена с помощта на метод за присъединяване на съседи, базиран на модел на 3-параметър Tamura и анализ на bootstrap (1000 повторения), както е приложено с помощта на софтуера MEGA5. Скалата представлява 0,005% нуклеотидни отклонения. Номерата за присъединяване на GenBank на последователностите бяха посочени в скоби. Вирусът SC16, изолиран от патици от Cherry Valley в това проучване (*), е тясно свързан с парвовирус на Duck (патица от Cherry Valley, номер на GenBank> KX384726), GPV с произход от патица (GenBank No.> KU844283.1) и Пекин патешки произход GPV (GenBank номер за присъединяване> KT751090.1,> KT935530.2 и> KT935531.2)

За да се изследва патогенността на SC16 изолат, 10 5 ELD50 на 0,20 ml бяха инокулирани в 9-дневни SPF ембрионирани патешки яйца през алантоисната кухина. Впоследствие бяха избрани и закупени двадесет 2-дневни патици от Медицинския университет в Чунцин, Чунцин, и експериментално заразени с SC16 изолат чрез интрамускулно инокулиране с доза 5 × 10 5 ELD50 в 1,00 ml на птица. Основните клинични признаци при заразените патици са наблюдавани на десетия ден след инфекцията (PI) и продължават да съществуват през целия период на експеримента (30 дни). Клиничните признаци, включително къс клюн с изпъкнал и увиснал език и силно забавяне на растежа, са в съответствие с тези, показани при естествено заразени патици, и в съответствие с констатираните констатации от Xiao et al. 5

Дискусия

BADS, наричан също синдром на патица с къс клюн и нанизъм (SBDS), е докладван за първи път в стадата на патица от мулета в началото на 70-те години в Югозападна Франция. 3 Подобен случай е открит в Тайван с по-висока заболеваемост и смъртност от този, докладван във Франция по време на коинфекция на патици с патешки парвовирус и вирус на патешки хепатит през 1989 г. 8 От 2015 г. BADS е широко разпространен в източната част на Китай, особено в провинциите Шандонг, Анхуей и Дзянсу. 3, 9, 10 Въпреки че Чунцин е бил един от основните райони за размножаване на патици в югозападната част на Китай, но в тази област няма съобщения за BADS. Причините за толкова нисък процент на заразяване в тази област все още не са известни.

В предишно проучване DuCV се счита за патоген на коинфекция на болестта BADS. 11 В друго проучване беше установено, че 60,00% от пробите (102/170) са положителни за DuCV (тип 1 и 2) при заразени с NGPV патици, показва, че DuCV може да играе голяма роля за болестта BADS. 9 В настоящото проучване обаче DuCV не е открит. Междувременно изследваните патици също са отрицателни за останалите осем патогени, включително AIV, NDV, DRV, DHAV, DTMUV, MDRV, CELOV и REV. Следователно при настоящото огнище на BADS е открит само DGPV и възможността за коинфекция с другите неизвестни патогени изисква допълнително проучване.

Както беше съобщено по-рано, капсидните протеини VP1 и VP3 са подходящи за молекулярен анализ за определяне на генетичната свързаност на различни щамове GPV и MDPV. 4, 12 Следователно, генетичната връзка между SC16 изолат и другите известни парвовируси на водолюбивите птици е оценена въз основа на VP3 протеиновата последователност в настоящото проучване. Въпреки че тези открития биха могли да разкрият, че причинителят е нов DGPV, данните за цялата последователност на генома все още са необходими за по-нататъшна характеристика на новоидентифицирания вирус.

Благодарности

Тази работа беше подкрепена от Местен фонд за наука и развитие на технологиите в Чунцин (2018), Проект за основни изследвания и изследване на границите на Чунцин (cstc2018jcyjAX0264) и ключовите изследователски проекти за технологични иновации и демонстрация на приложения на Чунцин (cstc2018jszx-cyzd0026).

Конфликт на интереси

Авторите заявяват, че не е имало конфликт на интереси.