Множествена склероза и невроимунология

Редактиран от
Йенс Гегинат

Милански университет, Италия

Прегледан от
Мария Сесилия Жирон

Университет в Падуа, Италия

Маркус Клейневиетфелд

VIB-UGent Център за изследване на възпалението (IRC), Белгия

Принадлежностите на редактора и рецензенти са най-новите, предоставени в техните профили за проучване на Loop и може да не отразяват тяхното положение по време на прегледа.

диетичната

  • Изтеглете статия
    • Изтеглете PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Допълнителни
      Материал
  • Цитат за износ
    • EndNote
    • Референтен мениджър
    • Прост ТЕКСТ файл
    • BibTex
СПОДЕЛИ НА

Оригинални изследвания СТАТИЯ

  • 1 Лаборатория по молекулярна медицина и биотехнологии, Фондация Дон Ньоки, IRCCS, Милано, Италия
  • 2 Катедра по неврология, Фондация Дон Ньоки, IRCCS, Милано, Италия
  • 3 Катедра по биотехнологии, Университет във Верона, Верона, Италия
  • 4 Катедра по физиопатология и трансплантации, Университет в Милано, Милано, Италия

Въведение

Тъй като диетата играе съществена роля в оформянето на чревния микробиом (30), а приемът на високо съдържание на фибри е свързан със ползите за здравето като последица от ефекта на фибрите върху чревната микробиота (31), което вероятно води до модулация на имунния отговор, предположихме, че активността на болестта на МС може да бъде повлияна от диетичните модели. В това пилотно проучване ние проверихме тази хипотеза, като анализирахме имунните индекси, клиничните параметри и чревната микробиота в две групи пациенти с МС, които към момента на назначаване вече спазваха два различни диетични режима: „Западна диета“ (WD) и висок -зеленчукова/нискобелтъчна диета (HV/LP диета).

Материали и методи

Лица, записани в проучването

Пациенти с диагноза рецидивираща ремитираща (RR) МС, които са последвани от Отделението за рехабилитация на множествена склероза на Фондация „Дон Карло Ньоки“ в Милано, Италия, са били включени в това пилотно проучване на доброволна основа между май и октомври 2016 г. По-специално, това звено предлага диетични съвети на пациентите, които се предоставят от служители на професионални диетолози. Критериите за включване бяха възраст> 18 години и стабилност на заболяването за> 6 месеца преди записването. Основните критерии за изключване бяха: (1) използване на лечение, модифициращо заболяването (DMD) за> 6 месеца преди записването; (2) използване на имуносупресори или терифлуномид в клиничната история; (3) наличие на значителни съпътстващи заболявания като артериална хипертония, мозъчно-съдови нарушения, сърдечни или белодробни заболявания, диабет, ендокринни, стомашно-чревни или психиатрични заболявания. Пол, продължителност на заболяването и ниво на инвалидност, както се оценява от разширената скала на състоянието на инвалидност на Курцке (EDSS), честота на рецидиви и други неврологични индекси не са използвани като критерии за включване/изключване, но са регистрирани по време на първоначалния неврологичен преглед.

Протоколът за проучване е одобрен от етичната комисия на Фондация „Дон Карло Ньоки“ и всички записани пациенти са подписали информирано съгласие.

Вземане на кръвни проби и отделяне на клетки

При записване цяла кръв (10 ml) се събира във вакуунерни епруветки, съдържащи етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA) (Becton Dickinson & Co., Rutherford, NJ, USA). Мононуклеарните клетки от периферна кръв (PBMC) се разделят върху среда за разделяне на лимфолити (Cedarlane, Hornby, Ontario, CA, USA) и се промиват два пъти в PBS при 1500 RPM за 10 минути; жизнеспособни левкоцити бяха определени с помощта на ръчен автоматичен брояч на клетки Scepter 2.0 (Millipore, Billerica, MA, USA).

Вътреклетъчно оцветяване на цитокин или транскрипционен фактор в PBMC

Анализ на поточна цитометрия

Мононуклеарните клетки от периферна кръв бяха анализирани с помощта на потоков цитометър Beckman-Coulter GALLIOS, оборудван с 22 mW син твърд диоден лазер, работещ при 488 nm, и с 25 mW червен твърдотелен диоден лазер, работещ при 638 nm, и свързан със софтуер за анализ на Kaluza. Двеста хиляди клетки бяха придобити и затворени върху свойствата на FSC и SSC на лимфоцитите и моноцитите. За компенсация на цвета бяха използвани изотип контрол или единични препарати, оцветени с флуорохром.

Анализи на микробиоми

При записване участниците бяха помолени да вземат първото си сутрешно столче у дома, използвайки подходящ контейнер за събиране на изпражнения (Biosigma, VE, ИТАЛИЯ). В рамките на 1 час пробите бяха изпратени на пакети с лед до лабораторията на Фондация „Дон Карло Ньоки“ в Милано, където веднага бяха съхранявани при -80 ° C. И накрая, събраните проби от изпражнения бяха изпратени на сух лед чрез доставка на FedEx до преработвателното предприятие (Second Genome Inc., Сан Франциско, Калифорния, САЩ).

Що се отнася до алфа-разнообразието (в рамките на разнообразието на извадката), наблюдаваното разнообразие (брой уникални OTU) и индексът на Шанън (който използва богатството на извадка заедно с относителното изобилие на настоящите OTU за изчисляване на индекса на разнообразие) са използваните показатели.

Беше определено и различие между пробите (бета разнообразие). Всички профили се сравняват по двойки, за да се определи резултат за различие и да се съхрани в матрица за различия от разстояние. Функциите за разстояние осигуряват ниски оценки на различия при сравняване на подобни проби. Претеглените по изобилие извадки по двойки са изчислени, като се използва разликата между Bray-Curtis (съотношението на сумираните абсолютни разлики в броя към сумата на изобилието в двете проби) (33). Стойностите на двоичното различие са изчислени с индекса на Джакард (метрика, сравняваща броя на несъответствията, т.е. OTU, налични в едната, но отсъстващи в другата, в две проби спрямо броя на OTU, присъстващи в поне една от пробите) (34 ).

Цялото тестване на значимостта на микробиома е извършено с пермутационен анализ на вариацията (PERMANOVA), използван за намиране на значителни разлики между дискретни категорични или непрекъснати променливи. За да се идентифицират диференциално изобилни таксони, е използван тест на Wilcoxon Rank Sum. стр стойностите бяха коригирани по процедурата на Бенджамини-Хохберг, за да се контролира степента на фалшиво откриване от множество тестове. За допълнителна информация относно лабораторни методи и биоинформатични анализи, моля вижте Информационен лист S1 в Допълнителен материал.

Статистически анализ

Количествените данни обикновено не се разпределят (тест на Шапиро-Уилк) и по този начин се обобщават като среден и интерквартилен диапазон (IQR; 25 ° и 75 ° процентил). Сравненията между две групи от МС бяха направени с помощта на двустранен Ман-Уитни U тест, извършен за независими проби. Статистическите корелации между имунологичните параметри и данните за микробиотата бяха изследвани посредством коефициент на корелация на Спирман и 95% граници на доверие, извършени от Fisher’s Z. трансформация. Топ 8 на най-разпространените таксономични семейства бяха сравнени чрез теста за ранг на Kruskal – Wallis (KW). За сравнение на рецидивите на пациентите е използван тест x 2. Статистическата значимост беше определена на a стр-стойност Ключови думи: множествена склероза, диета, микробиом, цитокин, възпаление, дисбиоза, имунология

Цитиране: Saresella M, Mendozzi L, Rossi V, Mazzali F, Piancone F, LaRosa F, Marventano I, Caputo D, Felis GE и Clerici M (2017) Имунологичен и клиничен ефект от диетичната модулация на чревния микробиом при пациенти с множествена склероза: Пилотно проучване. Отпред. Имунол. 8: 1391. doi: 10.3389/fimmu.2017.01391

Получено: 22 юни 2017 г .; Приет: 09 октомври 2017 г .;
Публикувано: 25 октомври 2017 г.

Йенс Гегинат, Istituto Nazionale Genetica Molecolare (INGM), Италия

Markus Kleinewietfeld, VIB-UGent Център за изследване на възпалението, Белгия
Мария Сесилия Жирон, Università degli Studi di Padova, Италия

† Тези автори са допринесли еднакво за тази работа.