Публикувано в: Вестник на младите фармацевти

антиоксидантни

Идентификатор на статия (идентификатор на издателя): JYP-10-2-193

Автори

Медицински и фармацевтичен институт в Пятигорск, клон на Волгоградския държавен медицински университет, Пятигорск, РУСИЯ.

Кореспонденция на: Кореспонденция Д.И. Поздняков, Медицински и фармацевтичен институт в Пятигорск, клон на Волгоградския държавен медицински университет, Пятигорск, РУСИЯ. Телефон: + 7-918-756-08-89 Имейл: [email protected]

Цитирайте тази статия: Поздняков D, Voronkov AV, Zolotych DS, Arlt AV. Антиоксидантни и ендотелиотропни свойства 4-хидрокси-3,5-ди-трет-бутил канелна киселина при условия на експериментална мозъчна исхемия. J Young Pharm. 2018; 10 (2): 193-6.

Резюме

Обективен

Да се ​​оцени ефектът на 4-хидрокси-3,5-ди-трети-бутил канелената киселина върху състоянието на ендотелната функция при условия на експериментална церебрална исхемия.

Материали и методи

Бяха оценени антиоксидантните свойства на 4-хидрокси-3,5-ди-трети-бутил канелна киселина и ефекта на това съединение върху активността на NO-синтазната система и концентрацията на ADMA.

Резултати

В резултат на това е установено, че използването на 4-хидрокси-3,5-ди-трети-бутил канелна киселина насърчава намаляващата активност на каталазата, глутатионпероксидазата, супероксиддисмутазата и намаляването на концентрацията на MDA и DC. В допълнение, за това съединение е установена способността да модулира активността на NO-синтазната система: увеличение на активността на eNOS със 114,2% (стр

ВЪВЕДЕНИЕ

МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ

В експеримента са използвани 80 мъжки плъхове Wistar с тегло 200-220 грама. Всички манипулации с животни отговарят на нормите на международната експериментална етика (Европейска конвенция за защита на гръбначните животни, използвана за експериментални и други научни цели (Страсбург, 22 юни 1998 г.)). Експерименталните групи се формираха чрез рандомизиране на животните по възраст и тегло. Във всяка група имаше 20 индивида. Първата група животни - псевдоуправлявани плъхове (PO), втора - отрицателна контрола (NC). Сулодексид (Wessel Doué F, Alfa Wasserman, Италия) в доза 30 UIL, 8 етилметилхидроксипиридиносукцинат («Mexidol», PHARMASOFT) в доза 30 mg/kg 9 и тиоктова киселина («Octolipen», Pharmstandard) в доза 50 mg/kg 10 се използва като еталонен препарат: Тестваното съединение 4-хидрокси-3,5-ди-трети-бутил канелна киселина (ATACL) се прилага в доза от 100 mg/kg. Приложени са лекарства за сравнение и изследвано съединение per os, след възпроизвеждане на фокална церебрална исхемия и всеки ден в продължение на 3 дни.

Експериментален модел на фокална церебрална исхемия

Фокалната исхемия се възпроизвежда чрез метод на коагулация при условията на анестезия с хлорален хидрат (350 mg/kg). Животните бяха упоени, депилираха парче кожа отдолу и отляво на дясното око, направиха разрез. Издърпа меките тъкани, отстрани процесията на маларната кост и откри черепа в пресечната точка на дясната средна мозъчна артерия с обонятелния тракт. Пробиха отвор за трепанация с диаметър ≈ 2 cm 2, отстраниха твърдата мозъчна обвивка и коагулираха средната церебрална артерия, докато под лупа наблюдаваха спиране на притока на кръв в артериалното легло. След това костните фрагменти бяха репозиционирани, раната беше слой по слой и обработена с антисептик. 11.

Определяне на концентрацията на диенови конюгати

Определянето на съдържанието на диенови конюгати (DC) на ацил хидропероксиди на мастни киселини в мозъчния хомогенат се извършва спектрофотометрично при 233 nm. DC се екстрахира със смес от хептан: изопропанол (1: 1). Броят на DC се изчислява от коефициента на моларна екстинкция на конюгирани диени при 233 nm 2.2 × 10 5 M -1 cm -1 и изразен в nmol/mg протеин. 12

Определяне на концентрацията на малонов диалдехид

Съдържанието на малонов диалдехид (MDA) се определя в мозъчния хомогенат чрез спектрофотометричен метод. Този метод се основава на образуването на оцветен реакционен продукт на MDA с 2-тиобарбитурова киселина, имащ максимум на абсорбция при 532 nm. Цветът на разтвора е пропорционален на концентрацията на малонов диалдехид. Количеството MDA се изчислява от стойността на моларния коефициент на екстинкция (1,56 * 105 L/mol -1/cm -1), резултатите се изразяват в nmol/mg протеин.

Определяне на активността на каталазата

Активността на каталазата се определя в мозъка, ултрацентрифугиран чрез спектрофотометричния метод за скоростта на разлагане на водородния прекис. Количеството водороден прекис се определя в реакцията с 4% разтвор на амониев молибдат. Интензитетът на цвета на реакционния продукт се измерва при 410 nm. Каталазната активност се изчислява от разликата между екстинкциите на експерименталните и неактивните проби, като се използва моларен коефициент на екстинкция на водороден пероксид, равен на 22,2 * 10 3 mM -1 cm -1 и изразен в nmol/min/mg протеин. 13

Определяне на активността на супероксиддисмутазата

Активността на SOD се определя в ултрацентрифугирания мозък чрез инхибиране на образуването на формазан на n-нитротетразолиев хлорид (HTC). HTC се използва като индикатор за O 2 * - чиято редуцирана форма (формазан) се разтваря в ацетон. За получаване на O 2 * - използвана е фотохимична система, съдържаща 2,8 * 10 -5 М разтвор на рибофлавин, 1 * 10 -2 М разтвор на тетраметилетилендиамин в 0,05 М К-фосфатен буфер (рН 7,8) за облъчване с флуоресцентна лампа на 20 cm за 5 минути при стайна температура. За освобождаване на SOD от клетъчните органели се използва 0,5% разтвор на дезоксихолат. Реакцията се спира чрез добавяне на 20% разтвор на ТСА и ацетон. Оптичната плътност се записва на CPC-3 при 440 nm. Активността на SOD в единица акт/mg протеин. 14.

Определяне на активността на глутатион пероксидаза

Активността на глутатион пероксидаза (GP) се определя в мозъчния ултрацентрат в конюгираната реакция на глутатион редуктаза чрез загубата на NADPH. Активността се записва в среда, съдържаща 50 тМ К, Na-фосфатен буфер, рН 7,4; 1,0 * 10 -3 M EDTA, 0,2 * 10 -3 M NADPH, 1,0 * 10 -3 M GSH, 1 единица. действие/ml глутатион редуктаза, 30-60 μg протеин на ml среда върху CPC-3 при 340 nm. Като субстрат при определяне на общата активност на глутатион пероксидаза, кумен хидропероксид се добавя към средата при концентрация 1,5 * 10 -3 М. Реакцията започва чрез добавяне на субстрат и се провежда при температура 25 ° С 14 Концентрацията на протеин се определя в реакцията с фолинов реагент.

Методи за оценка на промените в концентрацията на изоензими NOS и асиметричен диметиларгинин (ADMA)

Концентрацията на изозими на азотен оксид синтаза (eNOS, nNOS, iNOS) беше определена в хомогенат на мозъка на плъх по метода на ензимен имуноанализ, използвайки стандартни реагенти на Cloud Clone Corp. Подготовката на пробите и напредъкът от анализа съответстваха на инструкциите, приложени към всеки набор от инструкции. Резултатите бяха прочетени на четец за микроплаки Infinite F50 (Tecan, Австрия).

Статистически методи

Резултатите от експериментите бяха обработени с помощта на софтуера STATISTICA 6.0 (StatSoft, Inc., САЩ). Изчислени са средната стойност и стандартната грешка на средната стойност, данните са изразени като M ± σ. Получените резултати бяха проверени за нормалност на разпределението с помощта на теста на Шапиро-Уилк. В случай на подчиняване на законите на нормалното разпределение, на Студента т-тест за изменение на Bonferroni за множество сравнения е използван за сравняване на средствата. В противен случай беше извършена по-нататъшна статистическа обработка на експерименталните резултати, използвайки непараметричния U-тест на Mann-Whitney.

РЕЗУЛТАТИ

Оценка на антиоксидантните свойства на 4-хидрокси-3,5-ди-трети-бутил канелна киселина.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Ендотелиопротективният ефект 4-хидрокси-3,5-ди-трети-бутил канелна киселина може да се основава на антиоксидантните свойства на това съединение (намаляване на образуването на MDA и DC с 52,6% (стр [7] Конфликт на интереси КОНФЛИКТ НА ИНТЕРЕСИ Авторите не заявяват конфликт на интереси с изпратения ръкопис.