• Намерете този автор в Google Scholar
  • Намерете този автор в PubMed
  • Потърсете този автор на този сайт
  • За кореспонденция: [email protected]

РЕЗЮМЕ

Opisthorchis viverrini е важен хранителен трематод в Югоизточна Азия. Инфекцията причинява значителна заболеваемост по отношение на хепатобилиарни заболявания и холангиокарцином. Целта на това проучване е да се подобри чувствителността на PCR-базирана диагноза на инфекция с O. viverrini. Използва се нов протокол за екстракция на фекална ДНК за откриване на ДНК на O. viverrini с използване на цетилтриметил-амониумбромид за отстраняване на PCR инхибитора и се сравнява с метода на търговския комплект за изпражнения. Чувствителността на новия тест е 79,3%, в сравнение с 44,8% от предишния метод (P 0,05). От отрицателните проби за яйца на O. viverrini (n = 21), 6 (28,6%) са положителни чрез PCR. Когато само тези проби са положителни за яйца O. viverrini (n = 58), 46 (79,3%) са положителни чрез PCR. По отношение на FECT, общата чувствителност на модифицирания PCR е 79,3%, а специфичността е 71,4%. Положителните и отрицателните прогнозни стойности са съответно 88,5% и 55,6%.

подобряване

Както е показано в таблица 2, в рамките на различни групи с интензивност на O. viverrini, честотата на PCR положителност от модифицирания протокол, използван в това проучване, е била постоянно по-висока от тази, наблюдавана в предишния доклад (15). Общо разпространението на O. viverrini от 65,8%, получено чрез нашата PCR, е значително по-голямо от това, получено по предишния протокол (35,4%, 28 от 79 фекални проби) (P 0,05). Установени са два PCR-положителни резултата в случай със смесена инфекция на анкилостоми и S. stercoralis и друг случай с инфекция с T. trichiura. Не се наблюдава положителна PCR при три случая на инфекция с анкилостоми. Тъй като фекалното изследване не е идеалният „златен стандарт“ и броят на пробите с инфекции с единични паразити в това проучване е малък, не е допустимо да се извършва цялостен анализ на кръстосаната реактивност на PCR диагнозата.

Сред пробите, които са положителни за O. viverrini както от анализи на яйцеклетки, така и чрез PCR, 34 (79%) попадат в групата на леките инфекции (1000 до 9 999 EPG). Въпреки това, несъответствия в резултатите от теста бяха получени с 12 проби, които бяха положителни за яйца, но отрицателни чрез PCR. Осем проби (75%) са имали брой яйца от 1000 EPG. Тенденцията на положителна корелация между резултатите от PCR теста и броя на яйцата е наблюдавана по подобен начин в предишен доклад (15). Въпреки това не може да се изключи възможността яйцата, наблюдавани в някои екземпляри, да не са O. viverrini, но други тънки чревни метили (6, 7).

По отношение на разходите, новият PCR протокол, установен в това проучване, е по-икономичен от предишния протокол, тъй като не е необходим търговски комплект (15). По отношение на времето за обработка на пробата, необходимо за попълване на PCR теста, протоколът отне около 8 часа, докато предишният протокол, използващ търговския комплект за изпражнения, отне приблизително 7 часа. Новият протокол се нуждае от час по-дълго за смилане на протеиназа К и екстракция на фенол-хлороформ.

Съобщава се за алтернативен метод за почистване с използване на KOH и комбинация от захароза и KCl, последван от автоклавиране или хомогенизиране за разбиване на яйцата, а границата на откриване е 10 EPG в PCR диагнозата на Clonorchis sinensis (9). В нашето проучване най-ниският открит брой на яйца е 31 EPG в случай на яйцеположителни проби и вероятно по-нисък от този в случай на яйце отрицателни проби. Намирането на PCR положителни резултати в яйце-отрицателни проби е в съответствие с метода за откриване на копроантиген, базиран на моноклонални антитела, който също демонстрира положителни реакции в яйце-отрицателни случаи (11). Освен това в аутопсионно проучване само 30% от хората, които са приютили по-малко от 10 възрастни червея O. viverrini, отделят яйца, които се откриват в изпражненията им, докато по-голямата част от тях (70%) са с отрицателни яйца (13). Това, че получихме PCR-положителни резултати с явно отрицателни проби, предполага, че диагнозата чрез нашия метод на PCR е по-чувствителна от метода на фекално изследване, особено в групата на светлината.

Откриване на ДНК на O. viverrini в човешки фекални проби чрез PCR. Показано е оцветяване с етидиев бромид на PCR продукти, разделени в 2% агарозен гел. (а) Яйчни положителни образци на O. viverrini. Лента М е 100-bp маркер, лента P е положителен контрол. Пътека 1, 442 EPG; път 2, 1120 EPG; път 3, 180 EPG; лента N, отрицателен контрол. (б) Паразитно-отрицателни образци. Пътека М, маркер за 100 bp; лента P, положителен контрол. Линии 1 до 3 съдържат ДНК от паразитно-отрицателни образци. Пътека N, отрицателна контрола.

Връзка между диагнозите на инфекция с O. viverrini чрез PCR и метода FECT в 79 фекални проби

Диагностика на инфекция с O. viverrini чрез PCR в групи с различна интензивност въз основа на предишния протокол а и новия протокол, описани в това проучване

Класификация на резултатите от PCR теста за диагностициране на инфекция с O. viverrini според състоянието на инфекция, определено по метода FECT в 79 проби

ПРИЗНАВАНИЯ

Това изследване беше подкрепено от Изследователския център за чернодробния метил и холангиокарцинома (LFCRC); Медицинският факултет, Висше училище, Университет Khon Kaen, Khon Kaen, Тайланд; и Европейската комисия чрез проекта TREMKIT (ICA4-2000-10163).