Катедра по акушерство и гинекология, Университет по здравеопазване и науки в Орегон, Портланд, Орегон

диета

Кореспонденция

Cecilia Y. Cheung, L ‑ 458, Катедра по акушерство и гинекология, 3181 SW Sam Jackson Park Road, Портланд, Орегон 97239.

Отдел за репродуктивни науки и науки за развитието, Национален изследователски център за примати в Орегон, Портланд, Орегон

Катедра по акушерство и гинекология, Университет по здравеопазване и науки в Орегон, Портланд, Орегон

Отдел за репродуктивни науки и науки за развитието, Национален изследователски център за примати в Орегон, Портланд, Орегон

Катедра по акушерство и гинекология, Университет по здравеопазване и науки в Орегон, Портланд, Орегон

Катедра по акушерство и гинекология, Университет по здравеопазване и науки в Орегон, Портланд, Орегон

Кореспонденция

Cecilia Y. Cheung, L ‑ 458, Катедра по акушерство и гинекология, 3181 SW Sam Jackson Park Road, Портланд, Орегон 97239.

Отдел за репродуктивни науки и науки за развитието, Национален изследователски център за примати в Орегон, Портланд, Орегон

Катедра по акушерство и гинекология, Университет по здравеопазване и науки в Орегон, Портланд, Орегон

Отдел за репродуктивни науки и науки за развитието, Национален изследователски център за примати в Орегон, Портланд, Орегон

Катедра по акушерство и гинекология, Университет по здравеопазване и науки в Орегон, Портланд, Орегон

Информация за финансиране:

Тази работа беше подкрепена от грантовете на NIH R01 HD061541 от Националния институт по детско здраве и човешко развитие на Cecilia Cheung, NIH R24DK0909640 от Националния институт по диабет и храносмилателни и бъбречни заболявания с допълнителна подкрепа от Кабинета на директора, Национални здравни институти под номер на наградата NIH P51OD011092. Съдържанието на това изследване е отговорност единствено на авторите и не представлява непременно официалното мнение на NIH/NICHD.

Резюме

Въведение

Въз основа на това предположение, предизвиканите от затлъстяването промени в експресията на гена на amnion VEGF по време на бременност могат да модифицират AFV, за да повлияят потенциално на плода и новороденото. При модел на овце майчиното затлъстяване е свързано с намалено AFV (Satterfield et al. 2012). При бременни овце, индуцираното от диетата затлъстяване на майката е свързано с намалена плацентарна артериална VEGF иРНК и протеинова експресия от средата на бременността до срока. Този спад на ангиогенния фактор може да функционира като защитен механизъм за намаляване на плацентарното съдово развитие и по този начин доставката на хранителни вещества на майката до плода (Ma et al. 2010). При бременни свине, генетично предразположени към затлъстяване, беше установено, че броят на концепциите е намален и изглежда е свързан с по-ниската плацентарна експресия на VEGF (Gonzalez-Bulnes et al. 2012). Тези наблюдения предоставят експериментални доказателства в подкрепа на участието на плацентарния VEGF в индуцирано от HFD затлъстяване на майката и лош резултат от бременността. При хората обаче не е ясно дали майчиното затлъстяване поради HFD би довело до променена динамика на околоплодните течности и промени в експресията на VEGF на амниона.

Интересно е, че е показано, че ресвератролът потиска експресията на гени VEGF и нивата на протеини в различни клетъчни типове (Zhang et al. 2014; Kuroyanagi et al. 2015), включително ракови клетки (Tino et al. 2016; Kim et al. 2017). Въпреки че добавянето на ресвератрол може да подобри обемния кръвен поток на маточната артерия при HFD животни (Roberts et al. 2014), не е известно дали ресвератролът ще модулира AFV чрез промени в нивата на VEGF в амниотичното отделение.

Настоящото проучване е предназначено да изследва ефектите от високия прием на мазнини при майките върху експресията на AFV и VEGF в амниона и да корелира тези промени с метаболитния профил на майката, за да се определи дали HFD е рисков фактор за аномалии на AFV. За да определим експресията на VEGF на амнион, определихме количествено концентрациите на VEGF в амниотичната течност, анализирахме генната експресия на VEGF в три области на амниона и определихме експресията на гена на амнион на антиангиогенния VEGF рецептор, разтворим Flt-1 (sFlt-1), който специфично се свързва VEGF за намаляване на неговата бионаличност. Тъй като VEGF в амниотичната течност вероятно се получава предимно от амниона, концентрацията на амниотична течност VEGF трябва да отразява нивата на експресия в амниона. Освен това, тъй като ресвератролът е предложен за терапевтична употреба за подобряване на метаболитното здраве (Shah et al. 2016; Menichini et al. 2018), ние изследвахме ефектите на ресвератрола върху концентрациите на VEGF в околоплодната течност.

Материали и методи

Подготовка на животни

Всички процедури с животни са проведени в съответствие с насоките на Институционалния комитет за грижи и използване на животните към Националния изследователски център за примати в Орегон (ONPRC) и Университета за здраве и наука в Орегон. ONPRC спазва Закона за хуманно отношение към животните и разпоредбите на USDA. Японските макаци (Macaca fuscata) се поддържат на HFD (36% калории от мазнини; Purina Mills, Inc., Сейнт Луис, Мисури, САЩ), допълнени с калорично гъсти лакомства в продължение на 4–7 години и през цялата бременност, както беше описано по-рано (Roberts et al. 2014; Harris et al. 2016). Съставът на тази диета представлява типична западна диета по отношение на съдържанието на наситени мазнини. Контролните животни бяха хранени със стандартна чау (14% калории от мазнини), съчетана в съдържание на микроелементи. Ресвератрол (с висока чистота транс‐Ресвератрол, Resvida; DSM Nutritional Products, Inc., Parsippany, NJ, USA) е включена в добавената към ресвератрол HFD чау от производителите (Purina Mills) по време на производството до крайна концентрация от 0,37%. При подгрупа животни добавянето на ресвератрол е започнато 3 месеца преди размножителния период и продължава през цялата бременност. С този режим на добавки, нивата на ресвератрол на гладно при майката бяха

1 ng/ml и нивата след хранене са били до 70 ng/ml (Roberts et al. 2014). Животните бяха оставени да се размножават по естествен начин и бременностите бяха идентифицирани чрез рутинен ултразвук. Гестационната възраст е постигната чрез фетална биометрия в началото на бременността.

VEGF ELISA

За количествено определяне на VEGF в околоплодната течност, пробите се центрофугират при 1800ж в продължение на 15 минути за отстраняване на частици и анализирани за концентрации на VEGF в три екземпляра чрез сандвич ELISA в твърда фаза (човешки VEGF Quantikine ELISA комплект, R&D системи), като се използват процедури, предоставени от производителя. Този анализ е специално разработен за разпознаване на VEGF165, най-широко експресираната изоформа, с> 50% кръстосана реактивност с VEGF121 и VEGF189. Дисперсионните коефициенти на интрасай и интераси са съответно 4,5% и 7%. Чувствителността на анализа за VEGF е 9 pg/ml и специфичност> 85%. Кръстосаната реактивност за VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, PlGF и свързаните с тях ангиогенни фактори е

RT ‐ qPCR

Статистически анализ

Данните са представени като средна стойност ± SE. За групови сравнения са използвани параметрични дисперсионни еднофакторни анализи (еднофакторен ANOVA) и t-тестове. Ако нулевата хипотеза беше отхвърлена от ANOVA, най-малко значимата разлика на Fisher беше използвана за post hoc тестване. Връзката между AFI, концентрациите на VEGF в околоплодната течност и нивата на VNG на amnion или sFlt-1 mRNA се определя чрез двувариантна регресия с най-малки квадрати. Коефициентът на корелация (r) на Пиърсън е използван за изразяване на степента на линейност между две променливи. Данните бяха преобразувани логаритмично при необходимост за нормализиране на дисперсиите преди анализ; трансформираните данни се нанасят на логаритмични скали на фигурите. P ≤ 0,05 се счита за значимо.

Резултати

Ефекти от диетата върху теглото на майката и индекса на амниотичната течност

Теглото на майката при бременност 130 дни (0.75 срок) е 10,27 ± 0,43 kg в контролните язовири. Диетата с високо съдържание на мазнини значително увеличава теглото на майката до 12,81 ± 0,56 kg (P Таблица 1. Тегло на майката и плазмени концентрации като функции на диетата при бременност 130 дни (средно ± SE)