Визуално резюме

Резюме

Заден план Прееклампсията е разстройство на бременността с придружаващи високи заболявания и икономически тежести в Съединените щати. Доказателствата в подкрепа на дълготрайните ефекти на прееклампсията върху потомството на засегнатата бременност са много, но ефектите на съвременните антихипертензивни терапии за прееклампсия върху кардио-бъбречните резултати са до голяма степен неизвестни. Целта на това проучване беше да се провери хипотезата, че силденафил цитрат, инхибитор на фосфодиестераза-5, препрограмира риска от хипертония и бъбречни заболявания при потомството на преекламптична бременност, като променя реакциите на вторичните стресови фактори.

цитратът

Методи Плъховете Dahl SS/Jr на 0,3% NaCl диета се чифтосват. На 10-ия гестационен ден бременните язовири бяха рандомизирани на диета с превозни средства или диета със силденафил (50 mg/kg на ден), която продължи до раждането. Малките са отбити на 4-седмична възраст и им е позволено да стареят на 0,3% NaCl диета до 3-месечна възраст. Към този момент малките бяха рандомизирани в три групи: изходно ниво или липса на намеса, 2% NaCl диета за 4 седмици или инфузия на субпресор на ангиотензин II (200 ng/kg на минута) в продължение на 2 седмици.

Резултати Няма изходни разлики между групите за лечение на майки на изходно ниво. При въвеждането на 2% NaCl диета, мъжкото потомство на третираните със силденафил язовири показва атенюирано покачване на BP; тази защита обаче не се наблюдава по време на инфузия на ангиотензин II.

Заключения Нашите открития показват, че интрапарталният силденафил не препрограмира риска от хипертония и бъбречни заболявания при потомството на преекламптична бременност.

  • Хипертония
  • Ангиотензин II
  • Програмиране за развитие
  • Диета
  • Хипертония
  • Бъбречни заболявания
  • Инхибитори на фосфодиестераза 5
  • Прееклампсия
  • Бременност
  • Плъхове
  • Инбред Дал
  • Силденафил цитрат
  • Натриев хлорид

Въведение

Прееклампсията е нарушение на бременността, засягащо до 8% от бременностите по целия свят (1). Появява се след 20 седмици от бременността и обикновено води до новопоявила се хипертония и протеинурия, въпреки че тромбоцитопения, бъбречна недостатъчност, нарушена чернодробна функция, белодробен оток и проблеми със зрението също са включени като диагностични симптоми (1). Въпреки че първоначално се смяташе, че симптомите отшумяват с раждането, все по-очевидно е, че прееклампсията носи значителен риск както за майката, така и за детето след периода след раждането (2– ⇓ ⇓ ⇓ 6). За бременности, усложнени от прееклампсия, раждането се случва по-рано и с повече нежелани събития от тези при неусложнена бременност или с съществуваща хипертония. Тези нежелани събития водят до висока икономическа тежест, като средните разходи за здравеопазване на майките и децата при прееклампсия възлизат на 41 790 щатски долара срещу 13 187 щатски долара за неусложнена бременност и 24 182 долара за жени с предшестваща хипертония (7).

Бременността представлява критичен прозорец за развитие и физиологично програмиране за плода. Barker и колеги показаха, че децата, родени от бременност, усложнена от прееклампсия или ниско тегло при раждане, показват по-висок BP през детството и до зряла възраст (8,9). Тази хипотеза, наречена Теория за развитието на здравето и заболяванията, предполага, че неблагоприятната вътрематочна среда (недостатъчно хранене или приток на кръв към плода) води до епигенетични промени, които променят метаболизма и механизмите на физиологичен отговор през целия живот на потомството (10,11 ). По-нататъшни проучвания и метаанализи показват, че децата, родени след преекламптична бременност, са изложени на по-голям риск от съдови заболявания като хипертония и инсулт (3,12,13). Въпреки че няколко предложени механизма за тази връзка са получили доказателствена подкрепа (14– – ⇓ 17), точната природа на тази патогенеза остава неизвестна и затова не са показани потенциални терапевтични интервенции.

Въпреки нарастващите изследвания за потенциални прееклампсични лечения, настоящият стандарт на грижи се ограничава до внимателно наблюдение, ограничено антихипертензивно лечение, инфузия на магнезиев сулфат за предотвратяване на екламптични гърчове и ранно раждане (18). Въпреки че продължаването на бременността обикновено е от полза за развитието на плода, продължаващото излагане на вътрематочна среда с неоптимално хранене носи допълнителен риск (19,20). Експерименталните терапии, които се тестват понастоящем, включват антиоксиданти (напр. Аспирин, витамини С и Е), вазодилататори (напр. Силденафил) и инхибиране или намаляване на разтворимата fms-подобна тирозин киназа 1 (sFlt-1; напр. Инфузия на VEGF, афереза, и др.), наред с други (21– ⇓ ⇓ ⇓ ⇓ ⇓ ⇓ 28). Въпреки че клиничните и/или предклиничните проучвания са показали полезните ефекти на тези агенти в краткосрочен план, дългосрочните данни за безопасност са ограничени при повечето терапии (18). Истинските рандомизирани клинични проучвания са трудни за установяване, тъй като никоя нелекувана контролна група не би получила стандарта за грижа и опасенията за безопасността на майката и плода отменят ограниченията на изпитванията по време на бременност.

Материали и методи

Животни

BP измервания

Проучвания на времеви курс.

Систоличните измервания на АН се получават, като се използва методът за регистриране на обемно налягане с маншет (CODA 8-канална система; Kent Scientific Corp., Torrington, CT). Животните се обучават само в ограничители, последвано от обучение в ограничители на нагрята платформа, преди да се получат набори от не по-малко от пет валидни измервания, всеки два последователни дни. Всички валидни измервания за всяко животно бяха осреднени, за да се получат окончателните точки от данни.

Вторични стресови изследвания.

MAP измерванията са получени с помощта на метод на телеметрия, както е описано по-горе (39). Плъховете бяха имплантирани с телеметрични устройства (Data Sciences, Inc., St. Paul, MN) чрез феморалната артерия за непрекъснато наблюдение на АН на 10-седмична възраст, приблизително 10 дни преди всеки експеримент, позволявайки 1 седмица за възстановяване и 2-3 дни за събиране на изходни данни за BP.

Диета с повишена сол (2% NaCl)

След възстановяване от телеметрична хирургия и събиране на изходни MAP данни, подмножество плъхове (n = 15; 1–4 на група) е хранено с повишена солена диета (2% NaCl, TD94217; Harlan Teklad) в продължение на 4 седмици, започвайки от приблизително 12 седмична възраст. Двадесет и четири часа урина се събира чрез метаболитна клетка преди започване на диета с 2% сол и преди евтаназия и събиране на тъкани в края на 4-седмичното проучване.

Инфузия на AngII

След възстановяване от телеметрична хирургия и събиране на изходни MAP данни, минипомпи (модел 2002; Alzet) бяха вкарани подкожно в подгрупа от плъхове (n = 33; 5-6 на група), започвайки от приблизително 12-седмична възраст. AngII (Sigma Aldrich, Сейнт Луис, Мисури) се разрежда в стерилен физиологичен разтвор и се доставя в субпресорна доза от 200 ng/kg на минута в продължение на 2 седмици преди евтаназия и събиране на тъкани. Двадесет и четири часа урина се събира чрез метаболитна клетка преди поставяне на минипомпа и отново преди евтаназия.

Измервания на урината

Плъховете бяха поставени в метаболитни клетки със свободен достъп до храна и вода за 24-часово събиране на урина. Екскрецията на протеини в урината се определя чрез Bradford Assay (Bio-Rad Laboratories). Скоростите на екскреция на урината на KIM-1 (разреждане 1: 8; R&D системи, Минеаполис, MN) и нефрин (без разреждане; ABclonal, Woburn, MA) са количествено определени чрез налични в търговската мрежа ELISA. Разрежданията на проби от урина се коригират, както е необходимо, за да се постигне линейно прилягане за всеки анализ.

Колекция от тъкани

Плъховете се упояват с изофлуран (5% индукция, 2% –3% поддръжка; Piramal Healthcare). Крайна кръвна проба беше получена от коремната аорта в хепаринизирани спринцовки и впоследствие органите бяха перфузирани без кръв с физиологичен разтвор. Бъбреците бяха отстранени, дисектирани в кортикални и медуларни области и замразени бързо в течен азот за по-късен анализ.

Измервания на изчистване на креатинина

Терминални кръвни проби се центрофугират и се изолира плазма. Концентрациите на креатинин бяха измерени както в проби от урина, така и в плазма (Vet Axcel Chemistry Analyzer; Alfa Wasserman, West Caldwell, NJ) и след това използвани за изчисляване на креатининовия клирънс за всяко животно.

Насочено РНК-секвениране

Статистически анализи

Всички данни са представени като средно ± SEM. Статистическите анализи бяха извършени чрез двупосочен ANOVA (с повтарящи се измервания за телеметрични данни), последван от Tukey post hoc анализ, използвайки GraphPad Prism 8.0 (GraphPad, Сан Диего, Калифорния). t тестът е използван за таблици 1–4. Средствата се считат за значително различни, ако P Вижте тази таблица:

  • Преглед на линия
  • Преглед на изскачащия прозорец

Нормализиран брой на всички гени, изследвани чрез целенасочено секвениране на РНК при 3-месечни мъжки плъхове