Джесика Л. Верпет

катедра по животновъдни науки, Rutgers, Държавният университет в Ню Джърси, Ню Брънзуик, Ню Джърси, САЩ

rosea

b Дипломна програма по ендокринология и биологични науки за животните, Rutgers, Държавният университет в Ню Джърси, Ню Брънзуик, Ню Джърси, САЩ

Ейми Л. Уолтърс

катедра по животновъдни науки, Rutgers, Държавният университет в Ню Джърси, Ню Брънзуик, Ню Джърси, САЩ

Николас Т. Бело

катедра по животновъдни науки, Rutgers, Държавният университет в Ню Джърси, Ню Брънзуик, Ню Джърси, САЩ

b Дипломна програма по ендокринология и биологични науки за животните, Rutgers, Държавният университет в Ню Джърси, Ню Брънзуик, Ню Джърси, САЩ

Резюме

1. Въведение

2. Методи и материали

2.1. Ботанически екстракти

Както C aurantium (6% синефрин; партида № 20111208), така и R rosea (3% розавини, 1% салидрозид; партида № 12807050) са придобити от Unichem Inc (Newark, NJ, USA). Unichem е сертифицирана от Националната санитарна фондация съоръжение за добра производствена практика и предоставя сертификат за анализ с всяка доставена суровина. В допълнение, Ботаническото ядро ​​в университета Рутгерс провери високоефективния анализ на течна хроматография (HPLC) на C aurantium и R rosea. Също така беше установено, че тези материали не съдържат пестициди или микробни замърсители и са приемливи по отношение на насоките за ботаническа цялост, изложени от Националните здравни институти.

2.2. Животни

Възрастни мъжки плъхове Sprague-Dawley (с тегло приблизително 300 g), придобити от Harlan Laboratories (Frederick, MD, USA), бяха настанени индивидуално и поставени по 12/12-часов график светлина/тъмнина (светлините угасват в 1700 часа). Плъховете са хранени със стандартен чау [Purina Rat Diet 5012 (Сейнт Луис, Мисури, САЩ) 13% мазнини, 27% протеин, 3,1 kcal/g], освен ако не е посочено друго, и вода е била достъпна през цялото време на експериментите. Всички процедури бяха одобрени от Институционалния комитет по грижа и употреба на животните към университета Рутгерс и бяха в съответствие с насоките на Националните здравни институти.

2.3. Дозов отговор на C aurantium и R rosea самостоятелно или в комбинация при остър прием на храна при 24-часови плъхове, лишени от храна

2.4. Ефекти на комбинацията от дози върху висцералните заболявания чрез измерване на приема на каолин

За да се определи дали потискането на приема на храна от C aurantium (5.6 mg/kg) + R rosea (20 mg/kg) в комбинация е причинено от висцерално заболяване, поведението на пика е измерено след приложение. Една седмица след завършване на дозовия цикъл, описан в раздел 2.3, животните бяха разпределени на случаен принцип в група (n = 10) и поставени върху чаша ad libitum с непрекъснат достъп до нехранителни сухи пелети от каолин (каолин с 1% акациева смола; K5001; Research Diets, New Brunswick, NJ, USA) за 7 дни. След 24-часова лишаване от храна, животните получиха орално даване или на 2% етанол (носител), или на С ауранций (5,6 mg/kg) + R rosea (20 mg/kg) по случаен начин. Дозирането се извършва 1 час преди хранене. Измерванията на приема на храна и каолин са записани на 0,5, 1, 2, 4 и 24 часа след хранене. Приемът на храна и разливът са измерени с точност до 0,1 g.

2.5. Ефекти от условията на ботаническо лечение върху приема на храна и телесно тегло по време на 10-дневната схема на субхронично лечение в модел на диета, предизвикано от затлъстяване

За да се определят ефектите на растителните препарати самостоятелно или в комбинация върху невронни, метаболитни и ендокринни маркери на индуцирано затлъстяване, общо 91 възрастни мъжки плъхове Sprague-Dawley са били изложени на диета с високо съдържание на мазнини (Research Diets, D12492, 60 % мазнини, 20% протеин) в продължение на 13 седмици и през цялото време остава на диета с високо съдържание на мазнини. Животните са били дадени в продължение на 10 последователни дни или с C ауранций (5.6 mg/kg; Ca; n = 20), R rosea (20 mg/kg; Rr; n = 17), C aurantium (5.6 mg/kg) + R rosea (20 mg/kg; CR; n = 20) или носител (2% етанол; V; n = 17). Група животни, хранени по двойки (PF; n = 17), които не са били обезценени, получават еквивалентния среден калориен прием на групата CR. Теглото на тялото и приема на храна се записват всеки ден след първия ден на дозиране. Приемът на храна и разливът са измерени с точност до 0,1 g.

2.6. Тегло на мастните накладки и хормонални измервания след 10-дневна схема на субхронично лечение

2.7. Плазмени и регионални нива на моноамин в мозъка след ботанически лечения и условия на хранене

Проби от кръвна плазма и мозъчни секции бяха анализирани чрез обратнофазова HPLC (Dionex Ultimate 3000, Thermofisher, Сънивейл, Калифорния, САЩ) с електрохимично откриване (Coulochem III, Thermofisher, Сънивейл, Калифорния, САЩ). Подвижна фаза на фосфатен буфер на основата на ацетонитрил (MD-TM; Dionex, Thermofisher, Sunnnyvale, CA, USA) беше използвана за всички експерименти. Вътрешният стандарт, 3,4-дихидроксибензиламин, беше добавен към всички проби преди екстракция. Кръвната плазма се приготвя за HPLC анализ, като се използва плазмен комплект за екстракция на катехоламин (Thermofisher, Сънивейл, Калифорния, САЩ) за измерване на нивата на NE, допамин (DA) и Е. Отделни мозъчни секции за всеки регион се хомогенизират в 550 μL 0,1 N разтвор на хлорна киселина. След това хомогенатите се центрофугират при 12 000 rpm за 5 минути. Супернатантата се филтрира с помощта на 0.2-μm найлонов филтър за спринцовка за еднократна употреба преди да бъде анализиран. Тази процедура на екстракция позволява измерване на NE, DA, 5-HT и катехоламиновия метаболит хомованилова киселина (HVA) чрез HPLC. Анализът на пик беше извършен със софтуера Chromeleon 7.1 (Dionex). Стойностите за всеки моноамин и HVA са изразени като нанограми, разделени на теглото на мократа тъкан (в милиграми) на всяка проба.

2.8. Хемодинамични измервания преди и след лечение в ботаническите и контролните групи

В продължение на 3 последователни дни преди започване на съответните им 10-дневни лечения животните бяха привикнати към системата за неинвазивно кръвно налягане (BP) CODA (Kent Scientific, Torrington, CT, USA). Тази компютъризирана система измерва систоличния и диастоличния АН, средния АН и сърдечната честота чрез запис на налягането в обема на опашката. Животните бяха аклиматизирани към системата CODA 5 минути преди опитите за запис. Измерванията за всеки път бяха определени чрез осредняване на стойностите за 3 успешни опитни записа. На животните бяха дадени 2 аклимационни дни, последвани от изходен ден на теста на третия ден. След приключване на 10-дневното лечение бяха тествани останалите животни във всяка група (Ca: n = 10, Rr: n = 8, CR: n = 10, V: n = 8 и PF: n = 8) в системата CODA за определяне на техните стойности за последваща обработка. За това всички групи бяха тествани 24 часа след крайната доза от съответното им лечение.

2.9. статистически анализи

Извършен е анализ на мощността, за да се определят адекватни размери на пробите за всяка група въз основа на очакваната дисперсия за всяка крайна точка. Данните са представени като средните стойности ± SE. Острите ефекти на растителните продукти върху приема на храна и приема на каолин са измерени чрез двупосочен дисперсионен анализ на ANOVA. Острите приема на храна за всяко ботаническо лечение (C aurantium, R rosea и C aurantium + R rosea) бяха анализирани отделно, за да се отчетат разликите в продължителността на лечението. Данните за приема на каолин и остър прием на чау са анализирани отделно със зависим t тест. За 10-дневните лечения се анализират телесно тегло, кумулативен прием на храна и хемодинамични измервания, като се използва двупосочна ANOVA с повтарящи се мерки. Анализите на телесни мазнини и хормони се анализират с еднопосочен ANOVA, а количественото определяне на концентрациите на катехоламин се анализира с еднопосочен ANOVA за всеки регион. Извършени са post hoc сравнения, когато е подходящо, с тестове с най-малка значима разлика (LSD). Всички статистически анализи и анализи на мощност са извършени с помощта на софтуера Statistica 7.1 (StatSoft Inc, Tulsa, ОК, САЩ), а значимостта е определена на α = .05.