Устойчивост на див тип (WT) и еволюирали щамове на γ-лъчение. (А) Крива на оцеляване, показваща процента на клетките, възстановени за всеки щам след излагане на нарастващи дози, до 4 kGy. (Б) Оцеляване на всеки щам след излагане на доза от 500 Gy и възстановяване в прясна среда за 1 h, измерено от подмножество, взето от същите проби, които са били обработени за протеомика.

пълнотекстова

Протеомичен отговор на излагане на у-лъчение при WT и еволюирали щамове Exophiala dermatitidis. (А) Общ брой протеини, идентифицирани при всяко състояние. * показва значимост (ANOVA, p −5). (B) PCA на общия протеомичен набор от данни. Всяка точка представлява биологично копие с цвят, съответстващ на състоянието. (C) Диаграма на Venn, изобразяваща припокриване на протеини, идентифицирани в повече от 4 повторения на всяко състояние (> 3 за контрола Evolved). (D) Топлинна карта на значително диференциално обогатени протеини. Всеки ред представлява единичен протеин и всяка колона представлява един реплика, групиран по k-средства на групиране. Клетъчните цветове представляват стойности на изобилие в сравнение с центрирана интензивност. (E) Вулканови графики на двойни сравнения, с –log10 некоригирани p-стойности, нанесени срещу log2 пъти промяна. Черните точки представляват диференциално обогатени протеини при α = 0,05 след корекция на FDR. (WTc = WT култури без излагане на радиация; WTr = WT култури, изложени на радиация; WTEc = еволюирал щам WT без излагане на радиация; WTEr = еволюирал щам WT, изложен на радиация).

Нивата на интензивност на протеините намаляват (A) и се увеличават (B) след облъчване както в WT, така и в еволюирали щамове. Лентите за грешки представляват стандартна грешка. Звездичките показват случаи на статистически значими сравнения.

Нивата на интензивност на протеините намаляват в щамовете Evolved в сравнение с щамовете WT. Обърнете внимание, че само част от оста Y е показана, за да подчертае малките, но значителни разлики в нивата на интензитет. Лентите за грешки представляват стандартна грешка. Звездичките показват случаи на статистически значими сравнения.

Нивата на интензивност на не-рибозомни протеини се увеличиха в щамовете Evolved в сравнение с щамовете WT. Имайте предвид, че само част от оста Y е показана в горния панел, за да подчертае малките, но значителни разлики в нивата на интензитет. Лентите за грешки представляват стандартна грешка. Звездичките показват случаи на статистически значими сравнения.

Показанията на нивото на интензивност на рибозомните протеини се увеличиха в щамовете Evolved в сравнение с щамовете WT. Имайте предвид, че само част от оста Y е показана в първите три панела, за да подчертае малките, но значителни разлики в нивата на интензитет. Лентите за грешки представляват стандартна грешка. Звездичките показват случаи на статистически значими сравнения.

Резюме

1. Въведение

2. Материали и методи

2.1. Развитие и растеж на използвани гъбични щамове E. dermatitidis

2.2. Събиране и анализ на геномната последователност на еволюирал щам

2.3. Облъчване на Е. dermatitidis

2.4. Клетъчен лизис и екстракция на протеини

2.5. Протеолиза

2.6. Течна хроматография и тандемна масспектрометрия

2.7. Анализ на данни

3. Резултати

3.1. Радиационна устойчивост на див тип и еволюирали щамове на E. dermatitidis

3.2. Подпомогнат под налягане лизис на клетки на E. dermatitidis за извличане на протеин и протеомика на пушка

3.3. Протеомните отговори на два щама на E. dermatitidis към γ-радиационна експозиция

3.4. Протеини, свързани с еволюцията на по-висока радиорезистентност

4. Дискусия

2500 Gy [9]) е далеч по-устойчив на γ-лъчение (напр. Рентгенови и γ-лъчи) от A. niger (LD10 =

400 Gy [73,74]) и още по-тясно свързаната Exophiala lecanii-corni (LD10 =

250 Gy [9]), докато са събрани няколко щама на S. cerevisiae, които проявяват широк диапазон на радиационна устойчивост [10]. Тези съображения, както и запазването на функцията на повечето ДНК ензими за възстановяване през голямо еволюционно разстояние [4,67,72,75,76] предполагат, че разбирането на наблюдаваното разнообразие в γ-радиационната устойчивост е по-малко въпрос на търсене на специфични мутации вместо да се получи по-задълбочено разбиране за това как определени организми реагират на излагане на γ-лъчение.