Вендзун Джи

1 Катедра по фармакология, Училище за основни медицински науки, Център за научни изследвания в здравеопазването на университета Xi’an Jiaotong, Xi’an, Shaanxi, Китай

2 Катедра по фармация, Народна болница в Тайчжоу, Тайчжоу, Дзянсу, Китай

Мей Джао

1 Катедра по фармакология, Училище за основни медицински науки, Център за научни изследвания в здравеопазването на университета Xi’an Jiaotong, Xi’an, Shaanxi, Китай

3 Отдел по фармация, 302 Военна болница на Китай, Пекин, Китай

Мън Уанг

1 Катедра по фармакология, Училище за основни медицински науки, Център за научни изследвания в здравеопазването на университета Xi’an Jiaotong, Xi’an, Shaanxi, Китай

4 Фармацевтичен отдел, Болница за майчинство Шиджиажуанг, Шиджиажуанг, Хъбей, Китай

Уенхуей Ян

1 Катедра по фармакология, Училище за основни медицински науки, Център за научни изследвания в здравеопазването на университета Xi’an Jiaotong, Xi’an, Shaanxi, Китай

Юан Лю

1 Катедра по фармакология, Училище за основни медицински науки, Център за научни изследвания в здравеопазването на университета Xi’an Jiaotong, Xi’an, Shaanxi, Китай

Изключване на Рен

5 ключови лаборатории за околна среда и гени, свързани с болести (Xi’an Jiaotong University), Министерство на образованието, Xi’an, Shaanxi, Китай

6 Катедра по патология, Училище за основни медицински науки, Център за здравни науки на университета Xi’an Jiaotong, Xi’an, Shaanxi, Китай

Jun Lu

7 Център за клинични изследвания, Първа свързана болница, Здравен научен център на университета Xi’an Jiaotong, Xi’an, Shaanxi, Китай

Бинг Уанг

5 ключови лаборатории за околна среда и гени, свързани с болести (Xi’an Jiaotong University), Министерство на образованието, Xi’an, Shaanxi, Китай

6 Катедра по патология, Училище за основни медицински науки, Център за здравни науки на университета Xi’an Jiaotong, Xi’an, Shaanxi, Китай

Лина Чен

1 Катедра по фармакология, Училище за основни медицински науки, Здравен научен център на университета Xi’an Jiaotong, Xi’an, Shaanxi, Китай

5 ключови лаборатории за околна среда и гени, свързани с болести (Xi’an Jiaotong University), Министерство на образованието, Xi’an, Shaanxi, Китай

Концептуализация: LC.

Куриране на данни: WJ MZ LC.

Официален анализ: WJ MZ LC.

Придобиване на финансиране: LC JL.

Разследване: WJ MW WY YL SR.

Методология: WJ MW WY SR.

Администрация на проекта: LC.

Ресурси: WJ BW LC.

Надзор: LC.

Визуализация: WJ MZ LC.

Писане - оригинален проект: WJ MZ LC.

Писане - преглед и редактиране: JL BW LC.

Свързани данни

Всички релевантни данни са в хартията и нейните поддържащи информационни файлове.

Резюме

Въведение

Затлъстяването/наднорменото тегло е рисков фактор за сърдечно-съдови заболявания и захарен диабет тип 2 (T2DM), наред с други заболявания [1,2]. През 2014 г. Световната здравна организация (СЗО) съобщи, че приблизително 13% от възрастните са със затлъстяване, а 39% от възрастните са с наднормено тегло [3]. Освен това сегашните лекарства против затлъстяване често имат сериозни неблагоприятни ефекти. Например, римонабант увеличава честотата на психиатрични странични ефекти, а сибутраминът повишава кръвното налягане и средната честота на пулса [4,5]. Орлистат, единственото налично хапче за отслабване, има стомашно-чревни странични ефекти [6,7]. Следователно са необходими лекарства против затлъстяване с малко странични ефекти.

Повечето пациенти с T2DM са със затлъстяване/с наднормено тегло. По този начин затлъстяването и T2DM може да имат взаимно лечение. Канаглифлозин, първият инхибитор на натриев глюкозен ко-транспортер (SGLT) 2, е одобрен от FDA на САЩ за лечение на T2DM. Интересното е, че скорошно проучване разкрива загуба на тегло след приложение на канаглифлозин в ранното лечение на диабета [8]. Диацилгицерол ацилтрансфераза-2 (DGAT2), рецептор за пролиферация на пероксизома алфа-1 (PPARα1), PPARγ1 и PPARγ2 регулират съдържанието на липиди [9-11]. Следователно, тези молекули могат да бъдат свързани при затлъстяване и увреждане на черния дроб [9,12].

Въз основа на предишни проучвания предположихме, че канаглифлозин може да причини загуба на тегло при затлъстели мишки. Мишки с диетично затлъстяване (DIO) бяха използвани за оценка на промените в телесното тегло и увреждане на черния дроб с канаглифлозин и бяха изследвани и основните механизми за отслабване.

Материали и методи

Животни

Четириседмични мъжки мишки C57BL/6J (16

19g) са закупени от Центъра за експериментални животни към Центъра за здравни науки на Университета Сиан Jiaotong. Животните бяха настанени в пластмасови клетки и им беше предоставен свободен достъп до вода и храна; те се поддържат при 22 ± 2 ° C при автоматични 12 часа светлина/12 часа тъмни цикли с 50 ± 5% влажност в среда без специфични патогени (SPF). Изследването е одобрено от Етичния комитет на университета Сиан Джаотонг и е проведено в съответствие с Практическите насоки за лабораторни животни в Китай.

Експериментални протоколи

Канаглифлозин е синтезиран от Zhejiang Jiaxing Jiuyao Chemical Corporation и 0,5% карбоксиметилцелулоза натрий (CMC-Na) е използван като разтворител за увеличаване на разтворимостта на канаглифлозин.

Серумни нива на TC и TG

Серумните нива на общия холестерол (TC) и триглицеридите (TG) бяха измерени с помощта на мишки TC/TG ​​комплекти (COD-PAP метод, сериен номер: A111-2; GPO-PAP метод, сериен номер: A110-2; Jiancheng Institute of Biotechnology, Нанкин, Китай), съгласно инструкциите на производителя.

Хистологичен анализ

Чернодробните тъкани бяха фиксирани с 10% неутрално буфериран формалин и вградени в парафин. След това пробите бяха нарязани на 5 μm участъци, монтирани с оцветяване с хематоксилин-еозин и изобразени със светлинна микроскопия.

РНК изолация и PCR в реално време

Обща РНК се изолира от черен дроб на мишки с реагенти TriPure (Roche, Базел, Швейцария). След това 2 μg РНК бяха обратно транскрибирани в cDNA с помощта на Prime Script ™ RT Master Mix (Perfect Real Time) (TaKaRa Bio, Inc., Токио, Япония). Количествената PCR в реално време се извършва с помощта на SYBR® Premix Ex Taq ™ II (TaKaRa Bio, Inc., Токио, Япония) със система за откриване на PCR в реално време iQ5 (Bio-Rad Laboratories, Hercules CA). Всички праймери и сонди за PCR в реално време са закупени от TaKaRa Bio. Конкретните грундове са показани в Таблица 1. GAPDH служи като ендогенен контрол. Ефективността на PCR в реално време за целевите гени и ендогенния контрол бяха приблизително равни.

маса 1

GeneForward грунд Обратен грунд
DGAT2 5ˈ- ACT TCA CCT GGC TGG CAT TTG -3ˈ 5ˈ- GGT CAG CAG GTT GTG TGT CTT CA -3ˈ
PPARα1 5ˈ- AGT GCC TGT CTG TCG GGA TG -3ˈ 5ˈ- CTC TTG CCC AGA GAT TTG AGG TC -3ˈ
PPARγ1 5ˈ- GGA GCC TAA GTT TGA GTT TGC TGT G -3ˈ 5ˈ- TGC AGC AGG TTG TCT TGG ATG -3ˈ
PPARγ2 5ˈ- GGA GCC TAA GTT TGA GTT TGC TGT G -3ˈ 5ˈ- TGC AGC AGG TTG TCT TGG ATG-3ˈ
GAPDH 5ˈ- TGT GTC CGT CGT GGA TCT GA -3ˈ 5ˈ- TTG CTG TTG AAG TCG CAG GAG -3ˈ

Уестърн блотинг

Експресията на SGLT2 се определя чрез Western blot анализ. Накратко, 100 mg бъбречна тъкан се хомогенизира в 1 ml RIPA буфер при 12 000 х g за 15 минути при 4 ℃. Концентрацията на протеин беше тествана с помощта на комплект за анализ на протеин на бицинхонинова киселина (BCA) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). След това 50 μg протеин се разделят, използвайки 10% SDS/PAGE и се прехвърлят в PVDF мембрани (Millipore, МА, САЩ). Впоследствие мембраните бяха блокирани в 5% говежди серумен албумин и инкубирани с първични антитела срещу SGLT2 (ab37296, Abcam, Cambridge, UK) и β-актин (sc-47778, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA). След инкубация с вторично антитяло, лентите бяха анализирани с ChemiDoc XRS. β-актин се използва за нормализиране на резултатите от всяка проба.

Статистически анализ

Данните са представени като средна стойност ± стандартна грешка на средните стойности (SEM). Различията между групите бяха определени от ANOVA, последван от теста за множество сравнения на Tukey със софтуера SPSS 16.0 (SPSS Inc., Чикаго, IL, САЩ). Анализ на нормално разпределение преди ANOVA анализ е направен със SPSS 16.0 за прозорци (SPSS Inc, Чикаго). Фигура 1А), групите орлистат и канаглифлозин (L) показват малко промени, а моделната група показва увеличение на телесното тегло. Забележително е, че групата на канаглифлозин (Н) има по-ниско телесно тегло от това на групата на орлистат. По същия начин групите, лекувани с орлистат и канаглифлозин, показват загуба на телесно тегло, за разлика от моделната група (Фигура 1В). Тези резултати показват, че канаглифлозин е ефикасен за насърчаване на загуба на тегло.

върху

(A) Телесно тегло (BW). (Б) Промяна на телесното тегло. Данните се изразяват като средната стойност ± SEM (n = 8). ** P Фиг. 2). Тези данни предполагат, че канаглифлозин е инхибитор на SGLT2 в бъбреците на DIO мишки.