Етнофармакология

Редактиран от
Адолфо Андраде-Цето

Национален автономен университет в Мексико, Мексико

Прегледан от
Марсия Хириарт

Институт по клетъчна физиология, Национален автономен университет в Мексико, Мексико

Адриана Де Сиерви

CONICET Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME), Аржентина

Принадлежностите на редактора и рецензенти са най-новите, предоставени в техните профили за проучване на Loop и може да не отразяват тяхното положение по време на прегледа.

затлъстяването

  • Изтеглете статия
    • Изтеглете PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Допълнителни
      Материал
  • Цитат за износ
    • EndNote
    • Референтен мениджър
    • Прост ТЕКСТ файл
    • BibTex
СПОДЕЛИ НА

Оригинални изследвания СТАТИЯ

  • 1 Ключова лаборатория за наука за пуер чай, Министерство на образованието, Земеделски университет в Юнан, Кунмин, Китай
  • 2 Изследователски център за обработка на чай към Юнан, Аграрния университет в Юнан, Кунмин, Китай
  • 3 Научна наблюдателна и експериментална станция за преработка и преработка на чай в Юнан, Министерство на земеделието, Кунмин, Китай
  • 4 Департамент по наука, Земеделски университет в Юнан, Кунмин, Китай

Въведение

Наднорменото тегло и затлъстяването се увеличиха с тревожни темпове през последните години и сега преобладават по целия свят. Наднорменото тегло и затлъстяването обикновено се причиняват от енергиен дисбаланс между приема и потреблението на калории, по-специално високия хранителен прием на мазнини и захари (Bolton-Smith и Woodward, 1994; Gibson, 1996; Yeomans, 2017; Zambrano и Nathanielsz, 2017) . Населено проучване от 1975 до 2014 г., с повече от 19,2 милиона възрастни участници, разкрива, че около 641 милиона индивиди по света са били със затлъстяване през 2014 г., в сравнение със 150 милиона през 1975 г. През последните четири десетилетия се е осъществил глобален преход, от свят, в който разпространението на поднормено тегло е повече от два пъти повече от затлъстяването, до такъв, в който повече хора са със затлъстяване, отколкото с поднормено тегло (NCD Risk Factor Collaboration [NCD-RisC] et al., 2016). Съществува силна положителна връзка между затлъстяването и различни хронични заболявания, включително диабет тип 2, високо кръвно налягане, сърдечно-съдови заболявания, инсулт и дори някои видове рак (Rossner, 2002; Basen-Engquist and Chang, 2011; Sartorius et al., 2016; Smith et al., 2017). Те са вредни за здравето на индивида, както и създават голяма икономическа тежест за техните семейства. Следователно ефективните интервенции за управление на теглото, включително нискокалорични диети и упражнения, могат да имат важна роля за облекчаване на затлъстяването и метаболитните заболявания (Lyznicki et al., 2001).

Зеленият чай се консумира по целия свят, особено в Източна Азия. Основните компоненти на зеления чай са кофеинът и полифенолните съединения, известни като катехини. От катехините (-) - епигалокатехин-3-галатът (EGCG) е най-разпространен в зеления чай. Съобщава се, че EGCG е отговорен за много от потенциалните ползи за здравето на зеления чай, включително намалено наддаване на тегло и облекчена инсулинова резистентност (Richard et al., 2009; Sae-tan et al., 2011).

Yang et al. (2016) направиха преглед на механизмите за намаляване на телесното тегло и облекчаване на метаболитния синдром чрез зелен чай. Те предложиха два основни механизма, включващи EGCG: (1) намалена абсорбция на липиди и протеини в червата, като по този начин намалява приема на калории и (2) активиране на AMPK в черния дроб, скелетните мускули и бялата мастна тъкан. Според тяхната „AMPK хипотеза“ AMPK играе основна роля в посредничеството на действията на EGCG върху синтеза на мастни киселини и катаболизма на мастните киселини. Въпреки това, само едно проучване съобщава за активиране на AMPK от EGCG в култивирани клетки и в чернодробни тъкани на мишки, което предполага, че ефектите на катехините, включително техните ефекти срещу затлъстяване и противоракови ефекти, са поне частично медиирани от активиране на AMPK ( Murase et al., 2009). По този начин все още е неизвестно дали активирането на AMPK има централна роля за намаляването на мастната тъкан от EGCG и дали AMPK има сходни роли в различни депа.

В това проучване ние прилагахме различни дози EGCG на мишки C57BL/6J, за да определим неговите анти-затлъстяване и хиполипидемични ефекти. Също така имахме за цел да проучим (1) дали EGCG-активираното AMPK фосфорилиране играе централна роля за намаляване на натрупването на мазнини в мастните тъкани и (2) дали EGCG има сходни ефекти върху регулирането на натрупването на липиди в различни мастни депа.

Материали и методи

Животни

Мъжки мишки C57BL/6J на възраст около 6 седмици са получени от Changzhou Card Vince Experimental Animal Co., Ltd., мишки C57BL/6J са настанени индивидуално в контролирана от околната среда стая (вентилация, 22 ± 2 ° C, 55 ± 5% относителна влажност ) с ad libitum достъп до вода и храна и се поддържа при 12-часов цикъл светлина-тъмнина. EGCG (чистота> 98%, Chengdu Biopurify Phytochemicals Ltd.) се приготвя с дестилирана вода като разтвор за съхранение 10 mg/mL и се съхранява на тъмно при -20 ° C до употреба за сондаж.

Мишките бяха хранени с контролна диета, съдържаща 10 kca% мазнини (D12450J, Research Diets) 2 седмици преди започване на експеримента. Мишките бяха разделени на четири групи на възраст около 8 седмици; всяка група включваше осем мъжки мишки. Мишките от контролната група бяха хранени с контролна диета (D12450J, Research Diets). Мишките от групата с HFD са били хранени с диета с високо съдържание на мазнини, съдържаща 60 kca% мазнини (D12492, Research Diets). Мишките в групите с HFD + EGCG се хранят с HFD и поотделно се прилагат 50 mg/kg EGCG и 100 mg/kg EGCG интрагастрално на ден. След 20 седмици хранене се регистрират промени в телесното тегло, приема на храна, приема на вода и кръвната глюкоза. След това мишките се умъртвяват и тъканите се събират, незабавно се замразяват с течен азот и се съхраняват при -80 ° С. За да оценим затлъстяването на мишки в това проучване, използвахме индекса на Ли [телесно тегло (g) ∗ 0,33 ∗ 1000/телесна дължина (cm)], широко използван метод за преценка на телесното тегло и затлъстяването при малки експериментални животни ( Лий, 1929; Бернардис и Патерсън, 1968). Експериментите с животни в това проучване са одобрени от комитета по етика на животните от Земеделския университет в Юнан (№ 20160318002, 18 март 2016 г.).

Количествен анализ на количествена полимеразна верижна реакция (PCR) в реално време

Общата РНК от мастните тъкани беше извлечена с помощта на TRIzol (TransGen Biotech, Пекин, Китай). Допълнителна ДНК се синтезира с помощта на реактивния комплект PrimeScript RT с геномна ДНК (Takara) съгласно протокола на производителя. PCR е извършена и количествено определена с помощта на SYBR Green PCR Master Mix в реално време (TransStart Top Green qPCR SuperMix, TransGen Biotech, Пекин, Китай) с ABI 7900HT PCR система в реално време за PCR (Applied Biosystems, Inc.). Данните са получени след PCR циклиране; нивата на генна експресия бяха изчислени по метода 2 -ΔΔCT и нормализирани до β-актин, измерен паралелно. Последователностите на грунда са дадени в Таблица 1.

МАСА 1. qRT-PCR праймери, използвани в това проучване.

Анализи на Western Blot

Общите протеини бяха изолирани от бели мастни тъкани, използвайки RIPA (Solarbio Life Science, Пекин, Китай) буфер, допълнен с протеазни и фосфатазни инхибитори. Концентрациите на протеини бяха определени с помощта на реагент за протеинов анализ (Beyotime Biotechnology, Китай) и еднакви количества протеин (60 μg) бяха заредени във всяка ямка на 8% гел за електрофореза с натриев додецил сулфат полиакриламиден гел. След като протеините бяха прехвърлени върху мембрани от поливинилиден дифлуорид, петна бяха блокирани с 5% говежди серумен албумин, последвано от инкубация през нощта при 4 ° C със следните първични антитела: анти-AMPKα (23A3), анти-фосфо-AMPKα (Thr172 ), анти-ACC, anti-FAS и anti-CPT1α (технология за клетъчна сигнализация, САЩ). След три измивания с TBST буфер, петна се инкубират с подходящо разредени конюгирани пероксидаза от хрян вторични антитела за 1 h при стайна температура. Имуноблотите се визуализират с подобрен комплект за откриване на хемилуминесценция (Tiangen Biotech, Пекин, Китай). Нивата на протеини бяха нормализирани до тубулин като контролен товар.

Откриване на серумни липиди и фекални липиди

Кръв се взема от вътрешния кантус и се събира в микроцентрофужни епруветки с натриев хепарин. Кръвните проби се центрофугират при 3000 rpm в продължение на 20 минути и плазмата се държи замразена при -20 ° C до анализ. Измерват се нивата на общия холестерол (TC), TAG, холестерола на липопротеините с висока плътност (HDL-C) и LDL-C. Всички анализи на кръвна проба се проведоха във Втората свързана болница в Кунмин.

Фекални проби бяха събрани на 18 седмици, замразени при -80 ° С и лиофилизирани (FD5-6, Sim). Нивата на TC, TAG, HDL-C, LDL-C и свободни мастни киселини (FFA) бяха измерени с помощта на съответните комплекти (Институт по биоинженерство в Нанкин Jiancheng, Нанкин, Китай) съгласно протокола.

Статистически анализ

Статистическият анализ на експерименталните данни беше извършен с помощта на SPSS 17.0 и GraphPad Prism 6. Данните са представени като средна стойност ± SEM. Различията между групите бяха анализирани с помощта на еднопосочен ANOVA; P ∗ 0,33 ∗ 1 000/дължина на тялото (см)]. Установихме, че индексът на Lee е значително по-висок при HFD мишки, отколкото мишки от други групи, а също така EGCG значително намалява затлъстяването при мишки (Фигура 1D). Също така определихме съотношенията на теглото на подкожната мазнина към телесното тегло (SFW/BW) и теглото на епидидималната мастна маса към телесното тегло (EFW/BW) (Фигури 1C, D). SFW/BW в групите с HFD и EGCG бяха значително по-високи от тези в контролната група; въпреки това, приложението на EGCG не намалява значително увеличаването на подкожната мастна тъкан в сравнение с групата с HFD (Фигура 1С). EFW/BW в групата с HFD са значително по-високи от тези в останалите групи (Фигура 1D). Тези резултати показват, че приложението на EGCG може да намали затлъстяването и натрупването на епидидимална мазнина при мишки.

ФИГУРА 1. EGCG намалява затлъстяването и мастното тегло при мишки. (А) Теглото на мишките след 20 седмично хранене; (Б) Индекс на Лий; (° С) съотношение на теглото на подкожните мазнини към телесното тегло; и (Д) тегло на епидидималните мазнини до телесно тегло. Данните бяха показани като средно ± SEM (н = 6/7 всяка група). ∗ P ∗∗ P ∗∗∗ P # P ## P ### P ∗ P ∗∗ P ∗∗∗ P # P ## P ### P § P ∗ P ∗∗ P ∗∗∗ P # P ## P ### P § P ∗ P ∗∗ P ∗∗∗ P # P ## P ### P ∗ P ∗∗ P ∗∗∗ P # P ## P ### P ∗∗ P ∗∗∗ P Ключови думи: EGCG, затлъстяване, бели мастни тъкани, генна експресия, AMPK

Цитиране: Li F, Gao C, Yan P, Zhang M, Wang Y, Hu Y, Wu X, Wang X и Sheng J (2018) EGCG намалява затлъстяването и печалбата от бяла мастна тъкан отчасти чрез активиране на AMPK при мишки. Отпред. Pharmacol. 9: 1366. doi: 10.3389/fphar.2018.01366

Получено: 26 април 2018 г .; Приет: 07 ноември 2018 г .;
Публикувано: 22 ноември 2018 г.

Адолфо Андраде-Чето, Национален университет на Мексико, Мексико

Марсия Хириарт, Instituto de Fisiología Celular (IFC), Мексико
Адриана Де Сиерви, Институт за биология и експериментална медицина (IBYME), Аржентина

† Тези автори са допринесли еднакво за тази работа