Резюме

Количествен анализ на уреазната активност.

Стомашните проби (1–2 mm 2) бяха изрязани от средната част на корпуса и антралната част. Извършен е количествен анализ на уреаза, както е описано другаде. Накратко, тъканите се инкубират в 1 ml карбамиден бульон в продължение на 4 часа и се центрофугират и дублирани аликвотни части (200 μl) карбамиден бульон от всяка стомашна тъкан се поставят в микротитърни плаки. Степента на промяна на цвета е записана в автоматизиран ELISA четец при 550 nm (30) .

високосолената

Количествена култура.

Масата на тъканта се определя чрез изваждане на масата на епруветката, съдържаща среда от масата след добавяне на тъкан. Тъканта се хомогенизира с мелнички от стъклена тъкан и хомогенатът се разрежда на 100 и 1000 пъти в бульон Brucella, съдържащ FCS. Сто μl от всяко разреждане се разпределят върху селективна среда: Кръвен агар основа №. 2 (DIFCO Laboratories, Детройт, Мичиган), допълнена с 5% конска кръв (Remel, Lenexa, KS), 50 μg/ml амфотерицин В, 100 μg/ml ванкомицин, 3,3 μg/ml полимиксин В, 200 μg/ml бацитрацин и 10,7 μg/ml налидиксинова киселина (Sigma Chemical Company, Сейнт Луис, Мисури). Плаките се инкубират микроаеробно при 37 ° С в продължение на 3-5 дни. След проверка чрез грам оцветяване и реакции на уреаза, каталаза и оксидаза, се преброяват колониите на H. pylori и се изчислява CFU на грам тъкан. Сравненията между групите се основават на логарифмичните концентрации на бактерии.

Хистологична оценка.

BrdUrd Имуноцитохимия.

Количествено определяне на BrdUrd Incorporation.

Ефект на високосолената диета върху активността на стомашната уреаза a при мишки, заразени с H. pylori C57BL/6

Количествена култура на H. pylori.

Средната плътност на H. pylori (CFU/g тъкан) при 8 и 16 WPI се увеличава значително (P ⇓ и фиг. 4) ⇓. Сред заразените с H. pylori мишки значително увеличение (P

CFU на H. pylori на грам тъканно тяло при мишки C57BL/6, нормална диета; ▪ диета с високо съдържание на сол.

CFU на H. pylori на грам тъкан-антрал при мишки C57BL/6., нормална диета; ▪ диета с високо съдържание на сол.

Гастрит и промени в лигавицата в проксималния корпус на мишки C57BL/6 при 16 WPI след диета с високо съдържание на сол и инфекция с H. pylori. Неинфектирана мишка на нормална диета. Зоната на жлезата обхваща над 75% от дебелината на лигавицата. Б, неинфектирана мишка на диета с високо съдържание на сол. Мултифокално удължаване на стомашни ями в тандем с видно намаляване на дебелината на жлезистата зона се получи в отговор на диетата с високо съдържание на сол. В някои атрофични огнища жлезистата зона включва 6 CFU/g стомашен корпус. D, заразена с H. pylori мишка на диета с високо съдържание на сол. Епителът на жлезата се отделя екстензивно от хиперпластичен лигавичен епител. Лигавицата се инфилтрира дифузно от възпалителни клетки. Изобразената мишка е имала плътност на колонизация на H. pylori 3,81 × 106 CFU/g на стомашния корпус. H&E оцветяване. Лента, 200 μm.

Имунохистохимично откриване на BrdUrd в проксималния корпус на мишки C57BL/6 при 16 WPI след диета с високо съдържание на сол и инфекция с H. pylori. Неинфектирана мишка на нормална диета. Ограничен брой имунопозитивни клетки присъстват в тясна ивица на кръстовището на жлезистата зона и горната стомашна яма (стрелка). Б, неинфектирана мишка на диета с високо съдържание на сол. Наблюдава се увеличаване на плътността на имуноположителните клетки на жлеза при мишки на диета с високо съдържание на сол. Поради удължаването на стомашните ями и намаляването на дебелината на жлезистата зона, пролиферативната зона се измества надолу. C, заразена с H. pylori мишка на нормална диета. Инфекцията с H. pylori индуцира увеличаване на епителната пролиферация. Отслабването на нормалната жлезиста зона от хиперпластичния лигавичен епител води до разпространение на имуно-положителни клетки до основата на жлезите (стрелка). D, заразена с H. pylori мишка на диета с високо съдържание на сол. Въпреки че не се наблюдава статистическа разлика между двете заразени групи, най-високата плътност на маркирането на BrdUrd се наблюдава при заразени мишки на диета с високо съдържание на сол. Стрептавидин-хрянова пероксидаза, 3,3′-диаминобензидиин с хематоксилинов контраст. Лента, 100 μm.

Ефект на високо съдържание на сол и инфекция с H. pylori върху стомашната яма BrdUrd, вградена а в проксималния корпус и антрума

Гастринов анализ.

Серумните концентрации на гастрин са значително повишени (P ⇓. Въпреки че инфекцията с H. pylori в групата с високо съдържание на сол е свързана със средно увеличение на серумния гастрин в сравнение с незаразените мишки на същата диета, статистическа значимост не е постигната. -солната диета сред неинфектираните мишки доведе до средно увеличение в сравнение с незаразените мишки при нормална диета, която не постигна значимост.Не се забелязват съществени разлики между диетичните групи сред мишките, заразени с H. pylori. Концентрациите на серумния гастрин нямат корелация с епителните разпространение, както е оценено от включването на BrdUrd.

Ефект на високо съдържание на сол и инфекция с H. pylori върху серумния гастрин a

ДИСКУСИЯ

Наличието на модел на мишка H. pylori предлага идеална възможност за директно изследване на взаимодействието между хранителната сол и инфекцията с H. pylori при ускоряване на стомашно увреждане и насърчаване на развитието на премалигнени стомашни лезии. Хистопатологичните наблюдения на това проучване при 16 WPI са в съответствие и разширяват предишни наблюдения на ефекта от високия прием на сол върху стомашната лигавица (16, 17, 18, 19, 22). Постоянна инфекция с щам на H. pylori Sydney е постигната както при високо-, така и при ниски дози сол, третирани с диета C57BL мишки за продължителността на проучването от 16 седмици. В модела на мишки, високата диетична сол статистически повишава нивото на колонизация на H. pylori в лигавицата на тялото във всички времеви точки, оценени в проучването (т.е. 4, 8 и 16 WPI) въз основа на количествен анализ на уреаза или култура. Увеличаването на стомашната колонизация на H. pylori, свързано с диетата с високо съдържание на сол, включва уникален и потенциално синергичен механизъм. Високият прием на сол може да засили канцерогенезата чрез улесняване на колонизацията и по този начин да увеличи влиянието на хроничния гастрит на H. pylori.

Повишената плътност на колонизация на H. pylori може да бъде потенцирана чрез няколко механизма. Интересното е, че предварителен доклад показва, че гастринът изглежда е специфичен за H. pylori растежен фактор in vitro. Човешкият гастрин стимулира растежа на осем различни изолати на H. pylori по специфичен, зависим от дозата начин (42). В настоящото проучване крайните серумни концентрации на гастрин са били статистически повишени при мишки, заразени с H. pylori и повишени при мишки, хранени с диети с високо съдържание на сол. Понастоящем серумните концентрации на гастрин не съвпадат изцяло с данните за колонизацията; стойностите на единична проба от серума обаче предлагат само косвена оценка на тъканните концентрации. Резултатите могат също така да показват, че наблюдаваните ефекти, свързани със солта, се проявяват чрез събитие след гастринова стимулация или чрез процес, независим от гастрин.

Въпреки че удължени стомашни ями и загуба на париетални клетки също са били наблюдавани в проксималния корпус на мишки, заразени с H. pylori, на диета с високо съдържание на сол, подчертаният атрофичен гастрит, индуциран в мишки C57BL/6 само от инфекция с H. pylori, закрива въздействието на диета с високо съдържание на сол. За разлика от това, относителното отсъствие на свързани с H. pylori възпалителни лезии в антрума позволява измерването на подобен ефект, свързан с високо съдържание на сол върху епителната пролиферация в антралната лигавица на заразените мишки. Тъй като локалното възпаление може да обърка или влоши дългосрочната прогресия на свързаните с високо съдържание на сол лезии, в бъдещи проучвания би било полезно да се изследват други щамове на мишки (напр. BALB/c), които развиват по-малко тежък гастрит, свързан с H. pylori в успоредно с мишки C57BL/6.

В заключение, нашето проучване предполага, че диетите с високо съдържание на сол допринасят за стомашната атрофия и синергизират с Helicobacter инфекции чрез фовеоларна хиперплазия и разширяване на колонизацията на H. pylori. Понастоящем е неизвестно дали ефектите върху стомашната диференциация и повишената колонизация на H. pylori водят до ускорена прогресия към рак на стомаха, но трябва да бъдат разгледани в бъдещи проучвания.

Благодарности

RIA за Gastrin бяха любезно изпълнени от Andrea Varro и Graham J. Dockray.

Бележки под линия

Разходите за публикуване на тази статия бяха покрити отчасти чрез плащането на такси за страница. Следователно тази статия трябва да бъде маркирана с реклама в съответствие с 18 U.S.C. Раздел 1734 единствено, за да посочи този факт.

↵ 1 Тази работа е подкрепена от NIH Grants R01 AI/RR 37750 (на J. G. F.) и R01 CA67463 (на T. C. W. и J. G. F.).

↵ 2 До кого трябва да бъдат отправени искания за препечатвания, в Отдела по сравнителна медицина, Масачузетски технологичен институт, 77 Massachusetts Avenue, сграда 16, стая 825C, Кеймбридж, Масачузетс 02139. Телефон: (617) 253-1757; Факс: (617) 258-5708; Имейл: jgfoxmit.edu

↵ 3 Използваните съкращения са: MNNG, N-метил-N′-нитро-N-нитрозогуанидин; CFU, единица (и) за образуване на колонии; WPI, седмици след инфекцията; BrdUrd, 5-бромо-2'дезоксиуридин; TBS, Tris-буфериран физиологичен разтвор.