Свързани термини:

  • Антитела
  • Боя
  • Имуноглобулин М
  • Тест за аглутинация
  • Имунособентен анализ, свързан с ензимите
  • Имуноглобулин G антитела
  • Токсоплазмоза
  • Непряка техника на флуоресцентни антитела

Изтеглете като PDF

преглед

За тази страница

Психомоторно забавяне и регресия

Gerald M. Fenichel MD, в клинична детска неврология, 2005

Диагноза.

Тестът за оцветяване на Sabin-Feldman е стандарт за диагностициране, но друг полезен серологичен тест за диагностициране на вродена токсоплазмоза при новородени е ензимно-свързан имуносорбентен анализ, който показва IgM-специфично антитяло срещу токсоплазма в кръв от пъпна връв. Демонстрацията на IgM-специфични антитела е от съществено значение за доказване на активна инфекция при новороденото. IgG-специфичните антитела се появяват в серума на новороденото чрез пасивен трансфер от майката и не показват активна инфекция. Постоянството на IgG-специфичните антитела корелира с активната инфекция. При по-големи деца диагнозата изисква не само серологични доказателства за предшестваща инфекция, но и съвместими клинични характеристики.

Токсоплазмоза

Тест за боя на Сабин-Фелдман

Тестът за оцветяване на Sabin-Feldman се основава на наблюдението, че когато живите организми (напр. От перитонеалния ексудат на мишките) се инкубират с нормален серум, те се подуват и оцветяват в дълбоко синьо, когато се добави метиленово синьо към суспензията [10]. Паразитите, изложени на серум, съдържащ антитела, при същите условия изглеждат тънки и изкривени и не се оцветяват при добавяне на багрилото. Това се дължи на лизис на организмите [615]. Мембраната е нарушена поради активиране на комплементната система [616]. Съобщеният титър е това разреждане на серума, при което половината от организмите не са умъртвени (оцветени), а другата половина са умъртвени (неоцветени). (Петното не се изисква. Диференцирането на лизирани от нелизирани организми може лесно да се извърши под фазова микроскопия.) Световната здравна организация (СЗО) препоръчва титрите в повечето серологични тестове да бъдат изразени в IU/ml серум, в сравнение с международен стандартен референтен серум, който се предлага при поискване от СЗО [617].

Паразити и гъби

Стивън Р. Биндър, Патрис Д. Сарфати, в Наръчника за имуноанализа (четвърто издание), 2013 г.

Технология за диагностика и анализ

Класическият серологичен референтен тест, използван при диагностицирането на токсоплазмоза, е тестът за оцветяване на Sabin-Feldman. Референтен тест, използван за потвърждение, е тестът за диференциална аглутинация, който сравнява резултатите, получени с фиксирани с формалин и ацетон тахизоити; този метод е известен също като HS/AC тест. Тези два теста изискват източник на жизнеспособни тахизоити и висока степен на техническа експертиза. Днес те се предлагат само от специализирани лаборатории, но често се използват в САЩ за разследване на майчина инфекция.

В повечето лаборатории днес скринингът се извършва с помощта на чувствителни и специфични ELISA тестове както за IgM, така и за IgG антитела. Когато се изследват майчините инфекции, е от съществено значение да се разграничат последните от минали инфекции. Положителният IgM сам по себе си не може да се използва като доказателство за остра инфекция, тъй като клирънсът на IgM може да бъде бавен при много индивиди (няколко месеца или повече).

Налични са редица опции, които да датират хода на инфекцията. Извън САЩ е обичайно да се определя индексът на авидност чрез измерване на IgG сигнала в присъствието и отсъствието на денатуриращ агент като урея, SDS или етаноламин. Индексът на авидност се изчислява, както следва:

Индексите на авидност от 50% или повече се считат за индекси на висока авидност и съответстват на минали инфекции, докато индексите от 35% или по-малко предполагат остра инфекция; граничните стойности се различават леко при няколко търговски доставчика. Въпреки това, авидицията на IgG може да се развие с различна скорост при различните жени и много жени ще дадат гранични резултати, така че тестът за авидност трябва да се използва само за изключете инфекция през предходните 3-4 месеца. Проучване за сравнение от 2009 г. показва само умерено съгласие между тези методи; това може да отразява факта, че много от жените са имали скорошни инфекции. Използването на втори тест за чувствителност или имуноблотинг може да предложи допълнителна увереност за минала инфекция. Използването на PCR се използва най-често днес за установяване на активна инфекция, когато тестването на авидност не е убедително.

Медицинска ретина

Дъглас А. Джабс, Куан Донг Нгуен, в Ретина (Четвърто издание), 2006

Серологични тестове за демонстрация на антитела към токсоплазма

Няколко серологични теста могат да докажат наличието на антитела към токсоплазма, включително тест за багрило на Сабин-Фелдман, тест за непряко флуоресцентно антитяло, тест за непряка хемаглутинация, тест за фиксиране на комплемента и тест за ензимно свързан имуносорбентен тест (ELISA). Непряките флуоресцентни антитела и ELISA тестове сега се използват най-често. Тъй като обаче разпространението на антитела срещу токсоплазма е високо в определени общности и тъй като антителата с висок титър могат да продължат с години при иначе здрави хора, интерпретацията на тези тестове често е изпълнена с трудности. 83 При хората разпространението на серопозитивност към антитела към токсоплазма се увеличава с възрастта. В страни като Франция разпространението на антитела срещу токсоплазма е по-голямо от 90% през четвъртото десетилетие от живота, а в САЩ се изчислява, че 20% до 70% от здравите възрастни хора са били преди това заразени с токсоплазмоза.

При очната токсоплазмоза обикновено са ниски титри на IgG антитела срещу токсоплазмоза. Ако клиничната лезия е характерна за токсоплазмозата и серологичният титър е положителен, диагнозата хориоретинит на токсоплазма обикновено може да бъде поставена с увереност. Ако лезията на ретината е нетипична и серологията е положителна, диагнозата хориоретинит на токсоплазма е само предполагаема, поради високото разпространение на антителата сред общата популация. 7

Токсоплазмоза при диви и домашни животни

Дейвид С. Линдзи, Jitender P. Dubey, в Toxoplasma Gondii (Второ издание), 2014

6.2.10 Насекомоядни

Малко се знае за токсоплазмозата при насекомоядните. Разпространението на T. gondii, използвайки теста за оцветяване на Sabin-Feldman, е било по-малко от 1% при 578 насекомоядни от Чешката република (Hejlicek et al., 1997). Смъртоносна токсоплазмоза е диагностицирана при непълнолетна мъжка обикновена бенка (Talpa europaea) от Германия (Geisel et al., 1995). Мозъкът и/или сърцата от три от 22 белозъби землеройки (Crocidura russula) от биологични свинеферми в Холандия са положителни за T. gondii чрез PCR (Kijlstra et al., 2008). В друго проучване от органични ферми за свине от Холандия, нито един от мозъците от девет обикновени землеройки (Sorex araneus) и два (2%) мозъка от 102 белозъби землекопи (Crocidura russula) не е бил положителен от PCR за T. gondii (Meerburg и др., 2012). Нито една от двете средиземноморски водни землерийки (Neomys anomalus) от Германия не е била положителна чрез серология или PCR (Herrmann et al., 2012).

Вирусни, протозойни и свързани с тях вътречерепни инфекции

Серологични изследвания.

Очна болест, дължаща се на Toxoplasma gondii

5.3 Епидемиология

Преди средата на ХХ век T. gondii не беше широко признат като причина за очни заболявания като цяло или за хориоретинални лезии в конкретни случаи. С въвеждането на теста на Сабин-Фелдман (Sabin, 1948) стана ясно, че инфекцията с токсоплазма е не само широко разпространена, но до голяма степен асимптоматична. Има широки различия в серопреобладаването между различните страни, географски райони и етнически произход с 22,5% от възрастните в САЩ (Jones et al., 2001a) и 90% в Панама (Sousa et al., 1988) серопозитивни за антитела срещу токсоплазма. Най-малко 0,6% от жителите на Алабама (Maetz et al., 1987) и Мериленд (Smith и Ganley, 1972) имат хориоретинални белези, съответстващи на предишния хориоретинит на Toxoplasma. Без клъстери от лезии е неизвестно дали конкретна пигментна лезия е нормален вариант или вторичен за инфекцията с токсоплазма. Последните проучвания показват, че докато T. gondii все още е основната причина за заден увеит, придобитото заболяване се среща по-често от вродената инфекция (Gilbert and Stanford, 2000).

Вродената токсоплазмоза изглежда е най-високият риск от системна инфекция за развитието на очни лезии. Рискът от ретинохороидит от вътрематочна инфекция е 20% в ранните детски години и може да достигне до 80% в юношеството. Изчислено е, че вродената инфекция на очна токсоплазмоза засяга 3000 бебета, родени в САЩ всяка година с годишни разходи между 400 милиона и 8,8 милиарда долара всяка година (Roberts and Frenkel, 1990; Roberts et al., 1994; Wilson and Remington, 1980). Токсоплазмен хориоретинит се среща при 70% до 90% от пациентите с вродена инфекция с токсоплазма и е най-честата проява на заболяването (Alford et al., 1974). Въпреки че 85% от вродените инфектирани бебета изглеждат нормални при раждането, проучванията показват, че ако тези пациенти не бъдат лекувани, приблизително 85% от тях ще продължат да развиват хориоретинални лезии, някои от които водят до загуба на зрението, до зряла възраст (Koppe, 1974; Wilson et ал., 1980).

Докато класическото учение беше, че повечето, ако не и цялата очна токсоплазмоза е вторична по отношение на вътрематочната експозиция, ясно е, че придобитото заболяване е по-често, отколкото се смяташе досега (Holland, 1999) - и наистина постнаталната инфекция може да е причина за по-голямата част от токсоплазмен ретинохороидит (Gilbert и Станфорд, 2000). Произходът на класическото учение, че очната токсоплазмоза произтича от вродена инфекция, е от проучвания, които показват, че в южните тихоокеански острови има висока серопреобладаване на излагане на токсоплазмоза преди бременността и също така има нисък процент на очни заболявания (Darrell et al., 1964). В допълнение, подкрепата на класическото учение е рядкост в по-ранни проучвания на множество братя и сестри с очна токсоплазмоза. Освен това не е имало увеличаване на разпространението на очната токсоплазмоза с възрастта, което не е паралелно на съпътстващото нарастване на серопревариалността на токсоплазмозата с възрастта - и двете аргументират придобитото заболяване като източник на очна токсоплазмоза.

Последните проучвания съобщават за очна токсоплазмоза при братя и сестри, които не са близнаци (Glasner et al., 1992) и очна инфекция при придобита болест. Серологичните тестове в Palo Alto Medical Foundation предполагат, че много пациенти, проявяващи само очни симптоми на токсоплазмоза, наскоро може да са придобили инфекция, за разлика от повтарящата се вродена инфекция. Вероятно е, че предишни лезии при тези пациенти може да се дължат на по-ранни, неоткрити епизоди на придобита инфекция, тъй като хориоретиналните лезии, придобити по време на детството или в периферията на окото, могат да останат без отчет и да бъдат неправилно диагностицирани като вродени.

Няколко серологични проучвания на специфични популации предполагат, че очната токсоплазмоза се придобива предимно. Серопозитивността за T. gondii е сравнително висока в района на Erechim в Южна Бразилия. Предполага се, че това се дължи на културната практика за поглъщане на сурово свинско месо. Едно проучване установи, че разпространението на очни заболявания в Бразилия се увеличава с възрастта (Glasner et al., 1992). Вродената токсоплазмоза е рядка, тъй като повечето жени са изложени на инфекция преди първата си бременност. Случаите на братя и сестри, които не са близнаци и имат очна токсоплазмоза (Silveira et al., 1988), заедно с високия процент на очни заболявания там (17,7%) (Glasner et al., 1992) предполагат, че предишните представи за епидемиологията на това заболяване са струва си преразглеждане. По-високите нива на заболяване поради придобита инфекция в Бразилия могат да бъдат свързани с произволен брой фактори. Предполага се, че различни фактори относно гостоприемника, паразита и околната среда влияят върху хода на заболяването: разлики в генетиката или възрастта на гостоприемника при експозиция, интензивност, честота и продължителност на експозицията, начин на предаване и клонален тип, живот стадий и вирулентност на паразита.

Съобщава се за придобита очна токсоплазмоза във Франция (Couvreur and Thulliez, 1996), Канада (Burnett et al., 1998), Бразилия (Glasner et al., 1992; Silveira et al., 2001) и САЩ (McCannel et al., 1996; Montoya и Remington, 1996). Увлекателно популационно епидемиологично проучване на селски район на Бразилия разкрива домакинство, корелирано със тежестта на инфекцията (Portela et al., 2004). Не е открито очно заболяване при пациенти на възраст под 10 години, въпреки че има 47% доказателства за серологична инфекция. От всички възрастови групи 12,9% от серопозитивните пациенти са имали очни лезии, а пациентите на възраст над 55 години са имали най-голямо разпространение на очните лезии. Подобни домакинства имат леко повишен рисков фактор за очна токсоплазмоза; възрастта обаче е най-силният риск за очни лезии. Високи стойности за специфичен за GIPL IgA са свързани с по-големи очни лезии. Изглежда, че IgA е насочен срещу GIPL, получен от тахизоити. Докато в САЩ изглежда, че щамовете тип 2 на токсоплазмата са най-често срещаните щамове, свързани с човешка инфекция, в югоизточна Бразилия са съобщени хибриди тип 1, тип 3 или тип 1/3 с относително отсъствие на тип 2 (Dubey et al., 2002; Dubey et al., 2003; Fux et al., 2003).

Има няколко начина на предаване на токсоплазмата на хората и точната йерархия на важността на предаването е неизвестна и вероятно ще варира в зависимост от региона. Обикновено е трудно да се идентифицира източникът на експозиция на T. gondii при определен пациент. Предполага се, че по-голямата част от предаването става при поглъщане, независимо дали е от замърсена вода, необработено месо или замърсени продукти. Пример за идентифициран източник на храна (елени), който изглежда е свързан с пет случая на придобита токсоплазмоза при боравене или ядене на еленско месо, е убедителен (Ross et al., 2001). Вероятно има няколко все още неидентифицирани източника на храна в различни култури и региони, които са често срещан източник на предаване на токсоплазмоза. Нефилтрираната питейна вода беше идентифицирана като основен източник за високото разпространение на инфекцията в селски регион в Северна Бразилия (Bahia-Oliveira et al., 2003). Има един доклад за аерозолизиране в конна конюшня като източник на предаване (Teutsch et al., 1979).

В зависимост от проучването, навсякъде от 2 до 20% от заразените индивиди развиват очна токсоплазмоза (McCannel et al., 1996; Couvreur and Thulliez, 1996; Burnett et al., 1998; Glasner et al., 1992; Silveira et al., 2001; Монтоя и Ремингтън, 1996; Холандия, 1999).

Джоунс и Холанд изчисляват, че 14% от населението в САЩ е заразено с T. gondii до 40-годишна възраст и приблизително 2% от тези пациенти имат очно участие (Jones and Holland, 2010). Въз основа на оценката на преброяването в САЩ от 2009 г. 21 000 души ще развият токсоплазматични очни лезии и 4800 ще бъдат симптоматични. Други региони по света, като например Южна Бразилия, имат много по-голяма тежест на заболяванията, както поради по-високо разпространение на заболяването (56%), така и поради степента на очна проява (Dubey et al., 2012). По-нататъшни проучвания върху бремето на болестта са оправдани за определяне на подходящи програми за обществено здраве за превенция на заболяванията и лечение на засегнатите лица.