Изследователска статия - Биомедицински изследвания (2019) том 30, брой 5

фуроземид

Недеклариран фуроземид в хранителни добавки.

Катедра по фармакогнозия и фармацевтична химия, Фармацевтичен факултет, Медицински университет Пловдив, Пловдив, България

* Автор-кореспондент: Станислава Иванова
Катедра по фармакогнозия и фармацевтична химия
Медицински университет Пловдив
Пловдив
България

Дата на приемане: 23 юли 2019 г.

Посетете за още свързани статии на адрес Биомедицински изследвания

Резюме

Последните проучвания твърдят, че хранителните добавки могат да съдържат фармакоактивни съставки или недекларирани лекарствени вещества с потенциален риск за здравето. Най-често тези продукти са замърсени с анаболни стероиди, ефедрин, сибутрамин, диуретици и други. Приемът на заразена хранителна добавка може да доведе до сериозни последици за здравето (фармакологичен ефект на веществата, странични ефекти, лекарствени взаимодействия и много други) или други негативни последици като неуспех на допинг тест (за професионални спортисти). Извършихме HPLC скрининг за фуроземид. Измерванията бяха извършени при 228 nm при скорост на потока 0,8 ml/min. Подвижната фаза се състои от метанол и вода в съотношение 80: 20 (v/v). РН на подвижната фаза се регулира 3,3 с фосфорна киселина. Хроматографска колона - Microsorb-MV 100-5 C18 150 × 4.6 mm. Анализирахме 30 хранителни добавки в категорията „здраве на простатата“. Ние открихме недеклариран фуроземид в 10% от пробите.

Ключови думи

Хранителни добавки, Хранителни добавки, HPLC фуроземид, недекларирани вещества, допинг.

Въведение

В същото време консумацията на хранителни добавки нараства бързо: потребителите искат да подобрят или запазят физиологичните или метаболитните функции. Очакванията на потребителите варират от профилактика на заболяване/състояние до лечение на заболяване/състояние и дори лечение [3]. Диетичните добавки в световен мащаб не трябва да претендират за диагностика, лечение, лечение или предотвратяване на болести [2], тъй като се отнасят до продуктите, предназначени да компенсират хранителните вещества, които иначе не биха могли да присъстват достатъчно в диетата [3]. Неотдавнашно проучване на 443 уебсайта обаче показа тревожни резултати: 81% от хранителните добавки направиха здравни претенции. 55% твърдят, че продуктът е лекувал, предотвратявал, диагностицирал или излекувал специфични заболявания [2]. Такива продукти могат да заблудят потребителите и това да доведе до сериозни последици за здравето: неадекватно самолечение, подценяване на здравословното състояние и други.

В резултат на липсата на задължителен аналитичен контрол и либерална регулация в повечето части на света, последните проучвания твърдят, че хранителните добавки често съдържат фармакоактивни съставки или недекларирани лекарствени вещества с потенциален риск за здравето [4-18]. Най-често хранителните добавки са замърсени с анаболни стероиди, ефедрин, сибутрамин, диуретици и други. Замърсяванията могат да възникнат случайно (поради лоши производствени практики) или умишлено [2]. Приемът на заразена хранителна добавка може да доведе до сериозни последици за здравето (фармакологичен ефект на веществата, странични ефекти, лекарствени взаимодействия и много други) или други негативни последици като неуспех на допинг тест (за професионални спортисти). Анализът на данните от спешните кабинети в САЩ за десетгодишен период е оценил 23 000 посещения поради неблагоприятни ефекти след прием на хранителни добавки. 2156 от тези хора са хоспитализирани [2].

В повечето случаи на замърсяване продуктите се отнасят към следните категории хранителни добавки: загуба на тегло, хранителни добавки за енергия и хранителни добавки за изграждане на мускули. В това проучване решаваме да анализираме друга категория хранителни добавки - здравето на простатата. Извършихме поредица от анализи за скрининг на фуроземид.

Откритието на първите диуретици от близо шестдесет години остава основен етап в терапевтичния прогрес. Фуроземид (4-хлоро-2 - [(фуран-2-илметил) амино] -5-сулфамоилбензоена киселина) е контурен диуретик, който е патентован през 1959 г. Той е одобрен за медицинска употреба през 1964 г. Фуроземид (Фигура 1) се използва при лечение на застойна сърдечна недостатъчност и отоци [19]. Диуретичният ефект на перорално приложен фуроземид се проявява обикновено 30 минути след прием [19]. Фуроземид може също да се прилага интравенозно при 40 до 80 mg/ден. В днешно време той е един от най-широко използваните диуретици в клиничната практика. Световната антидопингова агенция счита фуроземид като допинг, тъй като приемът му може да маскира приема на други допинг вещества. Веществото на фуроземид е евтино. В Съединените щати генеричните лекарства, съдържащи фуроземид, струват около 0,15 щатски долара на ден в България (Европейски съюз), генерично орално лекарство, съдържащо фуроземид, струва около 0,035 евро на ден. Цената на веществото и неговият ефект са възможна причина за фалшифициране на хранителни добавки с него [16,17].

Фигура 1: Структура на фуроземид.

Поради голямото му клинично значение са разработени множество аналитични процедури за откриване на фуроземид във фармацевтични продукти и биологични проби [20-26].

Материали и методи

Материали

Референтен стандарт: Фуроземид (Sigma-Aldrich).

Реактиви: Метанол за HPLC (Sigma-Aldrich); Фосфорна киселина- (Sigma-Aldrich); Дейонизирана вода.

Проби: 30 хранителни добавки с благотворно въздействие върху здравето на простатата. Пробите са закупени от магазини за хранителни добавки, аптеки и интернет.

Методи

Инструментариум: Varian Pro Star HPLC система, UV детектор, хроматографска колона - Microsorb-MV 100-5 C18 150 × 4.6 mm, спринцовки Hamilton, предназначени за използване с ръчни HPLC инжекционни портове (25 mcl).

Хроматографски условия: Подвижната фаза се състои от метанол и вода в съотношение 80: 20 (v/v). рН - 3,3, коригирано с фосфорна киселина (Sigma-Aldrich).

Елуиране: Изократично измиване. Измерванията бяха извършени при 228 nm при скорост на потока 0,8 ml/min. с инжекционен обем 20 микролитра.

Приготвяне на стандартен разтвор и разтвори за изпитване: Основните разтвори се приготвят в метанол - вода (v/v 7: 3) при различни концентрации. Стандартният разтвор и тестовите разтвори се приготвят чрез разреждане в разтворител, съдържащ метанол 70% и вода 30%.

Резултати и дискусия

Валидиране на метода

Методът е валидиран съгласно указанията на ICH [27]. За скрининга използвахме Varian Pro Star HPLC система: хроматографска колона - Microsorb-MV 100-5 C18 150 × 4.6 mm и UV детектор. Детекторът е настроен на 228 nm. Подготвили сме подвижна фаза, съставена от метанол и вода в съотношение 80: 20 (v/v). РН на подвижната фаза се регулира до рН-3,3 чрез добавяне на фосфорна киселина (Sigma-Aldrich).

Стандартен разтвор на фуроземид: 5,0 mg от съответното вещество фуроземид (Sigma Aldrich) се претегля в мерителна колба (10 ml). Веществото се разтваря в 10 ml разтвор, съдържащ (70% метанол/30% вода). Концентрация на изходния разтвор - 500 μg/ml. Работните разтвори на фуросемид се приготвят чрез разреждане на основния разтвор. Установихме времето за задържане на стандарт фуроземид - 2,19 минути. Фигура 2 представлява хроматограма на стандартен разтвор на фуроземид.

Фигура 2: Хроматофрами на стандартни разтвори на фуроземид стандарт в различни концентрации.

Линейност: Типична калибрационна крива (Фигура 3) от площта на пика на фуроземид в границите на концентрация от 250 μg/ml - получени са 1,5 μg/ml със следната линия на линейна регресия: Y = 125904x + 366243 (R2 = 0.9865).

Фигура 3: Калибрационна крива.

Граница на откриване:

Където: σ = стандартното отклонение на реакцията; S = наклон на калибрационната крива; DL = граница на откриване.

Наклонът S се изчислява от калибрационната крива на аналита.

Установихме DL = 0,031 mkg/ml

Прецизност: Оценихме вътрешната точност (повторяемост) и междудневната точност (междинна точност). Стойностите на относителното стандартно отклонение във всички случаи бяха по-малко от 1,4% за повторяемост и междинна точност. Тези резултати показват, че методът има адекватна точност при определяне на фуроземид.

Точност: Точността беше оценена чрез повторение на анализа на пробите от три различни концентрации 50, 75 и 100%. За всяко ниво на концентрация сме подготвили три теста. Средно възстановяване: съответно 98,46 ± 0,14%. Резултатите показват, че методът е точен.

Здравина: Оценихме влиянието на вариациите на pH в подвижната фаза и нейния състав (съотношение метанол/вода). Установихме, че рН на подвижната фаза може да варира между 3,2 и 3,5 с незначителни въздействия върху пиковите зони, пиковата асиметрия и времето на задържане. Установихме, че делът на метанол/вода в подвижната фаза може да варира с +/- 1% с незначителни въздействия върху пиковите площи, пиковата асиметрия и времето на задържане. Всеки експеримент беше извършен повторно (n = 6).

Приложение на метода при анализ на хранителни добавки

Фигура 4: Хроматограма на проба N14.

Фигура 5: Хроматограма на проба N 18.

Фигура 6: Хроматограма на проба N 26.

Недекларираният фуроземид варира между 9 и 35, 5 mg/на капсула. Всички замърсени хранителни добавки са етикетирани: 1 капсула 2 пъти дневно. Приемът на недеклариран фуроземид в тези дози определено би довел до значително увеличаване на диурезата на пациента. За някои потребители това може да е положителен ефект. Друг ефект би било значително понижаване на кръвното налягане, което може да бъде много опасно за някои потребители. Приемът на фуроземид е свързан с много странични ефекти. Честите нежелани реакции от приема на фуроземид включват: хипокалиемия, хипомагнезиемия, сухота в устата, главоболие и други. Приемът, без да се знае за фуроземид, може също да доведе до много опасни лекарствени взаимодействия. Друг голям риск от приема на недеклариран фуроземид е положителният допинг тест. Ако професионален спортист използва замърсена с фуросемид хранителна добавка, той ще даде положителна допинг проба. Фуроземидът се счита за допинг вещество. Той е включен в категорията диуретици и маскиращи агенти. Наличието на недеклариран фуроземид в хранителните добавки е изключително опасно.

Заключение

Използването на хранителни добавки по целия свят непрекъснато нараства. Този факт поражда някои важни опасения относно безопасността и ефикасността. Много изследователи твърдят, че някои хранителни добавки могат да съдържат фармакоактивни съставки или недекларирани лекарствени вещества с потенциален риск за здравето. Извършихме HPLC анализ на 30 различни хранителни добавки в категория „здраве на простатата“. Настоящият HPLC метод осигурява задоволителни резултати с ниско ниво на откриване, добра точност и стабилност. Приложението на метода позволява определянето на фуроземид с точни резултати. Ние открихме недеклариран фуроземид в 10% от пробите. В хранителните добавки продължават да се наблюдават лоши производствени процеси или умишлено замърсяване с лекарства или други фармакоактивни вещества. Приемът на заразена хранителна добавка може да доведе до много сериозни последици за здравето.