Farzaneh Khademi

1 докторант, Катедра по тъканно инженерство и клетъчна терапия, Училище за модерни медицински технологии, Техерански университет по медицински науки, Техеран, Иран

Бехнам Данеш

1 докторант, Катедра по тъканно инженерство и клетъчна терапия, Училище за модерни медицински технологии, Техерански университет по медицински науки, Техеран, Иран

Абас Делазар

2 Професор, Катедра по фармакогнозия, Университет по медицински науки в Тебриз, Тебриз, Иран

Дариуш Мохамад Неджад

3 Асистент, Катедра по анатомични науки, Медицински факултет, Университет по медицински науки в Тебриз, Тебриз, Иран

Масуд Горбани

1 кандидат на докторантите, Катедра по тъканно инженерство и клетъчна терапия, Училище за модерни медицински технологии, Техерански университет по медицински науки, Техеран, Иран

Джафар Солеймани Рад

4 Професор, Катедра по анатомични науки, Медицински факултет, Университет по медицински науки в Тебриз, Тебриз, Иран

Резюме

ЗАДЕН ПЛАН

Атеросклерозата е основната причина за сърдечно-съдови заболявания, причинени от диета с високо съдържание на мазнини. Много от тези пациенти използват за своето лечение варени листа от дюля. Подкрепящата научна информация обаче е ограничена. Целта на това проучване е да се оцени ефектът от дюлевите листа върху прогресията на атеросклерозата и дали може да бъде подходяща алтернатива на статините.

МЕТОДИ

24 мъжки зайци бяха разделени на случаен принцип в две групи: нормална диета (6 n) и диета с висок холестерол (2% холестерол, 18 n) в продължение на 8 седмици. В края на 8-те седмици и на двете групи са взети кръвни проби и са измерени техните биохимични маркери. След това всички животни от групата с нормална диета и три от групата с високо съдържание на холестерол бяха убити, за да изследват атеромен плака в коронарната им артерия. Останалите 15 зайци от диетичната група с висок холестерол бяха разделени на случаен принцип в 3 групи (5 n) след прекратяване на мастната диета. На първата група не е било прилагано лечение, втората е получавала аторвастатин (0,5 mg/kg) перорално, а третата е получавала екстракт от листа от дюля (50 mg/kg) перорално в продължение на 12 седмици. В края на този период, след вземане на кръв, беше направена биопсия на коронарната артерия за хистологично изследване.

РЕЗУЛТАТИ

Резултатите показаха, че аторвастатинът и листата от дюля значително намаляват нивата на общия холестерол, триглицеридите, LDL, AST, ALT, AP, BUN и Cr в сравнение с първата група от групата с високо съдържание на холестерол (Р Ключови думи: Хиперлипидемия, атеросклероза, коронарни артерии, биохимични маркери, атеромична плака, аторвастатин, екстракт от листа от дюля

Въведение

Материали и методи

Наркотици и химикали

Всички лекарства и биохимикали, използвани в това проучване, са закупени от Sigma Co (St, Louis, Mo, USA) и от Merck Company (Darmstadt, Германия). Всички други химикали и реагенти са с аналитично качество.

Атерогенна храна

Чист прах от холестерол е закупен от Farzan Teb Co. (Merck, Германия). Ежедневната доза храна се измерва в продължение на 3 последователни дни. Скоростта на прием е получена за изчисляване на атерогенната диетична формула и количеството от 54 gr е взето предвид за всички животни. Приготвена е диета с високо съдържание на мазнини с 2% холестерол и се съхранява при 4 ° C.

Приготвяне на екстракта

Зелените сушени листа от дюля са закупени от Herbs Chemist (Тебриз, Иран). Метанолов 70% екстракт се приготвя чрез метод на мацерация. Екстрактите се филтрират три пъти и се концентрират до сухо под вакуум. След това се определя процентът на получения сух екстракт (7%) и той се поддържа при минусови градуси по Целзий до времето на приложение. Екстрактът се разтваря във вода, за да се дава перорално чрез сонда за игла.

Методи

Вземане на проби

Кръвни проби бяха събрани от всички зайци в два етапа, които бяха споменати по-рано. Плазмата се приготвя чрез центрофугиране при 3000 g за 15 минути. Серумни нива на липидни профили като общ холестерол (TC), триглицериди (TG), липопротеин с ниска плътност (LDL) холестерол, липопротеин с висока плътност (HDL) холестерол и чернодробни ензими, включително аспартат трансаминаза (AST), аланин трансаминаза (ALT), и алкална фосфатаза (AP) и други биомаркери за бъбречна функционалност (BUN, Cr) са записани от автоматичен анализатор.

Хистопатологично изследване

За вземане на проби животните се упояват чрез подходящи дози кетамин и ксилазин чрез интрамускулно инжектиране. Фиксацията беше перфузирана от физиологичен буфер, охладен с формалдехид PBS 4%, PH: 7.2 в сърдечна камера. Хистологична биопсия на коронарната артерия е извършена след торакотомия.

След торакотомия коронарните проби се потапят във формалин 10% за 48-72 часа. След това те бяха вградени в парафин и нарязани на дебели части (5 µm), впоследствие депарафинизирани чрез степенувани концентрации на етанол и ксилол, и след това бяха оцветени със специфично оцветяване с хематоксилин от желязо на Weigert. И накрая, повърхностите на цели плаки бяха измерени и сравнени с повърхностите на общите коронарни артерии от Motic Software. Дебелината на плаката беше потвърдена от трима наблюдатели.

Статистически анализ

TC: общ холестерол; TG: триглицерид; LDL: липопротеин с ниска плътност; HDL: липопротеин с висока плътност; AST: аспартат трансаминаза; ALT: аланин трансаминаза; AP: алкална фосфатаза

Хистопатологични находки на коронарните артерии

Хистологичните разрези на оцветени коронарни артерии и редуването в дебелината на коронарните плаки от всички групи зайци са показани на фигури 2, 3, 3 и и 4. 4. Не са наблюдавани атеросклеротични промени в нормалната диетична група (Фигура 3 а). Въпреки това, в интимната повърхност на коронарните артерии от диетичната група с висок холестерол се наблюдава хиперплазия в медиен слой, заедно с висока инфилтрация на клетките до мястото на образуване на плака (Фигура 3 b). Дебелината на плаката се е разширила във всички експериментални групи след спиране на диетата с висок холестерол. Дебелината на плаките в контролната група се е увеличила в сравнение с диетичната група с висок холестерол. Не се забелязва значителна разлика в степента на атеросклеротична дебелина между групите екстракт от аторвастатин и дюля и контролната група (Фигура 4 a-c).

върху

Микрофотография на участък от нормална коронарна артерия (контролна група) (а) и хиперплазия бяха наблюдавани в медиен слой, заедно с висока инфилтрация на клетките до мястото на образуване на плака (b) X40

Микрофотография на коронарна артериална секция от контролната група след спиране на диета с висок холестерол (а), аторвастатин (б) и екстракт от листа от дюля (в) Не се забелязва значителна разлика в степента на атеросклеротична дебелина между аторвастатин и дюлеви листа групи за извличане и контролна група

Дискусия

Извън сянката на съмнение, хиперлипидемията е най-важният рисков фактор за атеросклероза.1,19 Използването на ежедневна диета с високо съдържание на холестерол води до натрупването й в плазмената мембрана, което причинява увреждане на мембраната. Това като атерогенен стимул увеличава производството на растежни фактори и пролиферацията на гладкомускулните клетки (SMC) .20 Следователно, всички фактори, които намаляват нивата на холестерола, могат да повлияят на този процес.

В това проучване високото ниво на холестерол в плазмата е показано чрез хиперхолестеролемичен режим. Резултатите ни бяха подобни на проучването на Adaramoye et al. при които плъховете са получавали диети с висок холестерол.21 Освен това демонстрирахме, че липидните профили (TC, TG, LDL, HDL) бяха върнати до почти нормални нива чрез стандартна диета в продължение на 12 седмици след спиране на хиперхолестеролемичната диета в контролната група. Salazar et al. също така съобщава, че биохимичните параметри на зайците са били нормализирани чрез връщането им към стандартна диета. Хистологичните параметри обаче не бяха напълно възстановени

В настоящото проучване аторвастатин се използва като стандартно лекарство. Това лекарство е едно от семейството на статините, които намаляват холестерола чрез инхибиране на HMG-CoAreductase. Освен това, тъй като в това проучване е използван аторвастатин (перорално приложение), резултатите са доста предсказуеми.23 До този момент това лекарство се използва с диета с високо съдържание на холестерол по профилактичен метод. Въпреки това, ние използвахме това лекарство след натрупване на плака, за да демонстрираме намаляването или връщането на плаката и промените в биохимичния маркер. Получените резултати показват, че способността на лекарството да върне пациента в нормално състояние (нормални липидни профили и биомаркери) е била ефективна, но е била по-малка от групата, получавала екстракт от листа от дюля. Ранните ефекти от терапията със статини са намаляването на LDL с 24-63% .24

Няколко проучвания показват, че билковите или синтетичните лекарства намаляват смъртността от сърдечно-съдови заболявания (ССЗ) чрез регулиране на холестерола.25 Съответно са положени много усилия за намаляване на риска от ССЗ чрез регулиране на холестерола. Здравословните предимства на растителните храни са забелязани от някои проучвания. 26,27 Растенията съдържат различни флавоноиди като флавоноли, флавони, антоцианидини и кверцетин.28 Освен това оценихме ефикасността на екстракта от листа от дюля върху атеромен плака. Hayek et al. в своето проучване, показват намаляване на окисляването от флавоноиди.29 В друго проучване два флавоноида под формата на глюкуронидни и сулфатни съединения са прилагани орално на плъхове и техният антиоксидантен капацитет се увеличава.

Изследванията илюстрират, че фенолни съединения, обикновено производни на флавонол като кемпферол гликозид и 0-3 кемпферол ретиноид, са открити в листата на тамян и действат като филтърна защита срещу UV лъчение.12,13,15

Флавоноидите причиняват съдова експанзия чрез увеличаване на азотния оксид; това е антиоксидантно свойство срещу LDL.30,31 Епидемиологичните проучвания отчитат благоприятния ефект на червеното вино и храни, богати на флавоноиди, за намаляване на риска от висок холестерол.31-33 Друго проучване сравнява защитния ефект на екстракта от метанолови дюли и зелено чай върху хемолизата на еритроцитите, причинена от окислително увреждане от свободните радикали.21 Антихемолитичният ефект при хората е демонстриран и от двата листа. Това проучване също така разкри, че антиоксидантната способност на екстракта от листа е по-ниска от екстракта от зелен чай. Освен това няма линейна връзка между антиоксидантната активност и намаляването на свободните радикали. Всъщност антиоксидантната активност на листата може да бъде причинена от антагонистичната или синергичната активност на биоактивни съединения, които все още са неизвестни.

В допълнение, настоящото проучване разкри значително намаляване на липидния профил (TC, TG и LDL) и повишаване на HDL холестерола във всички експериментални групи след спиране на атерогенната диета. Тези резултати илюстрират, че групата, получавала екстракт от листа от дюля, е по-подобна на групата с нормална диета, а групата на аторвастатин има по-добър статус от групата, която не приема лекарства. От друга страна, Suk et al. показа, че серумните нива на плъхове, получаващи диета с висок холестерол, са по-високи в сравнение с плъховете, които получават стандартна диета. След като получиха стандартна диета в продължение на 6 седмици, те успяха да се върнат към нормалните си нива на серумен холестерол. Въпреки това не се наблюдава промяна в нивото на триглицеридите.36 В нашето проучване и двете нива на TC и TG намаляват значително; групата, получавала екстракт от листа от дюля, е била по-подобна на групата, получавала стандартния режим в това отношение. За потвърждение, същите резултати са наблюдавани при зайци, хранени с ябълков сок и групата, която е получавала висок холестерол. Този резултат показва, че ябълковият сок е бил ефективен за коригиране на дислипидемия, причинена от диета с високо съдържание на холестерол.37 От друга страна, консумацията е свързана с диета с висок холестерол.

Водният екстракт от листа от дюля се администрира в трите дози от 50, 100 и 200 mg/kg с изопротеренол (ISO) от Rajadurai et al. Те ги прилагат орално, инжектират и сравняват резултатите с алфа-токоферол. Нашето проучване разкри, че екстрактът от листа от дюля в доза от 200 mg/kg може да регулира нивата на липидния профил и да намали ензимите CK и LDH, повишени от ISO. Ефектът на водния екстракт от листа от дюля 200 mg/kg е равен на ефекта на алфа-токоферолин 60 mg/kg.17 Методът на изследване и целта на това проучване са различни от нашето проучване; използвана е атерогенна диета с екстракт от дюля за оценка на превантивния ефект на екстракта. Освен това изследвахме влиянието на процеса на развитие или регресия на екстракта от дюля. В това проучване използвахме общ екстракт, докато предишни проучвания не споменаваха компонента на използвания екстракт от листа.

Възпалението има важна роля за развитието на атеросклероза. Намаляването на възпалението в коронарната плака в групата, приемаща аторвастатин, се дължи на вече доказаните противовъзпалителни ефекти на статините.

В някои изследвания активността на някои ензими по време на възпалителния процес е била инхибирана. Намалените нива на противовъзпалителни цитокини, като CRP, с понижаването на TC и LDL предотвратяват развитието на атеросклероза.

Заключение

Резултатите от настоящото проучване потвърдиха връзката между хиперхолестеролемия и атеросклероза, а също така, че екстрактът от листа от дюля, подобно на аторвастатин, може ефективно да намали атеросклерозата, предизвикана от диета с високо съдържание на мазнини.

Въпреки това, според хистологичното определяне, аторвастатинът и екстрактът от листа от дюля не са били в състояние да предотвратят увеличаване на плаката в коронарните съдове след образуването на плака в продължение на 12 седмици. И двете лечения са успели да намалят серумните нива до почти нормално ниво след образуване и натрупване на плаки; екстрактът от листа от дюля е по-ефективен от аторвастатин, което може да се дължи на неговите фенолни компоненти. Изглежда, че намаляването на плаката трябва да се изследва по-дълго време, поне за дозата, използвана в нашето проучване.

Препоръчват се по-нататъшни проучвания, за да се намери точния механизъм на екстракта от листа на дюля при подобряване на ендотелната функция. Ще бъдат определени по-ефективни клинични приложения на тези природни съединения.