Guining Wei и Naihong Chen

хипоурикемични

Катедра по фармакология, Институт по китайска медицина и фармацевтични науки Гуанси, 20-1 Dongge Rd,

Нанин; Институт по Материя Медика, Китайска академия за медицински науки и Медицински колеж в Пекин,

1 Xiannongtan Rd, Пекин (Китай);

Тел. +867715869102, имейл [email protected], [email protected]

Сродни статии за „“

  • Facebook
  • Polyrhachis Vicina Roger За индуцирана от калиев оксинат хиперурикемия при плъхове - https://www.karger.com/Article/FullText/487675 @KargerPublisher "target =" _ blank "onclick =" javascript: window.open (this.href, '', 'menubar = не, лента с инструменти = не, преоразмеряваща = да, ленти за превъртане = да, височина = 400, ширина = 600 '); върнете false; "title =" Tweet тази страница "onclick =" ga (' send ',' event ',' FullText ',' Social Media ',' Fix Twitter '); "> Twitter
  • LinkedIn
  • Polyrhachis Vicina Roger За индуцирана от калиев оксинат хиперурикемия при плъхове% 0A% 0A https://www.karger.com/Article/FullText/487675 "onclick =" ga ('send', 'event', 'FullText', 'Social Media', 'Fix Email'); "> електронна поща

Резюме

Въведение

Материали и методи

Химикали и реактиви

Калиев оксинат и алопуринол са закупени от Sigma-Aldrich Chemical Company. Търговски комплекти за оценка на SUA, XOD, SCr, BUN, SOD и MDA са получени от Института по биотехнологии Jiancheng (Нанкин, Китай). ELISA комплекти за IL-1β, IL-6 и TNF-α анализ са закупени от R&D Systems (Минеаполис, САЩ). Първични антитела за URAT1, GLUT9 и OAT1 са предоставени от SaiChi Biotech (Пекин, Китай). Глицералдехид-3-фосфат дехидрогеназата (GAPDH) и анти-заешките IgG антитела са закупени от Jingmei Biotech (Шанхай, Китай). Всички други реактиви бяха стандартни лабораторни реактиви с аналитичен клас и бяха закупени на местно ниво.

Животни

Възрастни мъжки плъхове Sprague-Dawley (200–250 g) и KM мишки (18–22 g) са доставени от Центъра за експериментални животни на Фармацевтичния университет в Гуангдонг и са настанени (5 на клетка) при стандартни условия (12-часова светлина/тъмен цикъл; 22 ± 1 ° C околна температура; и 55 ± 10% относителна влажност), със свободен достъп до храна и вода. Всички експериментални процедури са били в съответствие с Националния здравен институт за грижи и използване на лабораторни животни и са получили одобрение от Комитета за грижа за животните на Фармацевтичния университет в Гуангдонг.

Изготвяне на AFPR

Изсушени Polyrhachis vicina Rogers са предоставени от местен доставчик на китайска материя медика в град Нанин (Гуанси, Китай). Образецът на ваучера (PR-201505) е идентифициран от професор Xianbiao Zeng от Института по китайска медицина и фармацевтика в Гуангси и е депозиран в хербария на Института по китайска медицина и фармацевтика в Гуангси. Изсушени Polyrhachis vicina Rogers (1000 g) се смилат и се екстрахират 3 пъти с 10 L етанол/вода (95: 5, v/v) (Sigma-Aldrich, Сейнт Луис, Мисури, САЩ) в система за кипене (всяка екстракция в продължение на 1 час) . Екстрактите се обединяват и филтрират, последвано от водна баня при 75 ± 5 ° С, за да се получи суров воден етанолов екстракт (CAE). CAE се екстрахира 3 пъти с петролен етер (Sigma-Aldrich, Сейнт Луис, Мисури, САЩ). Екстрактите се обединяват и филтрират, последвано от водна баня при 75 ± 5 ° C, за да се получи активната фракция (AFPR), с добивно тегло 3,96% изсушено Polyrhachis vicina Rogers (т/т). GC-MS анализът показва, че ненаситените мастни киселини включват 71,14% от основните компоненти, с 60,77% октадеценова киселина, 9,31% хептадеценова киселина и 1,06% лейнолова киселина, наситените мазнини съдържат 25,04% от компонентите в AFPR [44].

Приготвяне на лекарства и тестови разтвори

Разтворът от алопуринол (Sigma-Aldrich, Сейнт Луис, Мисури, САЩ), разтвори AFPR и калиев оксинат (Sigma-Aldrich, Сейнт Луис, Мисури, САЩ) се приготвят според средното тегло на всяка група. Алопуринол и AFPR бяха разтворени в Tween-80: вода (2: 98) (носител) (Sigma-Aldrich, Сейнт Луис, Мисури, САЩ). Калиев оксинат се приготвя в суспензия с 0.9% разтвор на NaCl.

Тест за остра токсичност

Проведен е остър токсикологичен тест при плъхове съгласно метода на Zheng et al [45]. с модификации. Плъховете (п = 6 мъже/група) бяха подложени на единични дози AFPR (285 или 2000 mg/kg телесно тегло) или носител (Tween-80: вода (2: 98)) чрез сондаж. За откриване на токсичност, сугестивни признаци на поведенчески характер (включително бдителност, безпокойство, раздразнителност, легнало положение, повръщане и страх), неврологични профили (включително спонтанна активност, конвулсии, походка, кървене отвори и реакция на докосване/болка) и автономни реакции ( включително дефекация и микция) и/или смъртност. Извършва се внимателно наблюдение на интервали: 0, 15, 30 и 60 минути, на всеки 4 часа през първите 2 дни и на всеки 12 часа през останалите 12 дни. Храната и водата бяха осигурени по желание. Изчислена е дозата, отговорна за смъртта на 50% от експерименталните животни (LD50).

Създаване на хиперурикемичен модел на плъхове и приложение на лекарства

В настоящото изследване е приет експериментален модел на хиперурикемия, индуцирана от калиев оксонат, съгласно Lemos Lima Rde C et al [46]. с модификации. Петдесет мъжки плъхове бяха разделени на случаен принцип в 5 експериментални групи (n = 10), които бяха на гладно в продължение на 1 час преди приложението на лекарството. Калиев оксинат се прилага на плъхове от групи 2–5 (650 mg/kg, ig) в 8:00 ч. Сутринта, а медикаментозното лечение се дава чрез сонда 4 часа след калиевия оксинат дневно в продължение на 12 последователни експеримента. Групи 1 (нормална контролна група) и 2 (група с модел на хиперурикемия) получиха носител самостоятелно. Група 3 се лекува с алопуринол (20 mg/kg). Групи 4 и 5 са ​​лекувани с AFPR в дози съответно от 15,60 и 3,65 mg/kg телесно тегло.

Вземане на проби от кръв, чернодробна и бъбречна тъкан

На 28-ия ден (последния ден от 4-та седмица), 56-ия ден (последния ден от 8-мата седмица) и 84-ия ден (последния ден от 12-тата седмица), 1 час след приложението на лекарството, бяха взети кръвни проби от опашната вена. Тези проби се поддържат при стайна температура до коагулация на кръвта и след това се центрофугират при 1500 × g в продължение на 5 минути. Супернатантите бяха събрани и центрофугирани при 3000 х g за 10 минути, за да се получи серум. На всички животни се дава пентобарбитал натрий (50 mg/kg, интраперитонеална инжекция) и след това се умъртвява на 84-ия ден. Чернодробните проби бързо се дисектират върху лед и се хомогенизират в 9 х обема 80 mM натриев пирофосфатен буфер (рН 7.4). Хомогенатът се центрофугира при 3000 х g за 10 минути и супернатантата се използва за XOD анализа. В допълнение, кората на бъбреците беше бързо и прецизно отделена върху ледена плоча и поддържана при -80 ° C за анализ на протеини.

Определяне на SUA

Нивата на SUA на 4, 8 и 12 седмици след приложението на лекарството са измервани, за да се определи успешното установяване на модела на хиперурикемия и терапевтичните ефекти на AFPR чрез метода на фосфотунгстичната киселина [47], съгласно инструкциите на производителя (Jiancheng Institute of Biotechnology, Нанкин, Китай).

Измерване на серумна и чернодробна XOD активност

Активността на XOD в чернодробните и крайните серумни проби се измерва с помощта на комплект за анализ на XOD (Институт по биотехнологии Jiancheng, Нанкин, Китай) следвайки инструкциите на производителя.

Анализ на експресия на протеин, свързана с урат транспортер в бъбречните тъкани

Екстракция на протеини от бъбреци и Western blot анализи за бъбречни URAT1, GLUT9 и OAT1 са приети съгласно предишно проучване [48], с модификация. Използваните първични антитела (SaiChi Biotech, Пекин, Китай) са следните: анти-URAT1 (1: 1000), анти-GLUT9 (1: 1000), анти-OAT1 (1: 1000), анти-GAPDH (1: 1000), съответно. Имунореактивните ленти се определят количествено чрез система за изображения Bio-Rad VersaDoc модел 5000 със софтуера Bio-Rad Quantity One (Bio-Rad, Hercules, CA). Относителното количествено определяне за Western blot анализ се изчислява след нормализиране до размера на GAPDH.

Измерване на провъзпалителни цитокини

Нивата на серумни IL-1β, IL-6 и TNF-α бяха измерени, като се използват ELISA комплекти (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA), съответно, съгласно инструкциите на производителя.

Оценка на антиоксидантния ензим и липидната пероксидация

А нивата на супер оксидна дисмутаза (SOD) и малондиалдехид (MDA) в серума се определят чрез колориметричен метод, използвайки налични в търговската мрежа комплекти (Jiancheng Institute of Biotechnology, Nanjing, China) в съответствие с инструкциите на производителите.

Оценка на бъбречната функция и бъбречен хистологичен анализ

Нивата на SCr и BUN в серумните проби се определят чрез колориметричен метод, използвайки налични в търговската мрежа комплекти (Jiancheng Institute of Biotechnology, Nanjing, China) в съответствие с инструкциите на производителите за оценка на бъбречната функция на плъхове с хиперурикемия. Част от бъбречната тъкан беше незабавно фиксирана в 10% фосфатно буфериран формалин (Sigma-Aldrich, Сейнт Луис, Мисури, САЩ), обработена чрез рутинни хистологични процедури, вградена в парафин, разделена на 5 μm парчета и монтирана на предметно стъкло. Пробите бяха оцветени с хематоксилин и еозин (H&E) (Sigma-Aldrich, Сейнт Луис, Мисури, САЩ) за хистопатологично изследване.