Въведение

време

Като се вземе предвид важната роля на свободните радикални реакции на окисление (FRRO) в регулирането на физиологичните процеси и развитието на патологични състояния, активно търсене на начини за фармацевтична и нефармакологична корекция на нарушения, които се развиват в условия на оксидативен стрес ( OS) продължава в съвременната биология, профилактика и клинична медицина с цел предотвратяване на образуването или намаляване на усложненията при различни заболявания (диабет, атеросклероза, бронхиална астма, онкопатология, ревматоиден артрит, невродегенеративни и други заболявания), където ОС е от съществено значение за патогенеза [10-14]. Възможността за хранителна корекция на окислителния метаболизъм в организма става от значителен интерес, което се дължи преди всичко на способността на хранителните вещества да оказват значително влияние върху здравето, работоспособността и продължителността на живота, така че сега, в допълнение към оптималния баланс на хранителни вещества и минерали, се извършва оценка на техния ефект върху ендогенната AOS [15-17]. Едно от най-обещаващите хранителни вещества за корекция на антиоксидантния капацитет на тялото е водата с модифициран изотопен състав (WMIC), например вода с ниско съдържание на деутерий [18].

Обективен: Да се ​​идентифицират количествени промени в съдържанието на деутерий, интензивността на окисляването на свободните радикали и антиоксидантното състояние на кръвната система, както и ефекта на водата с модифициран изотопен състав с ниско съдържание на деутерий върху показателите за свободна радикална окисленост на тъканите при лабораторни животни при физиологични условия и при възпалителни процеси.

Материали и методи

Обект на изследването е кръв и хомогенати на органи (черен дроб, бъбреци) на мъжки плъхове с тегло 90-100 g. Плъховете бяха разделени на следните групи: група № 1 (на която се прилагаше дестилирана минерализирана вода (158 ppm) в продължение на 30 дни, n = 40), група No 2 (на която се прилагаше дестилирана минерализирана вода (158 ppm) в продължение на 30 дни и страда от гнойно възпаление на меките тъкани, n = 40), група No 3 (на която се прилага дестилирана минерализирана вода с намалено съдържание на деутерий (40 ppm) в продължение на 30 дни и страда от гнойно възпаление на меките тъкани, n = 40).

Вода с ниско съдържание на деутерий е получена в съоръжението, разработено в Кубанския държавен университет [27, 28]. Първоначалната концентрация на деутерий в произведената вода е 40 ppm.

Двустепенен модел на оксидативен стрес е използван при моделиране на гнойни рани при плъхове. Първият етап беше остър стадий на оксидативен стрес и той беше симулиран чрез създаване на междумускулен абсцес в меките тъкани на дългите мускули на гърба на лабораторното животно с помощта на имплантирано чуждо тяло. Вторият етап отразява хроничния стадий на оксидативен стрес и той е симулиран от гнойна рана, която се е образувала по естествен път, докато се отцежда абсцесът и се отстранява чуждото тяло.

В основата на модела на оксидативен стрес лежи добре познат модел на заздравяване на рани, предложен от Л. А. Мамедов, базиран на хирургичното лечение на абсцес, и ние извършихме неговата модификация в хода на експериментални изследвания [29].

За да се създаде модел на абсцес, преди експеримента се подстригва и обръсва косата на плъх в средната и долната трета на гърба. След това, под местна анестезия с новокаин 0,5% разтвор - приложена игла 10 мл спринцовка, причинявайки увреждане на меките тъкани (в областта на дългите мускули на гърба) на дълбочина 3 см и ширина 2 см в предвидената област на абсцес формиране. В деня на експеримента е направен 3-сантиметров разрез на засегнатата област под хлоралозно-нембутална анестезия, последвано от поставяне на стерилна марлена гъба с диаметър 10 mm, импрегнирана с 1 ml течност, съдържаща патогенния щам на St. aureus в меките тъкани . Извършени са първични конци на раната.

След един ден животните развиват клиника на абсцес на раната и започва първият (остър) период на симулация на оксидативен стрес. Конците са отстранени за 5 дни след инфекцията, съответстващи на прехода към втория етап на оксидативен стрес.

Локално лечение на гнойна рана под превръзката на мехлемите се извършва по-късно до пълното излекуване чрез вторично намерение.

Определянето на концентрацията на деутерий в плазмата се извършва с помощта на ядрено-магнитен резонанс (NMR) при импулсен NMR спектрометър JEOL JNM-ECA 400 MHz. Записването на спектъра се извършва при съответната резонансна честота на ядрата на деутерия - 61,4 MHz. Параметрите на запис бяха както следва: 6.7 s (време за придобиване), 20 s (забавяне на релаксацията), 5.6 ms (x-импулс), 0.15 Hz (резолюция). Температурата на запис беше -25 ◦ C, с точност на стабилизиране от 0,2 ◦C. Измерванията бяха извършени с помощта на 5 mm ампула с фиксирана запечатана капилярна вътрешност, съдържаща смес от деутериран и недейтериран диметилсулфоксид (DMSO) съгласно дефинирана концентрация, калибрирана скала, която произвежда 2D ЯМР сигнал при 3,4 ppm (спрямо (CD3) 4Si), докато 2D NMR HDO сигналът е в диапазона от 4,7 ppm (спрямо (CD3) 4Si) (Фигура 1).

Фигура 1. Интегрално съотношение на интензитета на 2D NMR HDO сигнал спрямо 2D NMR DMSO-D1 сигнал

Обработката на получените спектри се състои в определяне на съотношението на интегралните интензитети на 2D NMR HDO сигнала на тестовата проба спрямо 2D NMR DMSO-D1 сигнала, чийто интензитет от своя страна се определя при същите условия спрямо стандартите - водни проби с точно дефинирано съдържание на деутерий (3,7 ppm, 51 ppm, 150 ppm). Измерванията на всяка проба се извършват многократно, за да се намали експерименталната грешка. Точността на определяне на съдържанието на деутерий в биологични проби е ± 2 ppm.

Измерването на спектрите на електронен парамагнитен резонанс (EPR) се извършва при стайна температура при спектрометъра JES Fa 300 (JEOL, Япония) в X-лентата. Условията бяха следните: мощността на микровълните беше 1 mW, честотата на микровълните беше 9144 MHz, а амплитудната модулация с висока честота беше 0.1 mT. Пробите от тъкани предварително са лиофилизирани (при устройство за изсушаване LS-1000), измерени в кварцова ампула (5 mm); масата на пробата в резонаторната зона е 0,03 g. Концентрацията на парамагнитни центрове (PMC) в пробите се определя чрез сравнение със сигнала на стандартна проба (TEMPOL). Интегрираната интензивност на EPR сигнала в пробите беше определена чрез метод на двойно числово правоъгълно интегриране [30].

EPR спектрите на чернодробни проби на лабораторни мишки съдържат анизотропен синглетен сигнал, чиито спин-хамилтонови параметри съответстват на тези на стабилните радикали [31-33]. EPR спектрите на бъбречните проби са сходни.

Като се има предвид, че методът EPR може да открива предимно стабилни радикали [34], методът на индуцирана от луминол H2O2 хемилуминесценция е използван за откриване на относително нестабилни химически активни радикали в плазмата с хеми лумен тестер LT-1, произведен от Научно-производствена асоциация Лумин (Ростов на Дон) в модификацията [35-37]. Резултатите, получени под формата на инхибиране на FRRO с максимална светкавична хемилуминесценция (MFCL), се изразяват в произволни единици (arb. U.) По отношение на светкавицата в контролните проби без биологичния материал.

Определянето на антиоксидантната активност (AOA) на кръвната плазма се извършва допълнително към оценката на ендогенната антиоксидантна система чрез амперометричен метод на анализатор на антиоксидантната активност „Яуза-01-ААА”, произведен от Научно-производствена асоциация „Химавтоматика” ОАО (Москва, Русия ) по метода [38]. Методът се основава на измерване на електрически ток, който се получава по време на окисляването на биологична проба на повърхността на работещия електрод при специфичния потенциал и сравняване на получения сигнал със стандартен сигнал, измерен при същите условия. Резултатите са изразени в наноампер в секунда (nA * s).

Статистическият анализ на получените данни се извършва по методите на вариационната статистика, като се използва t-тест на Student. Разликата се счита за значителна при p +

* - P + - P rd група животни също е значително по-висока, отколкото в група 1 - с 37,1% (P