1 Училище за акупунктура и туина, Университет по традиционна китайска медицина в Ченгду, Ченду 610075, Китай

zusanli

2 People’s Hospital от Qingbaijiang District of Chengdu City, Chengdu 610300, China

3 Китайска болница по медицина, свързана с Югозападния медицински университет, Луджо 646000, Китай

Резюме

1. Въведение

Ревматоидният артрит (RA) е хронично, системно и сложно автоимунно остеопатично заболяване. Неговата загадъчна патогенеза се характеризира с персистиращ синовит и прогресивна деградация на хрущяла и ерозия на костите, което води до тежка инвалидност с течение на времето [1]. RA е най-често при жените и прогнозното разпространение е 0,5-1% при възрастното население [2]. Въпреки че етиологията на RA понастоящем не е напълно изяснена, се предлага комбинация от генетични и екологични рискови фактори да играят важна роля в патогенезата на RA [3]. Целта на лечението с RA е ремисия или намаляване на активността на заболяването, като в крайна сметка забавя или предотвратява прогресията на деструкцията на ставите.

Съвременните терапевтични средства срещу RA, противовъзпалителни или биологични агенти, имат странични ефекти (сърдечно-съдови и стомашно-чревни усложнения) или се развиват в лекарствена резистентност [13, 14]. Като се има предвид тази предпоставка, перспективата на това проучване е да изследва друг терапевтичен метод, който може да омаловажи патогенезата на RA. Moxibustion, традиционно китайско лекарство, обикновено се използва в клиниките като комбинация от фармакологичен материал и нефармакологични практики. Предишни проучвания демонстрират, че моксибустията намалява хроничната възпалителна реакция при няколко състояния на мускулно-скелетната болест, включително остеоартрит на коляното [15], цервикална спондилоза [16] и първична остеопороза [17]. Тези изследвания свързват моксибуцията с отстраняването на костния метаболизъм при възпалителни заболявания; остават обаче въпросите дали пригарянето облекчава увреждането на хрущяла при RA.

В настоящото изследване използвахме хистологично оцветяване и полимеразна верижна реакция в реално време (PCR в реално време), за да наблюдаваме ефектите от моксибустията върху разграждането на хрущяла и експресията на иРНК на RANKL и OPG в колянните стави на RA зайци, за да открием защитните ефекти и предполагаем основен механизъм на моксибуция върху RA.

2. Материали и методи

2.1. Животни

Тридесет скелетно зрели, мъжки (15) или женски (15), японски бели зайци (тегло, 2,5 ± 0,25 кг) са получени от Център за експериментални животни към Университета по традиционна китайска медицина в Ченгду и са аклиматизирани за една седмица преди експерименталните процедури. На всички животни беше разрешен свободен достъп до храна и вода ad libitum при контролирана стайна температура (23 ± 1 ° C) с 12-часови цикли светлина-тъмнина. Всички процедури с животни бяха одобрени от Институционалната комисия по етика.

2.2. Установяване на RA при зайци

След една седмица на аклимация, зайците бяха разделени на случаен принцип в 3 групи (n = 10 за всяка група): контролна група, RA група и RA с група за моксибуция. Заешки модел на RA е установен чрез инжектиране на пълния адювант на Freund (FCA; Sigma-Aldrich, Сейнт Луис, Мисури) в задушените коленни стави, както е описано в предишно проучване [18]. FCA съдържа мъртви мъртви бактерии микобактерии туберкулоза в течен парафин в концентрация 10 mg/ml. На всички зайци, с изключение на тези от контролната група, се инжектира еднократна доза FCA (0,25 ml/kg) в триъгълната област, образувана от пателарното сухожилие, долния ръб на пателата и тибиалното плато на неподвижните коленни стави. Всички животни развиват признаци на артрит като подуване, зачервяване и ограничено движение на коляното. Зайците от контролната група получават същия обем физиологичен разтвор.

2.3. Метод на моксибуция

Лечението с моксибуция се извършва 7 дни след инжектирането на FCA (Фигура 1 (а)). В настоящото изследване местоположението на акупунктурите се определя въз основа на стендовете на експерименталната акупунктура [19]. Zusanli (ST36) е разположен в горната една пета точка на дорзолатерала на крака, а Shenshu (BL23) е разположен във втория лумбален спинозен процес в съседство с отворени 1,5 cm (Фигура 1 (b)). Зайците бяха фиксирани към експерименталната маса и козината на кожата беше обръсната, за да се разкрият акупунктурните точки. Използваните от животни мокса пръчки (диаметър: 8 мм, дължина: 20 см, Nanyang Dongsheng Moxibustion Technology Development Co., Ltd., Китай) са изгорени, за да се направи смесване 2-3 см над точките, за да се избегне изгарянето на кожата, което може да бъде свързани с реакцията на стрес. Лечението с моксибуция се извършва в продължение на 30 минути на ден в продължение на последователни 5 седмици и има 1-дневна почивка на седмия ден от всяка седмица (Фигура 1 (а)). Зайците в контролната група бяха ограничени за 30 минути без обработка с моксибуция.

2.4. Имунохистохимични експерименти

Изображенията са получени с помощта на обърнат микроскоп, оборудван с цифрови камери (фотомикроскоп Olympus, Токио, Япония). Хистологичният анализ е проведен от друг експериментатор, който е заслепен за експерименталната манипулация във всяка от трите групи. Деградацията на хрущяла е оценена според оценката на Манкин [20], която определя оценки, вариращи от 0 за нормален хрущял до 5 за най-тежките увреждания. За оценка на ставната структура, 0 до 5 се отнасят до нормална структура, неправилни пукнатини на повърхността, пукнатини, достигащи преходен слой, пукнатини, достигащи радиационен слой, и пукнатини, достигащи калцифициран слой и абцизия на хрущялния слой, съответно. За оценка на хрущялните клетки, 0 до 3 се отнасят до нормален брой хрущялни клетки, дифузно увеличаване на хрущялните клетки, поява на голям брой клетъчни клъстери и очевидно намален брой на клетките, съответно. За оценка на целостта на tidemark, 0 до 2 се отнасят съответно до нормален tidemark, множествен tidemark и субхондрални кръвоносни съдове, нахлуващи в tidemark. За оценка на ефектите от моксибустията върху остеокласта, остеокластите се характеризират като RANKL - клетки и броят на остеокластите се отчита.

2.5. PCR експеримент в реално време
2.6. Статистически анализ

Данните бяха изразени като средната стойност ± SD. Резултатите бяха анализирани чрез статистически софтуер SPSS 19.0. Разликата между групите беше оценена чрез еднопосочен ANOVA тест, последван от LSD post hoc сравнение. Тестът на Крускал-Уолис, последван от post hoc тест на Mann-Whitney U, се използва, когато липсва хомогенност на отклоненията. P
а)
б)
(° С)
(д)
(д)
(е)

За да разследваме дали моксибустията има защитни ефекти върху RA, извършихме моксибуция на Zusanli (ST36) и Shenshu (BL23) при RA зайци (Фигура 1 (b)). 5 седмици след моксибустията, ние оценихме патологичните промени в хрущяла, използвайки HE оцветяване. Оцветяването с HE разкри, че патологичните промени в хрущяла са отслабени след лечение с моксибуция. В сравнение с RA групата, нивото на увреждане на хрущялната повърхност, подреждането на хондроцитите и целостта на tidemark са значително подобрени (Фигура 2 (c)). Освен това е имало по-малко разрушаване на субхондралните костни трабекули в групата за придвижване в сравнение с групата с RA (Фигура 2 (f)).

Промените в хрущяла се оценяват съгласно системата за оценка на Манкин. Оценяват се съответно оценките на Манкин за ставната структура, хрущялните клетки и целостта на tidemark. В сравнение с контролната група, оценката на Манкин е значително увеличена в групата с RA (Фигура 3, група с RA: структура на хрущяла: 3,4 ± 0,69; клетки на хрущяла: 2,2 ± 0,79; целостта на tidemark: 1,5 ± 0,53; общ резултат: 7,1 ± 1,37). Въпреки това, групата за моксибуция показа значително по-ниски резултати на Манкин от тази в групата с RA (Фигура 3, група за моксибуция: структура на хрущяла: 1,6 ± 0,97; клетки на хрущяла: 1,5 ± 0,71; целостта на марката: 0,6 ± 0,52; общ резултат: 3,7 ± 1,70) . Тези резултати предполагат, че лечението с моксибуция отслабва патологичните промени на RA.


P
а)
б)
(° С)
(д)

P
а)
б)