Q.H., W.Y. и Y.L. допринесе еднакво за тази статия.

глюколипотоксичността

Статии Фигури и таблици

Фигури

експресия на miRNA в първични човешки островчета, инкубирани със или без палмитат. О: Човешките островчета (Н-островчета) бяха инкубирани със или без 0,5 mmol/L палмитат в продължение на 48 часа, когато беше извършена qRT-PCR за изследване на нивата на експресия на miRNAs от интерес. Б: Островчета бяха изолирани от db/db мишки (M-островчета) и техните контроли за отпадъци и беше извършена qRT-PCR за изследване на нивата на експресия на miRNAs от интерес. C: INS-1 клетките се инкубират със или без 0,25 mmol/L палмитат в продължение на 24 часа, когато се извършва qRT-PCR за изследване на нивата на експресия на miRNAs от интерес. * Р

Особено диференцирано изразени miRNAs влияят върху функцията на β-клетките и оцеляването. A: Топлинна карта на диференциално изразени miRNAs от интерес от микроРНК профилиране на микрочипове на човешки островчета, инкубирани със или без палмитат. Червеното и зеленото показват съответно увеличени и намалени нива на генна експресия. miR-34a беше взет като положителен контрол. B и D: Олигонуклеотидните дуплекси, съответстващи на зрелите надрегулирани miRNAs, които представляват интерес, както и miR-34a бяха трансфектирани в β-TC-6 клетки в продължение на 48 h и след това инсулиновата секреция и съдържанието на инсулин бяха оценени чрез GSIS анализ. C и E: Анти-miRNA молекулите, които специфично инхибират понижените регулирани miRNAs, представляващи интерес, бяха трансфектирани в β-TC-6 клетки в продължение на 48 h, когато секрецията на инсулин и съдържанието на инсулин бяха оценени чрез GSIS анализ. F и G: Олигонуклеотидните дуплекси, съответстващи на зрелите надрегулирани miRNAs, които представляват интерес, както и miR-34a и анти-miRNA молекулите, които специфично инхибират понижените регулирани miRNAs, представляващи интерес, бяха трансфектирани в β-TC-6 клетки за 72 часа и след това клетъчната жизнеспособност беше оценена чрез анализ CCK-8. H и I: Тези, които са имали значителен ефект върху жизнеспособността на клетките на β-TC-6, са избрани за оцветяване по Hoechst 33342 и броене на пикнотични ядра. * Р

Понижаване на регулирането на miR-299-5p чрез глюколипотоксичност ex vivo и in vitro. A: Експресиите на miR-299-5p в островчетата от 8- до 12-седмични db/db мишки и техните контролни групи, съответстващи на възрастта, бяха измерени чрез qRT-PCR. * Р

инхибирането на miR-299-5p нарушава функцията на β-клетките. A и B: Анти-nc или anti-miR-299-5p се трансфектира в първични миши островчета (М-островчета) за 24 часа и след това секрецията на инсулин и съдържанието на инсулин в първичните миши островчета (М-островчета) се анализират чрез GSIS анализ. C и D: Anti-nc или anti-miR-299-5p се трансфектира в MIN6 клетки в различни дози в продължение на 12 часа и след това секрецията на инсулин и съдържанието на инсулин се анализират чрез GSIS анализ. E и F: MIN6 клетките бяха трансфектирани с nc или miR-299-5p в продължение на 24 часа, последвано от лечение с високо съдържание на глюкоза и палмитат в продължение на 24 часа, когато бяха анализирани секрецията на инсулин и съдържанието на инсулин. * Р

Нокдаунът на експресията на miR-299-5p води до β-клетъчна апоптоза. О: MIN6 клетките бяха трансфектирани с anti-nc или anti-miR-299-5p в продължение на 72 часа, когато беше извършен анализ на ДНК стълба. B: PARP1, разцепен PARP1 и нива на β-тубулин в MIN6 клетки, трансфектирани с anti-nc или anti-miR-299-5p в продължение на 24 и 48 h се анализират чрез Western blot. C и D: Anti-nc или anti-miR-299-5p се трансфектира в първични острови на плъхове на Sprague Dawley (R-островчета). След трансфекция в продължение на 48, 72, 96 и 120 часа се извършва тройно оцветяване за DAPI, TUNEL и инсулин. Снимки на всеки остров са направени с лазерен сканиращ конфокален микроскоп. Скала = 40 μm. Преброени са TUNEL-положителни β-клетки. * Р

Валидиране на целеви гени на miR-299-5p. О: 3'UTR последователностите на четирите целеви гена, за които се прогнозира, че включват miR-299-5p MRE, са подравнени с miR-299-5p и са изброени както последователности от див тип (wt), така и мутант (mt). В: Анализът на луцифераза репортер се извършва 24 часа след MIN6 клетъчна котрансфекция с wt или mt репортер плазмиди, PRL-SV40 плазмид и nc, или miR-299-5p. ** Р

Делецията на перп частично облекчава вредните ефекти на инхибирането на miR-299-5p и глюколипотоксичността върху β-клетките. О: Изолирани островчета от 8-седмични db/db мишки и техните контролни съдове бяха събрани и нивата на протеин на PERP и β-тубулин бяха измерени чрез Western blotting (n = 8-10). B: Нивата на протеин на PERP и β-тубулин в първични островчета, изолирани от плъхове от див тип Sprague Dawley, хранени с HFD или нормална диета (ND) в продължение на 4 седмици, се измерват отделно чрез Western blotting (n = 4). С: Изолирани човешки островчета (Н-островчета) се инкубират със или без палмитат (0,5 mmol/L) в продължение на 48 часа, когато се извършва qRT-PCR за измерване на нивото на иРНК на Perp. ** Р

PERP регулира секрецията на инсулин. А и В: MIN6 клетките бяха трансфектирани с вектор плазмид или Perp плазмид в продължение на 24 часа, когато секрецията на инсулин и съдържанието на инсулин бяха измерени чрез GSIS анализ (n = 8). C: MIN6 клетките бяха котрансфектирани с EGFP плазмид или EGFP-PERP плазмид и NPY-mOrange за 48 h, когато изображенията на живи клетки бяха заснети при нормални условия. Показани са представителни изображения на живи клетки. Мащабни ленти = 2 μm. D: MIN6 клетките бяха котрансфектирани с EGFP-PERP плазмид и NPY-mOrange за 48 h, когато изображенията на живи клетки бяха заснети при условия на ниска (2 mmol/L) и висока глюкоза (20 mmol/L) стимулация за 1 з. Показани са представителни изображения на живи клетки. Мащабни ленти = 2 μm. Стрелките показват типично драматично натрупване на PERP близо до ядрата на MIN6 клетките. ** Р