Надежда С. Сулихан, Мартин Гилбърт, Екатерина Ю. Блидченко, Сергей В. Найденко, Галина В. Иванчук, Татяна Ю. Горпенченко, Михаил В. Алшинецкий, Елена И. Шевцова, Джон М. Гудрич, Джон CM Луис, Михаил С. Гончарук, Олга В. Уфиркина, Вячеслав В. Рожнов, Сергей В. Шедко, Дениз Макалуз, Дейл Г. Микеле, Трейси А. Сеймон; КАНИНЕН РАЗШИРЯВАЩ ВИРУС В ДИВО ДЪЛОИЗТОЧЕН ЛЕОПАРД (PANTHERA PARDUS ORIENTALIS). J Wildl Dis 1 януари 2018 г .; 54 (1): 170–174. doi: https://doi.org/10.7589/2017-03-065

страничен

Изтеглете файла с цитат:

РЕЗЮМЕ

Далечноизточният леопард (FEL; Panthera pardus orientalis), известен също като леопард Амур, е един от най-застрашените големи фелидове и понастоящем е класифициран като критично застрашен от Международния съюз за опазване на природата (Stein et al. 2016) . Популации, които преди са се разпространявали в североизточен Китай, Корейския полуостров и южната част на Приморския край (провинция) в руския Далечен изток (Hebblewhite et al. 2011). Модификацията на местообитанията, изчерпването на плячката и бракониерството са намалили FEL до единична субпопулация, която заема приблизително 7 000 км 2 в югозападната част на Приморския край и съседната провинция Дзилин в Китай (Hebblewhite et al. 2011). С останалите приблизително по-малко от 60 индивида (Виткалова и Шевцова 2016), тази генетично обедняла популация е изложена на риск от стохастични процеси, включително инбридинг депресия, бедствия в околната среда и болести (Uphyrkina et al. 2002).

На 8 май 2015 г. женски леопард на възраст приблизително 2 години е намерен в близост до път, който минава през Земята на Националния парк „Леопард“ в област Хасански (42 ° 57′19,4 ″ с.ш., 131 ° 21′5,4 ″ изток). При първоначалния подход леопардът показа липса на страх към хората и превозните средства и безразличие към заобикалящата го среда. Въпреки това, той успя да реагира на движение, което предполага приемственост на визията. Леопардът е бил обездвижен с помощта на 5 mg/kg керемидин и золазепам (Zoletil, Virbac, Carros, Прованс, Франция) и е откаран в Alekseevka PRNCO „Tiger Center“. При постъпване животното тежи 28 кг и се смята, че е в умерено лошо телесно състояние. По време на грижите леопардът не се интересуваше от храна и вода и се нуждаеше от ръчно хранене и интравенозна терапия с течности. Интрамускулни инжекции от 5 mg/kg енрофлоксацин (Baytril Bayer, Леверкузен, Германия) и 0,2 mg/kg дексаметазон (Dalkhimfarm, Хабаровск, Русия) се прилагат ежеседмично.

Събрахме кръвни проби на 8 и 16 май 2015 г., използвайки етилендиаминтетраоцетна киселина като антикоагулант и ги предоставихме за анализ в лабораторията Alba, Владивосток. Ръчното преброяване на белите кръвни клетки е в нормални граници за домашните котки (7,3 × 10 9/L на 8 май и 10,3 × 10 9/L на 16 май). Всички останали цитологични и биохимични стойности също попадат в границите, които лабораторията счита за нормални за домашните котки.

Въпреки поддържащите грижи и медицинското лечение, движенията на леопарда стават все по-некоординирани, с прогресивно тежки контракции на задните крайници, които не могат да бъдат контролирани с интравенозен мидазолам (Hoffmann-La Roche, Базел, Швейцария, 0,05–0,01 mg/kg). Състоянието на леопарда се изражда и евтаназията е извършена на 25 май по етични причини.

За да се покаже връзката между щама на леопарда CDV и тези от други региони, е конструирано филогенетично дърво за H гена, използващо байесов извод (Фиг. 1). Подходящият обратим за времето модел на заместване на нуклеотиди е избран на базата на резултатите от Akaike Information Criterion, използвайки jModeltest 2 версия 2.1.8 (Darriba et al. 2012). Дървото е конструирано с помощта на приставката Geneious MrBayes (версия 3.2.6, Biomatters Ltd., Окланд, Нова Зеландия) с 1 100 000 повторения, като се вземат проби на всеки 200 дървета и се изхвърлят 25% от пробите като изгаряне (Huelsenbeck и Ronquist 2001 ). Установена е последователна топология в консенсусно дърво, изградено с помощта на анализ на максимална вероятност. Генетичният и антигенният дрейф доведоха до разминаването на CDV в различни линии, които следват широко географски модел (Harder et al. 1996; Haas et al. 1997; Martella et al. 2002). Генният ампликон на Н, получен от леопарда, попада в арктикоподобната клада на CDV (Haas et al. 1997; Фиг. 1), която включва последователности, получени от амурски тигри в руския Далечен изток и от байкалски тюлени (Phoca sibirica) от Езеро Байкал (Seimon et al. 2013).

Филогенетично дърво, илюстриращо връзката на последователността на вируса на кучешка чума, получена от див леопард от Далечния Изток (Panthera pardus orientalis), който е евтаназиран поради напреднала неврологична болест. Дървото е конструирано с помощта на гена на хемаглутинин (H), получен от далечноизточния леопард (в рамките на кутията) с 59 предварително публикувани H гени. Некодиращите нуклеотиди бяха изключени, което доведе до подреждане на 382 базови двойки по дължина. Анализите бяха извършени с помощта на MrBayes (байесов извод) и общия обратим във времето модел на заместване с 1 100 000 повторения, подсемплиране на всеки 200 дървета и изхвърляне на 25% като изгаряне. Последователност на вирус на фоцинова чума (PDV) беше включена като извънгрупа (номер за присъединяване на GenBank HQ007902).

Филогенетично дърво, илюстриращо връзката на последователността на вирус на кучешка чума, получена от див леопард от Далечния Изток (Panthera pardus orientalis), който е евтаназиран поради напреднала неврологична болест. Дървото е конструирано с помощта на гена на хемаглутинин (H), получен от далечноизточния леопард (в рамките на кутията) с 59 предварително публикувани H гени. Некодиращите нуклеотиди бяха изключени, което доведе до подравняване на 382 базови двойки по дължина. Анализите бяха извършени с помощта на MrBayes (байесов извод) и общия обратим във времето модел на заместване с 1 100 000 повторения, подсемплиране на всеки 200 дървета и изхвърляне на 25% като изгаряне. Последователност на вирус на фоцинова чума (PDV) беше включена като извънгрупа (номер за присъединяване на GenBank HQ007902).

Множество, реплицирани, 5-μm участъци на мозъка (мозъка) и белия дроб бяха оцветени с хематоксилин и еозин и изследвани на местно ниво от А. Маркина (Ветеринарна клиника на Белия зъб, Москва, Русия) и бяха сканирани (с помощта на панорамен скенер MIDI II, 3DHistech Ltd., Будапеща, Унгария) и изследвани дистанционно от D. McAloose с помощта на софтуера CaseViewer (3DHistech Ltd.). В мозъка е налице леко до умерено, мултифокално, несупуративно, лимфоплазмацитно менингеално и периваскуларно възпаление. Възпалението е свързано с мултифокални области с лека до умерена демиелинизация и вакуолизация на бялото вещество и лека мултифокална глиоза. Подозираха се вирусни включвания, типични за инфекция, но не бяха потвърдени (улавянето/разделителната способност на изображението и детайлите на клетките бяха по-малко от оптимални при голямо увеличение [400 × и 630 ×]). Моделът и видът на възпалението, по-специално периваскуларният лимфоиден маншет, заедно с демиелинизация на бялото вещество, силно предполагат CDV инфекция, въпреки липсата на идентифицируеми включвания. Не са установени забележими хистологични лезии в участъци на белия дроб, лимфните възли или бъбреците.

Кучетата, заразени с CDV, обикновено се проявяват със заболяване на горните дихателни пътища, със или без системни признаци на пирексия, дерматит, хиперкератоза или ентерит (Greene and Appel 2006). Неврологичните признаци често следват, но не присъстват във всички случаи, като се срещат по-често при някои вирусни щамове (Summers et al. 1984). Дивият леопард ни се представя само с неврологични признаци; нямаше респираторно или системно заболяване. По същия начин лезии, съответстващи на CDV инфекция, са открити само в мозъчната тъкан (въпреки че имунохистохимията и хибридизацията in situ, които може да са демонстрирали вирус в други тъкани, не са налични). Вирусни ампликони бяха открити в мозъка, но не и в белодробната тъкан. Не знаем дали дихателни или системни признаци може да са присъствали по време на по-ранен стадий на инфекция или дали заболяването е било ограничено до неврологична тъкан. Поведенческите аномалии могат да позволят откриването на неврологични случаи при свободно отглеждани фелиди, което води до недостатъчно регистриране на системно заболяване. Инфекцията на епителната тъкан обаче по време на системно заболяване е от решаващо значение за предаването на CDV (Sawatsky et al. 2012); следователно, патогенезата на CDV при дивите фелиди има важни епидемиологични последици и налага разследване.

Излагането на диви FELs и смъртността на поне един индивид е важна констатация, като се има предвид чувствителността на малките популации към стохастични събития. Популациите от застрашени месоядни животни обикновено са твърде малки, за да поддържат патогени като CDV, които причиняват краткотрайни инфекции, което налага разпространение от по-обилните резервоарни гостоприемници (Woodroffe 1999). В Приморския край потенциалните резервоарни популации включват домашни кучета и обилни диви мезоядни животни като самур (Martes zibellina), миещи кучета (Nyctereutes procyonoides) и азиатски язовец (Meles leucurus). Инфекции на CDV са регистрирани и сред амурските тигри в Русия, включително поне един тигър, близък до ограничения обхват на FEL (Quigley et al. 2010; Seimon et al. 2013). Заплахата от CDV допринася за създаването на допълнителни диви популации на леопарди като застраховка за защита срещу бъдещи огнища или създаване на коридори на местообитания за насърчаване на колонизацията на нови райони чрез естествено разпръскване.

Този проект е финансиран от Фондация за животните на Морис (D13Z0-041), Фонд за опазване на зоопарка Бойсе, Съвет за изследване на биотехнологиите и биологичните науки, Руското географско общество и Обществото за опазване на дивата природа. Работата стана възможна чрез подкрепата на Министерството на природните ресурси и околната среда на Руската федерация и техните служители в Обединената администрация на държавния природен биосферен резерват „Кедровая подложка“ и Национален парк „Земята на леопарда“ с подкрепата на автономната, организация с нестопанска цел „Далечноизточните леопарди.“ Искаме да благодарим на Анастасия Маркина (Ветеринарна клиника „Бял зъб“, Москва, Русия) за съдействието при извършване на хистопатологичния преглед. Благодарим и на Виктор Сторожук, Александър Рибин и Виктор Кузменко за надзора върху залавянето и грижите за леопарда.