Джи-Хонг Ян

1 Централна изследователска лаборатория, Токио иновационен център, Nippon Suisan Kaisha, Ltd., 32-3 Nanakuni 1 Chome Hachioji, Токио 192-0991, Япония

масло

Хироко Мияхара

1 Централна изследователска лаборатория, Токио иновационен център, Nippon Suisan Kaisha, Ltd., 32-3 Nanakuni 1 Chome Hachioji, Токио 192-0991, Япония

Джиро Такео

1 Централна изследователска лаборатория, Токио иновационен център, Nippon Suisan Kaisha, Ltd., 32-3 Nanakuni 1 Chome Hachioji, Токио 192-0991, Япония

Акимаса Хатанака

1 Централна изследователска лаборатория, Токио иновационен център, Nippon Suisan Kaisha, Ltd., 32-3 Nanakuni 1 Chome Hachioji, Токио 192-0991, Япония

Масаши Катаяма

1 Централна изследователска лаборатория, Токио иновационен център, Nippon Suisan Kaisha, Ltd., 32-3 Nanakuni 1 Chome Hachioji, Токио 192-0991, Япония

Резюме

Заден план

Хиперлипидемията, свързана със затлъстяването, е тясно свързана с развитието на атеросклероза. Както добавките n-3 полиненаситени мастни киселини (PUFA), така и дълговерижните мононенаситени мастни киселини (MUFA; т.е. изомери C20: 1 и C22: 1) модулират рисковите фактори за метаболитен синдром чрез множество механизми, включително възстановяване на нарушен липиден метаболизъм. Поради това изследвахме ефектите на маслото от минтай, което съдържа значително количество n-3 PUFAs, както и дълговерижните MUFA, върху плазмената хиперлипидемия и чернодробната стеатоза при индуцирани от диета затлъстели мишки.

Методи

Мъжки мишки C57BL/6J (24-26 g) бяха разделени на две групи (n = 10/група) и хранени с диета с високо съдържание на мазнини, съдържаща 32% свинска мас (контролна група) или 17% свинска мас плюс 15% масло от минтай (експериментално) група) в продължение на 6 седмици. И за двете групи мазнините съставляват 60% от общия калориен прием.

Резултати

Въпреки че телесните и чернодробните маси за двете групи не се различават значително, концентрациите на чернодробни липиди (триглицериди и общи холестероли) са по-ниски (Р Ключови думи: Масло от минтай, n-3 PUFA, MUFA, хиперлипидемия, чернодробна стеатоза, адипокини

Заден план

Минтак от Аляска (Theragra chalcogramma) е вид в северната част на Тихия океан от семейство трески, Gadidae. Маслото от минтай съдържа значителни количества n-3 PUFAs и дълговерижни MUFAs [6]. Риболовната индустрия на минтай в Аляска е най-голямата в САЩ и една от най-големите в света. През последните години се отчита риболовът на минтай

30% от всички дестинации на морски дарове в САЩ по маса [7]. Въпреки че маслото от минтай се използва както в хранителната, така и в хранителната промишленост [8], малко се знае за връзката между диетичното масло от минтай и хиперлипидемията. Като се имат предвид ползите за здравето на n-3 PUFAs и MUFAs с дълги вериги, ние изследвахме ефекта на диетичното масло от минтай върху хиперлипидемия при мишки с дислипидемия, индуцирана от диета.

Методи

Измерване на състава на мастните киселини на диетичните масла

Свинската мас от Cameria е закупена от Romi Smilfood B. V. (Heerenveen, Холандия). Маслото от минтай се получава от Nippon Suisan Kaisha, Ltd. (Токио, Япония) и се рафинира със силикагел и активирани глини и след това се дезодорира с дестилация на пара. Всички стандартни и извлечени липиди се съхраняват при -20 ° С, докато се използват. Съставът на мастните киселини на диетичните мазнини (Таблица (Таблица 1) 1) се определя след метилиране на проби с 14% (w/v) борен трифлуорид/метанол (Sigma Chemical Co., Сейнт Луис, САЩ.) При 80 ° C за 30 минути. Получените метилови естери на мастни киселини се определят количествено чрез газова хроматография, използвайки мрежова газова хроматографна система Agilent 6890N (Agilent Technologies Japan, Ltd., Токио, Япония), оборудвана с разделен инжектор, FID детектор и капилярна колона от силициев диоксид (DB-WAX, 30 m × 0,25 mm ID × 0,25 μm дебелина на филма, J&W Scientific, Agilent Technologies). Метиловите естери бяха идентифицирани чрез сравняване на времената на задържане с тези на стандартите за метилов естер на мастните киселини (Nu-Chek Prep, Inc., Elysian, MN, USA). Маслото от минтай съдържа значителни нива на дълговерижни MUFAs и n-3 PUFAs (C20: 1, както и C22: 1 изомери и n-3 PUFAs комбинирани:

маса 1

Състав на мастните киселини на хранителните мазнини (%)

Мастна киселинаСвинска мас Масло от минтай
С14: 01.54.9
С16: 025.49.8
С16: 12.46.1
С18: 05.91.7
С18: 140.614.3
C18: 2 n-610.81.3
C18: 3 n-31.01.1
C20: 1 n-90.89.1
C20: 1 n-7ND3.3
C22: 1 n-11ND12.3
C22: 1 n-9ND1.6
C20: 5 n-30,0210.3
C22: 5 n-30,11.2
C22: 6 n-30,037.9

Стойностите съответстват на средната стойност на три отделни проби, обработени независимо.

ND: Не се открива.

Животни и диети

Институционалният комитет по грижи и употреба на животните към Nihon Bioresearch Inc. (Gifu, Япония) одобри това проучване. Мъжки мишки C57BL/6J (на 5 седмици) са получени от Charles River Laboratories Japan Inc. (Йокохама, Япония) и са настанени в Nihon Bioresearch при 23 ± 1 ° C при 12/12 h светло-тъмен цикъл. Животните получиха безплатен достъп до вода и стандартна чаша за мишки CRF-1 (Oriental Yeast Co. Ltd., Токио, Япония) за 1-седмичен период на аклиматизация.

След аклиматизацията мишките бяха разпределени на случаен принцип в една от двете групи за 6-седмичния експеримент за хранене. Контролната група (n = 10) е хранена с високомаслена диета, съдържаща 32% свинска мас (D12492 Диета за гризачи с 60 kcal% мазнини; Research Diets, Inc., NJ, USA), а експерименталната група е хранена с диета, допълнена с минтай масло (17% свинска мас плюс 15% масло от минтай). За да се контролира общият прием на мазнини, общото съдържание на мазнини и в двете диети отговаря на 60% от калорийния прием. Съставите на диетите са изброени в таблица Таблица2. 2. По време на проучването се проследява телесната маса и приема на храна. В края на интервенционния период мишките се анестезират с 4% натриев пентобарбитал (Dainippon Sumitomo Pharma, Осака, Япония) и кръв се събира чрез пункция на коремните вени. Плазмата се получава чрез центрофугиране при 1000 g в продължение на 15 минути и се съхранява при -80 ° С до анализи. Жизнено важните органи се отстраняват и претеглят след кратко измиване със студен фосфатен буфериран физиологичен разтвор, рН 7,4. Мезентериалната бяла мастна тъкан (WAT) и черният дроб се поддържат при -80 ° C за по-нататъшна екстракция на липиди и анализ на количествена полимеразна верижна реакция (QPCR).

Таблица 2

СъставкаСвинска диета (g/100 g диета)PO диета (g/100 g диета)
Казеин25.825.8
л-Цистеин0,40,4
Малтодекстрин 1016.216.2
Захароза8.98.9
Целулоза6.56.5
Минерална смес1.31.3
Витаминна смес1.31.3
Холин битартрат0,30,3
Соево масло3.23.2
Свинска мас3217
Масло от минтай--15

PO диета: диета, допълнена с масло от минтай.

Екстракция на липиди и анализ на мастни киселини

Съставът на мастните киселини в плазмата, черния дроб и WAT при мишките C57BL/6J се определя, както е описано по-горе [5]. Липидите се екстрахират чрез хомогенизиране на тъканните проби в разтвор на метанол/хексан (4: 1 v/v), добавен с бутилиран хидрокситолуен (BHT, 50 μg/mL) като антиоксидант. Пробите бяха метилирани с ацетил хлорид и метиловите естери на мастните киселини бяха разделени и количествено определени чрез газова хроматография. Идентифицирането на метиловите естери се извършва чрез сравняване на времената на задържане на стандартните мастни киселини.

Определяне на плазмените нива на липидите

Взети са кръвни проби от ретро-орбиталния венозен плексус на всяка мишка в края на седмици 0, 2, 4 и 6. Плазмени концентрации на триглицериди (TG), общ холестерол (TC) и липопротеин с висока плътност (HDL) холестеролът се измерва, като се използват триглицеролов Е-тест, Е-тест за холестерол и Е-тест за HDL-холестерол (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Осака, Япония), съответно. Концентрацията на LDL холестерол беше изчислена като [LDL холестерол] = [TC] - [HDL холестерол] - [TG] × 0.2.

Определяне на плазмените нива на адипокин

Плазмените концентрации на адипонектин, резистин и лептин се определят в края на 6-седмичния период с помощта на комплекта ELISA на Mouse Adiponectin (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd., Токио, Япония), ELISA комплект на Mouse Resistin (Shibayagi Co. Ltd., Gunma, Япония), и Mouse Leptin ELISA комплект (Morinaga Institute of Biological Science, Inc., Йокохама, Япония), съответно.

Определяне на нивата на чернодробните липиди

Общо чернодробни липиди бяха извлечени от чернодробни проби, както е описано [9]. Екстрахираните липиди се сушат под вакуум (Concentrator Plus 5305, Eppendorf Inc., NY, САЩ) и след това се разтварят в 2-пропанол, съдържащ 10% (тегл./Тегл.) Triton X-100. Концентрациите на триглицеридите и общия холестерол бяха определени с помощта на гореспоменатите търговски ензимни комплекти (Wako).

Определяне на експресията на иРНК чрез QPCR

Статистически анализ

Резултатите се изразяват като средна стойност ± стандартна грешка на средната стойност. Статистическите разлики между две групи бяха анализирани чрез t-тест на Student и бяха счетени за значими в P Таблица 3 3 изброява телесни и жизненоважни органи за диети, индуцирани затлъстели мишки C57BL/6J в контролната (свинска мас) и експерименталната (масло от минтай) След 6-седмичния период на хранене няма значителни разлики в телесната, чернодробната, бялата, както и кафявата мастна тъкан и скелетните мускулни маси между двете групи.

Таблица 3

Прием на храна, телесна маса и жизненоважни органи

Свинска диетаPO диета
Прием на храна (g/ден)2,5 ± 0,032,3 ± 0,04
Първоначална телесна маса (g)25,5 ± 0,425,5 ± 0,5
Крайна телесна маса (g)32,7 ± 1,631,6 ± 2,4
Органни маси (mg/g телесна маса)
Черен дроб33,1 ± 0,733,6 ± 0,7
Епидидимално WAT50,9 ± 3,045,2 ± 3,9
Мезентериална WAT15,4 ± 0,913,7 ± 1,1
Кафява мастна тъкан3,3 ± 0,53,6 ± 0,3
Скелетна мускулатура5,9 ± 0,45,9 ± 0,3

Всяка стойност представлява средната стойност ± SE (n = 10). PO диета: диета с добавка на Pollock с масло; WAT: бяла мастна тъкан.