Sinhalagoda Lekamlage Chandi Asoka Dharmarathna

1 Катедра по патобиология, Факултет по ветеринарна медицина и животновъдство, Университет в Перадения, Шри Ланка

Сузиджи Уикрамасинге

2 Катедра по паразитология, Медицински факултет, Университет в Перадения, Шри Ланка

Рошита Нилмини Ваджуге

3 Катедра по патология, Медицински факултет, Университет в Перадения, Шри Ланка

Rajapakse Peramune Veddikkarage Jayanthe Rajapakse

1 Катедра по патобиология, Факултет по ветеринарна медицина и животновъдство, Университет в Перадения, Шри Ланка

Senanayake Abeysinghe Mudiyanselage Kularatne

4 Катедра по медицина, Медицински факултет, Университет в Перадения, Шри Ланка

Резюме

Обективен

Да се ​​изследва потенциалната роля на екстракт от пресни листа от карика папая (C. papaya) върху хематологичните и биохимичните параметри и токсикологичните промени в миши модел.

Методи

Общо за изпитването са използвани 36 мишки. Свеж екстракт от листа от C. papaya [0,2 ml (2 g)/мишка] се дава само на тестовата група (18 мишки). Записани са общо поведение, клинични признаци и модели на хранене. Проби от кръв и тъкани се събират на интервали. Хематологични параметри, включително тромбоцити, червени кръвни клетки (RBC), бели кръвни клетки (WBC), обем на опаковани клетки (PCV), серумна биохимия, включително серумен креатинин, серумна глутамино-оксалооцетна трансаминаза (SGOT) и серумна глутамино-пирувична трансаминаза (SGPT) бяха решителен. Изследвани са органи за възможни хистопатологични промени.

Резултати

Нито една група не е показала промяна в поведението или намаляване на приема на храна и вода. По същия начин не са открити значителни промени в нивата на SGOT, SGPT и серумните креатинин в тестовата група. Хистопатологични промени в органите не са наблюдавани при нито една група мишки, с изключение на три чернодробни проби от тестовата група, които са имали лека фокална некроза. Броят на тромбоцитите (11,33 ± 0,35) × 10 5/µL (P = 0,000 04) и броят на червените кръвни клетки (7,97 ± 0,61) × 10 6/µL (P = 0,000 03) са значително увеличени в тестовата група в сравнение с тази на контролите. Въпреки това, стойностите на броя на левкоцитите и PCV (%) не се променят значително в тестовата група. Броят на тромбоцитите в тестовата група започна значително да се увеличава от Ден 3 (3.4 ± 0.18 × 10 5/µL), достигайки почти четири пъти по-високо на Ден 21 (11.3 × 10 5/µL), докато беше 3.8 × 10 5/µL и 5.5 × 10 5/µL на ден 3 и ден 21 съответно в контролата. По същия начин броят на червените кръвни клетки в тестовата група се е увеличил от 6 × 10 6/µL до 9 × 10 6/µL на Ден 21, докато остава почти постоянен в контролната група (6 × 10 6/µL).

Заключения

Пресният екстракт от листа на C. papaya значително увеличава броя на тромбоцитите и червените кръвни клетки в тестовата група в сравнение с контролите. Следователно е много важно да се идентифицират тези химикали от листата на C. papaya, тъй като може да се препоръча използването им като лекарство за засилване на тромбопоезата и еритропоезата при хора и при животни, при които тези клетъчни линии са нарушени.

1. Въведение

Карика папая (C. papaya, семейство Caricarceae, папая) е едно от най-популярните и икономически важни растения в света, тъй като плодовете й са често срещан деликатес [1]. Това е меко залесено едностъблено многогодишно дърво, високо 2-10 м, с корона от големи палмови листа, излизащи от върха на ствола. Мекият, кух, цилиндричен ствол варира от 30 см в диаметър в основата до около 5 см в диаметър в короната [2]. Въпреки че е родом от Централна Америка, той е транспортиран до много части на тропиците.

Растението папая е лактифер, тъй като съдържа специализирани клетки, известни като лактификатори, които се срещат в повечето тъкани и отделят латекс. Лактификаторите отделят латекс и са разпръснати в повечето растителни тъкани. Папая-латексът е добре известен като богат източник на четирите цистеинови ендопептидази, а именно папаин, химопапаин, глицил ендопептидаза и карикаин [3]. Листата съдържат алкалоид, наречен карпаин, и глюкозид, наречен карпозид [4].

Различни части от растенията папая, включително плодове, сушени плодове, листа, изсушени листа, стъбла, семена и корени отдавна се използват като съставки в алтернативната медицина. Например семената се използват за изгонване на червеи и корени, а семената се използват като абортиращо средство. Листата (особено падналите) се използват по различен начин за лечение на треска, пирексия, диабет, гонорея, сифилис, възпаление и като превръзка за септични рани [5].

Непроверените билкови лекарства могат да бъдат потенциално вредни за човешкото здраве. Много растения, използвани в традиционните и народни лекарства, са потенциално токсични, мутагенни и канцерогенни [6] - [11]. Проведени са токсикологични изследвания на екстракти от различни части на растенията C. papaya като семена, плодове, корени и листа, като се използват няколко животински модела. Документирани са остра и хронична токсичност на незрели плодове от C. papaya [12].

Някои от традиционните твърдения за ефикасност, които са изследвани научно с помощта на животински модели и тяхната ефикасност са доказани [13], [14]. Последни проучвания показаха, че екстрактът от листата на C. papaya има потенциални противосърпови свойства (инхибиране на образуването на сърповидни клетки) [14]. Indran и сътр. са показали, че има защитен ефект срещу стомашни язви при плъхове [13]. Освен това е известно, че цветята на C. papaya имат антибактериално действие [15]. Контрацептивната ефикасност на семената на C. papaya е доказана по-рано при плъхове, мишки и зайци [16] - [19]. Пероралното приложение на екстракт от семена на C. papaya може да предизвика обратимо мъжко безплодие и може да се използва за фармацевтично разработване на мъжки контрацептив.

Днес много тропически и субтропични страни са обхванати от инфекция с денга, причинена от вируси, принадлежащи към семейство Flaviviridae. Няма специфична терапия за денга, въпреки че инфекцията има значителна смъртност. Шри Ланка не прави изключение, когато инфекцията с денга е приоритет за националните здравни служби за превенция и намаляване на смъртността [20]. В отчаяние много хора са прибегнали да използват скрито екстракт от листа на папая. Това е приложимо дори за хоспитализирани пациенти с денга. Препоръчването на екстракт от листа на C. papaya за инфекция с денга е неетично, докато не бъде доказано от научни изследвания.

Следователно, в настоящото проучване ние сме изследвали ефектите на пероралния прием на чист екстракт от листата на C. papaya върху хематологичните/биохимичните параметри и токсикологичните промени в миши модел.

2. Материали и методи

2.1. Експериментални животни

Мъжки бели мишки (средно телесно тегло 32-33 g) на възраст 6 седмици, получени от Медицинския изследователски институт, Шри Ланка, са използвани като модел за хематологично и токсикологично изследване. Животните се държат в къщата за животни на Медицинския факултет на Университета в Перадения.

Три експериментални изпитания бяха проведени през май 2011 г. до май 2012 г., като бяха използвани три групи мишки. Мишките бяха разделени на две групи, контролна и тестова, и в трите опита. За първото и второто изпитване използвахме 48 мишки (за всяко изпитване 12 мишки/контролни и 12 мишки/тест), а за третото изпитване бяха използвани 36 мишки (18 контролни и 18 тестови). На всички мишки беше дадена стандартна търговска диета със свободен достъп до вода. Всички мишки както в тестовата, така и в контролната група бяха номерирани чрез татуиране на ушите. Първото проучване е пилотно проучване за планиране на правилно проучване, при което се вземат предвид следните променливи - доза екстракт от листа на C. papaya, време на вземане на кръв и хистопатологични промени в черния дроб. Второто изпитване усъвършенства методологията, а третото предостави резултатите, представени тук. Етичното разрешение е получено от Комитета за етичен преглед на Факултета по ветеринарна медицина и животновъдство към Университета в Перадения, Шри Ланка.

2.2. Приготвяне на екстракт от листа на C. papaya

Прясна, средна възраст, листа от C. papaya се берат ежедневно в продължение на 7 дни. Листата се измиват и стъблата се отстраняват преди употреба. След претегляне листата се смесват без добавяне на вода или други течности. След това сместа се филтрува, за да се получи чист екстракт от листата на C. papaya. Накрая се измерва обемът на екстракта и екстрактите се съхраняват при 4 ° С до употреба. За всяка употреба се приготвят пресни екстракти.

2.3. Дозировка на екстракт от листа на C. papaya

В първото изпитване използвахме 0,5 ml (5 g)/мишка/ден, а във второ и трето изпитване използвахме 0,2 ml (2 g)/мишка/ден. Първото проучване беше проведено за определяне на подходяща дневна доза на мишка. В третото изпитване мишките от тестовата група са били хранени с пресен екстракт от листа на C. papaya в продължение на седем последователни дни (0,2 ml (2 g)/мишка/ден), като първият от тези дни се счита за първи ден от опита. По същия начин на контролната група беше дадена вода.

2.4. Експериментална процедура

Теглото на всички мишки се записва преди започване на храненето и претеглянето се повтаря всеки втори ден по време на периода на изследване. Поведенческите дейности се записват веднъж на ден.

Бяха подготвени кръвни цитонамазки, за да се оцени броят на тромбоцитите и червените кръвни клетки (RBC) както от тестовата, така и от контролната група през алтернативни дни и в дни на жертвоприношение (на 8, 14 и 21 ден, от всяка група бяха умъртвени равен брой мишки за биохимично и хистологично изследване). Броят на тромбоцитите и червените кръвни клетки са преброени в 10 или повече полета при маслено потапяне (× 100). Процедурата се повтаря в тънки или дебели области на филма, ако разпределението е неравномерно. След това се определя средният брой тромбоцити и червените кръвни клетки чрез разделяне на общия брой на броя на разгледаните полета. И накрая, средният брой тромбоцити и еритроцити се умножава по установения полеви фактор, за да се определи броят на оценките.

Шест мишки от всяка група (тест и контрол) бяха умъртвени на Ден 8, 14 и 21. Събираха кръв. Измерва се обемът на опакованите клетки (PCV). Серумът се отделя и се съхранява при -80 ° C до употреба. Измервани са също нива на серумна глутамино-оксалооцетна трансаминаза, серумни глутамино-пирувинови трансаминази и креатинин. Освен това, проби (черен дроб, бели дробове, бъбреци, сърце, черва и далак) бяха събрани за хистопатологичното и токсикологично изследване.

2.5. Хистопатологично изследване

Образците бяха фиксирани в буфериран формалин (10%). Приготвят се парафинови срезове с дебелина 2-7 µm. Секциите бяха депарафинизирани и рехидратирани. Пробите се оцветяват с хематоксилин и еозин (H&E) и се наблюдават под светлинен микроскоп.

2.6. Статистически анализ

маса 1

Параметри Ден 1 Ден 7 Ден 14 Ден 21
Контролна групаТестова групаКонтролна групаТестова групаКонтролна групаТестова групаКонтролна групаТестова група
Брой на тромбоцитите (× 10 5/µL)3,67 ± 0,163.36 ± 0.164,52 ± 0,159,00 ± 0,355,21 ± 0,1310,86 ± 0,385,53 ± 0,1211,33 ± 0,35
Еритроцити (× 10 6/µL)6,23 ± 0,175,87 ± 0,195,95 ± 0,186,63 ± 0,326,61 ± 0,287,95 ± 0,596,00 ± 0,317,97 ± 0,61
WBC (× 10 3/µL)7,45 ± 0,237,61 ± 0,137,16 ± 0,217,62 ± 0,327,34 ± 0,157,71 ± 0,617,52 ± 0,118,01 ± 0,42
SGOT (U/L) 88,67 ± 7,60118,67 ± 25,9196,17 ± 40,00110,17 ± 23,0090,00 ± 16,4790,00 ± 13,40
SGPT (U/L) 28,50 ± 2,7024,17 ± 3,7017,83 ± 4,9027,67 ± 9,9747,50 ± 7,4042,83 ± 3,32
Серумен креатинин (mg/dL) 0,12 ± 0,120,12 ± 0,020,03 ± 0,040,1 ± 0,62E-180,1 ± 6,2E-180,10 ± 0,12
PCV (%) 41,8 ± 0,4840,83 ± 1,8543,7 ± 2,7240,83 ± 1,1941,00 ± 4,3244,83 ± 1,79

3.4. Хематологично изследване

Не се наблюдават значителни промени в PCV в тестовата група в сравнение с тази на контролната група. Стойностите винаги са останали в нормалните граници (39% -49%).

Средният брой на тромбоцитите в тестовата и контролната групи е бил (3.36 ± 0.16) × 10 5/µL и (3.67 ± 0.16) × 10 5/µL съответно преди експеримента. Няма значителна разлика в броя на тромбоцитите през първите 3 дни и в двете групи. Въпреки това броят на тромбоцитите в тестовата група започна да нараства стабилно след Ден 3 и достигна пиково ниво на Ден 13 (10,94 × 10 5/µL). Впоследствие броят на тромбоцитите остава относително постоянен в диапазона от 10 × 105 до 11 × 105/μL. Броят на тромбоцитите в тестовата група е (11,33 ± 0,35) × 10 5/µL в края на експеримента в сравнение с този на контролната група (5,53 ± 0,12) × 10 5/µL (Фигура 1).

екстрактът

Контролните и тестовите групи са имали почти сходен брой на еритроцитите [6.23 ± 0.17) × 106/µL и (5.87 ± 0.19) × 10 6/µL съответно в контролни и тестови мишки] на 1-ви ден (непосредствено преди началото на храненето). Средният брой на еритроцитите в контролната група остава на постоянно ниво от (6,00 ± 0,31) × 106/µL с леки колебания. За разлика от това, средният брой на червените кръвни клетки в тестовата група се увеличава стабилно през първите две седмици с (6,63 ± 0,32) × 10 6/µL на 8-ми ден и (7,95 ± 0,59) × 10 6/µL на 14-ти ден. След това, остава на постоянно ниво около 7,97 × 10 6/µL (Таблица 1).

Нашите резултати ясно показаха, че има значително увеличение (P Таблица 1). Броят на червените кръвни клетки също е значително (Р 5/µL и (3.67 ± 0.16) × 10 5/µL съответно и (11.33 ± 0.35) × 10 5/µL и (5.53 ± 0.12) × 10 5/µL съответно в края на експеримент. Ефектът върху броя на тромбоцитите при перорално приложение на екстракт от листа на C. papaya е статистически значим (P Ong H, Chua S, Milow P. Етнолечебни растения, използвани от селяните от Темуан в Кампунг Джерам Кедах, Негери Сембилан, Малайзия. Етно Med. 2011; 5: 95–100. [Google Scholar]