Последни статии

международно

Ефект на птеростилбен (PTE) върху клетъчната пролиферация и експресия на маркери на стволови клетки в ракови клетъчни линии. (А) Клетъчната пролиферация се оценява чрез анализ на 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -5- (3-карбоксиметоксифенил) -2- (4-сулфофенил) -2Н-тетразолий, вътрешна сол (MTS). Клетките се третират с PTE в продължение на 48 часа. (В) Апоптозата се оценява чрез оцветяване с етидиев бромид (EtBr). Вмъкнете, CT26 клетки, третирани с PTE в продължение на 48 часа, бяха оцветени с EtBr. Глава със стрелка, тяло с апоптоза. Мащабна лента, 20 µM. (С) експресия на иРНК на маркери на стволови клетки; нуклеостемин (NS), CD44, Kip2 и CD133 бяха изследвани чрез RT-PCR. Глицералдехид 3-фосфат дехидрогеназата (GAPDH) беше усилена за стандарт за зареждане. Долните панели бяха полуколичествени за експресия на маркер на стволови клетки, изследвани чрез RT-PCR. Лента за грешки, стандартно отклонение от три независими проверки. Статистическата разлика е изчислена чрез обикновен дисперсионен анализ. * Статистическа разлика от PTE (0 µM). PTE, птеростилбен; IC50, 50% инхибиторна концентрация.

Ефект на PTE върху образуването на сфери в раковите клетъчни линии. Образуването на сфери е изследвано в 10 000 клетки със или без третиране с PTE в продължение на 7 дни. (А) CT26 клетки. (B) HT29 клетки. Картините бяха изображения на фазово-контрастна микроскопия. Лента за грешки, стандартно отклонение от три независими проверки. Статистическата разлика е изчислена чрез обикновен дисперсионен анализ. Мащабна лента, 50 μm. TE, птеростилбен.

Ефект на PTE върху оксидативния стрес в раковите клетъчни линии. (А) Нивата на 4-хидроксиноненал (4-HNE) бяха измерени чрез ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA). Клетките се третират с PTE в продължение на 48 часа. (В) експресията на иРНК на хем оксигеназа-1 (НО-1) беше изследвана чрез RT-PCR. GAPDH се усилва като стандарт за зареждане. Десният панел беше полуколичествен за експресия на HO-1, изследван чрез RT-PCR. Лента за грешки, стандартно отклонение от три независими проверки. Статистическата разлика е изчислена чрез обикновен дисперсионен анализ. PTE, птеростилбен; HNE. Хидроксиноненал; HO, хем оксигеназа.

Ефект на PTE върху митохондриалната функция в раковите клетки. Митохондриалното мембранно напрежение и митохондриално реактивните окислителни видове (ROS) бяха изследвани съответно от тетраметил родамин (TMRE) и дихидрородамин (DHR). Клетките се третират с PTE в продължение на 48 часа. (А) Флуоресцентни изображения на TMRE и DHR. Изображението TMRE беше обединено с изображение с контраст на фаза. Мащабна лента, 25 μm. (B, C) Полуколичествено определяне на митохондриалния мембранен потенциал (TMRE) и митохондриалната ROS (DHR), съответно. Лента за грешки, стандартно отклонение от три независими проверки. Статистическата разлика е изчислена чрез обикновен дисперсионен анализ. PTE, птеростилбен; TMRE, тетраметил родамин; ROS, реактивни окислителни видове; DHR, дихидрородамин 123; FI, интензивност на флуоресценция.

Ефект на витамин Е върху индуцирания от PTE оксидативен стрес в раковите клетъчни линии. Клетките се третират със или без PTE (10 μM) и/или витамин Е (10 μM) и/или N-ацетил-L-цистеин (NAC) (5 mM) в продължение на 48 часа. (А) Митохондриалната ROS беше оценена от MitoROS (червен цвят). Изображението на MitoROS беше обединено с изображение с контраст на фазата. (B) Клетъчната пролиферация се оценява от MTS. (C) Полуколичествено определяне на ROS на митохондриите. С, контрол; P, PTE; PE, PTE + витамин Е; PN, PTE + NAC. Лента за грешки, стандартно отклонение от три независими проверки. Статистическата разлика е изчислена чрез обикновен дисперсионен анализ. Мащабна лента, 25 μm. PTE, птеростилбен; ROS, реактивни окислителни видове; FI, интензивност на флуоресценция; NAC, N-ацетил-L-цистеин; MTS, 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -5- (3-карбоксиметоксифенил) -2- (4-сулфофенил) -2Н-тетразолий.

Кръговият дихроизъм (CD) спектри на (а) меден (II) и (b) цинков (II) комплекси с TetraHPRG във вода (рН = 7,5), при различно молно еквивалентно моларно съотношение на метал към лиганд е 1: 1 и 2: 1; [L] = 1 × 10 −5 M).

Диаграма на разпределение на видовете за комплексите Zn 2+ с TetraHPRG при моларно съотношение 0,5: 1 (M: L). [Zn 2+] = 1 × 10 −3 M.

CD спектри Hka, TetraHPRG и Hka/TetraHPRG във вода (pH = 7,5), [L] = 1 × 10 −5 M.

CD спектри на (a) меден (II) и (b) цинков (II) комплекси с Hka във вода (pH = 7.5), при различни мол еквиваленти на метал (моларно съотношение метал към лиганд е 1: 1 и 2: 1; [L] = 1 × 10 −5 M).

Различни спектри на CD на (a) Hka/TetraHPRG/Cu 2+ тройна система минус CD спектри от системи TetraHPRG/Cu 2+ и CD спектри на Hka/Cu 2+ при съотношения на метал към лиганд 1: 1 и (b) CD Различни спектри на тройната система Hka/TetraHPRG/Zn 2+ минус нормализирани CD спектри от системите TetraHPRG/Zn 2+ и CD спектри на Hka/Zn 2+ при съотношения на метал към лиганд 1: 1.

Етапи на ELISA анализ в условия на съвкупление (надолу) и предварително третиране (нагоре). HKa * (активиран кининоген), Me 2+ (Cu 2+ или Zn 2+), Av-HRP (авидин, конюгиран с хрянова пероксидаза), TMB (3,3-5,5-тетраметилбензидин).

Ефект на васпина върху съзряването на ядрените ооцити и секрецията на прогестерон (Р4). COC (30/група/експеримент) са избрани след морфологично изследване на материал, събран от яйчниците, взети от 100 прасета (15 фоликула/яйчник). Свински кумулусно-ооцитни комплекси (COC) се култивират в продължение на 22 h или 44 h в среда за зреене в присъствието или отсъствието на васпин (1 ng/ml), след което се разделят механично на ооцити и кумулусни клетки. Ядрените етапи на узряване (A) се анализират чрез оцветяване Hoechst 33342 или DAPI (B, D), докато средата се събира и нивата на P4 се измерват с ELISA (C, E). Съдържанието на ДНК, показано със стрелки. Експериментите се провеждат независимо и се повтарят три пъти (n = 3). Данните са нанесени като средно ± SEM от три независими експеримента. Значимостта между контролната и васпиновата група е обозначена с * p p 0,01; GV (стадий на зародишен носител), метафаза-I на мейоза (мета-I), метафаза-II на мейоза (мета-II).

Участие на митоген-активираната киназа (MAP3/1) и AMP-активираната киназа (PRKAA1) в ефекта на васпина върху in vitro съзряването на ооцитите. COC (50/група/експеримент) са избрани след морфологично изследване на материал, събран от яйчниците, взети от 100 прасета (15 фоликула/яйчник). Свински кумулус-ооцитни комплекси (COC) се култивират в продължение на 44 h в среда за зреене с PD98059 (100 μM), инхибитор на MAP3/1 киназа или Съединение C (1 μM), инхибитор на PRKAA1 киназа самостоятелно или с васпин (1 ng/ml). COCs се разделят механично на ооцитни и кумулусни клетки и етапи на ядрено узряване, анализирани чрез DAPI оцветяване (A, C), докато средата е събрана и нивото на прогестерон (P4) е измерено чрез ELISA (B, D). Експериментите се провеждат независимо и се повтарят три пъти (n = 3). Данните са нанесени като средно ± SEM от три независими експеримента. Статистически анализ беше извършен при р 0,05; метафаза-II на мейоза (мета-II), без значителни (ns).

Модел на действието на васпина върху in vitro съзряването на свинските ооцити. Vaspin стимулира ядреното съзряване на ооцитите, както и секрецията на прогестерон (P4) чрез активиране на митоген-активирана киназа (MAP3/1) и инхибиране на AMP-активирана киназа (PRKAA1); метафаза-II на мейоза (мета-II); ↑ увеличение; ↓ намаляване.

Sanger валидиране на избрани варианти. Черният цвят показва запазени региони, сивият и белият цвят представляват мутантни региони.

Мисенс мутация в рамките на глутатион S-трансферазен протеин. (A) MSA на 16 Brucella глутатион S-трансферазни последователности. Позиция 83, маркирана с червен правоъгълник, се запазва като аргинин. (B) Прозитните мотиви са показани върху моделната структура на глутатион S-трансфераза (GST-C TER в червено, GST-N TER в жълто). Глутатион в пурпурни сфери, Arg83 в зелени пръчки. (C) Глутатион S-трансферазата се оцветява според консервацията. Глутатион в пурпурни сфери, Arg83 в пръчки. Този анализ се основава на 150 хомоложни последователности от Uniref90.

Мисенс мутация в рамките на фосфоманомутазата. (A) MSA на 41 последователности на Brucella Phosphomannomutase. Представена е само първата фосфоглюкомутаза-фосфоманомутаза (PGM-PMM) _ (остатъци 1–140). Gly103, маркиран с черен правоъгълник, се запазва чрез всички хомолози. (B) Протеиновите домейни са показани на моделната структура на глутатион S-трансфераза (PGM-PMM-I в розово, PGM-PMM-II в тъмно червено, PGM-PMM-III в червено, PGM-PMM-IV в оранжево ). Глюкоза-6-фосфат в пурпурни сфери, каталитичен фосфо-хистидин 104 в зелени въглероди, глицин 103 в жълти въглероди. (C) PGM/PMM се оцветява според консервацията. Глюкоза-6-фосфат в пурпурни сфери. Позиции 103 и 104 в стикове. Този анализ се основава на 150 хомоложни последователности от Uniref90.

Целоклетъчен имуноанализ, демонстриращ липсата на повърхностен О-полизахарид (O-PS) в естествените груби ваксинални щамове Brucella melitensis Rev.1 71036 и 44457. Оценката на O-PS на повърхността на Brucella се определя с помощта на пречистено мише анти-Brucella O-PS моноклонално антитяло, както е описано в раздел 3. B. melitensis Rev.1 Elberg (гладък фенотип) е използван като положителна контрола и B. canis (груб фенотип) като отрицателна контрола (**** = p t тест).

а) Доменна структура на семейството KMT2 и основните субединици на комплексите KMT2. Цифрите показват броя на аминокиселините. KMT, хистон-лизин N-метилтрансфераза; ASH2L, отсъстващ, малък или хомеотичен 2-подобен; DPY30, Dumpy-30; RBBP5, ретинобластом-свързващ протеин 5; WDR5, WD, съдържащ повторение протеин 5; AT-кука, аденозин-тимидин-кука; CXXC, Цинков пръст-CXXC домейн; FYRN/FYRC, богат на фенилаланин и тирозин регион (N- и С-терминал); HMG, група с висока мобилност; HWH, домейн спирала-крило-спирала; N-SET, N-терминал на SET; PHD, растителен хомедомен; Post-SET, C-терминал на SET; RRM, мотив за разпознаване на РНК; SDI, Sdc1-Dpy-30 взаимодействие; SET, Su (var) 3-9, Enhancer-of-zeste и Trithorax; SPRY, SPla и домена на рианодиновия рецептор; и WD повторение, повторение триптофан-аспарагинова киселина. (б) Структурата на комплекса KMT2. Ензимът и ядрените субединици на комплекса са показани на диаграмата. Взаимодействията между отделните подразделения са маркирани със сини линии. Субединици, специфични за отделни KMT2 комплекси, които не са показани на фигурата, взаимодействат с аминокрая на KMT2s. WIN мотив, WDR5 мотив за взаимодействие.

Специализация на КОМПАС и КОМПАС-подобни комплекси при бозайници. Комплексите KMT2F/KMT2G, наричани комплекси COMPASS, са най-подобни на комплекса дрожди Set1. Тези комплекси са отговорни главно за общия геном на H3K4me3. Комплексите KMT2A/KMT2B и KMT2C/KMT2D се означават като COMPASS и са най-сходни с комплекса Drosophila Trithorax и Drosophila Trithorax, съответно. Комплексите KMT2A/KMT2B са необходими за три- и диметилирането на H3K4 при по-малко от 5% от промоторите и основно регулират гените за развитие. Комплексите KMT2C/KMT2D заемат подобрители и са отговорни за монометилирането на H3K4.

Механизми на набиране на H3K4 метилтрансфераза в хроматин. Комплексите KMT2 се набират и стабилизират върху хроматин чрез комбинация от механизми: (а) взаимодействия със специфични за последователността транскрипционни фактори, (б) асоцииране с базалната транскрипционна машина, (в) взаимодействие с дълги некодиращи РНК (lncRNAs), (d) разпознаване на хистоновата модификация и (д) директно взаимодействие с ДНК. За справки вижте текста.

Известни писатели, четци и гумички за метилиране на H3K4.

Дизайн на изследването. Общо 31 мишки от див тип (WT) и 33 p66shc нокаути (p66KO) са били подложени на белодробна артериална лента (PAB) или фалшива хирургия. Три седмици по-късно всички животни бяха подложени на ехокардиографска (ехо) оценка. На следващия ден се изследва или образуването на митохондриални реактивни кислородни видове (ROS) или кардиомиоцитна (CM) функция. По-нататък мишките бяха подложени на хемодинамични (хемо) измервания с последващо определяне на вентрикуларните тегла.

Представителни вериги в стационарно състояние от анализ на налягането-обем, извършен при (A) нелекувани нормотензивни, трансгенно-отрицателни плъхове Hannover Sprague-Dawley (HanSD), (B) HanSD плъхове две седмици след последната инжекция на доксорубицин (т.е. в края на експериментален протокол), (C) нелекуван хипертоник, Ren-2 трансгенни (TGR) плъхове и (D) TGR след приложение на доксорубицин. ESPVR, съотношение на обема на систоличното налягане (пунктирана червена линия). EDPVR, отношение на обема на крайното диастолично налягане (синя линия).

Схема, показваща широкия диапазон на пост-транслационна модификация на протеини с биологично значение.

Снимка на отличителните белези на гликозилирането при рак [15].

Работен поток на изследванията за гликозилиране, започвайки от мокър лабораторен анализ - инструментален анализ кулминация в изчисления, базирани на биоинформатика (анализ на данни).

Роля на ангиогенезата и замесени фактори. Ангиогенезата помага за растежа на тумора чрез прехвърляне на хранителни вещества, но също така и при неговите метастази. Таблицата показва ангиогенни фактори, които, когато се редуцират от инхибитори, предотвратяват растежа на тумора и метастазите.

Структурни характеристики на аминокиселинната последователност, изведена за AmOctα2R. (а) Профил на хидрофобност на AmOctα2R. Профилът е изчислен според алгоритъма на Kyte и Doolittle [36], като се използва размер на прозореца от 19 аминокиселини. Пикове с резултати над 1,6 (пунктирана линия) показват възможни трансмембранни (TM) области; (б) прогнозиране на TM домейни със TMHMM сървър v. 2.0 [37]. Putative TM домейните са обозначени в червено. Извънклетъчните региони са показани с лилава линия, а вътреклетъчните - със синя линия; (c) цветно кодиран (дъга) триизмерен (3D) модел на рецептора, както е предсказано от Phyre2 [38]. Извънклетъчният N-край (N) и вътреклетъчният С-край (C) са маркирани. Обърнете внимание, че първите 216 аминокиселинни остатъка от AmOctα2R са пропуснати в тази симулация.

Експресия на AmOctα2R-хемаглутинин А (НА) в flp ™ клетки. (а) Western blot на мембранни протеини (30 ug) от flp ™ клетки, експресиращи AmOctα2R-HA рецептори, не са третирани (път 1) или третирани с PNGaseF (път 2). Като контрола, 30 ug мембранни протеини от нетрансфектирани flp ™ клетки (път 3) се разделят чрез електрофореза на натриев додецил сулфат-полиакриламиден гел (SDS-PAGE) и се попиват до мембрана от поливинилиден дифлуорид (PVDF). Блокът се изследва с антитяло на плъх ((хемаглутинин А) HA). (b) Същото петно, както е показано в (а), впоследствие се изследва с антитяло, насочено срещу С-края на цикличния нуклеотидно-затворен (CNG) канал. Размерите на маркерните протеини в kDa са дадени в левия край.

Зависими от концентрацията ефекти на октопамина върху вътреклетъчния cAMP в AmOctα2R-HA-експресиращи flp ™ клетки. Относителната флуоресценция (съответстваща на количеството сАМР) се дава като процент от стойността, получена с 10 цМ NKH 477 (= 100%), водоразтворим аналог на форсколин. Всички измервания бяха извършени в присъствието на 100 цМ изобутилметилксантин (IBMX). В диапазона от 10 -9 M до 10 -6 M, октопаминовото активиране на AmOctα2R-HA доведе до зависимо от концентрацията намаляване на флуоресцентния сигнал. Обратно, увеличение на сигнала на флуоресценция се наблюдава при концентрации на октопамин 3 × 10 -6 М и по-високи. Точките с данни представляват средната стойност ± SD на четирикратни определяния.

Зависими от концентрацията ефекти на октопамина върху относителната флуоресценция в нетрансфектирани (контролни) flp ™ клетки. Кривите концентрация-отговор за октопамин са установени при отсъствие (отворени кръгове) или присъствие (запълнени кръгове) на 10 µM NKH 477. Относителната флуоресценция е дадена като процент от стойността, получена с 10 μM NKH 477 (= 100%). Всички измервания бяха извършени в присъствието на 100 μM IBMX. И при двете условия по-високите концентрации на октопамин водят до увеличаване на флуоресценцията. Точките с данни представляват средната стойност ± SD от четири стойности.

Криви на концентрация-отговор за агонисти на вътреклетъчно ниво на cAMP в AmOctα2R-HA-експресиращи flp ™ клетки. Относителната флуоресценция (съответстваща на количеството сАМР) се дава като процент от стойността, получена с 10 цМ NKH 477 (= 100%). Всички измервания бяха извършени в присъствието на 100 цМ IBMX. Точките с данни представляват средната стойност ± SD на четири стойности от типичен експеримент.

Ефекти на предполагаемите антагонисти върху активирания с тирамин AmOctα2R-HA. Концентрационните серии на веществата се прилагат в присъствието на 10 цМ NKH 477, 10 цМ тирамин и 100 цМ IBMX. Използваните лиганди бяха (а) фнетоламин, (б) епинастин, (в) майнсерин и (г) йохимбин. Данните представляват средната стойност ± SD на четири стойности от типичен експеримент. Всички определяния се повтарят независимо поне три пъти.