Получено на 1 декември 2015 г .; приета на 17 януари 2016 г .; публикувано на 20 януари 2016 г.

инхибира

Наблюдава се, че затлъстяването е в тясна връзка със системно възпаление с ниска степен, което се счита, че има тенденция към прогресиране на инсулиновата резистентност, хипергликемия и свързани метаболитни нарушения [1] [2]. Освен това, от доказателства през последните десетилетия, мастната тъкан е поставена в ключова позиция за регулиране на липидния и глюкозния метаболизъм. Показано е, че адипоцитите секретират множество биоактивни молекули, главно протеини като противовъзпалителни и противовъзпалителни адипокини, които играят решаваща роля в възпалителните реакции [3] [4]. Предполага се, че при затлъстяване дисфункцията на адипоцитите и макрофагите заедно с влошената секреция на адипокини води до хроничен възпалителен отговор [3]. Повишените нива на провъзпалителни адипокини като интерлевкин-6 (IL-6) и фактор на туморна некроза-алфа (TNF-α) са свързани главно с увеличаване на затлъстяването и неправилно функциониране на адипоцитите при затлъстяване [5]. Предполага се, че свързаното със затлъстяването възпаление и увреждането на клетките са тясно свързани чрез липолиза на адипоцитите. В TNF-алфа сигналния път AMPK е важна цел и TNF-α има потискащ ефект върху AMPK сигналния път, който регулира липолизата и окисляването на мазнините в адипоцитите [6] .

2.1. Приготвяне на етанолов екстракт от цитрусова кора (CP)

Пресни плодове от C. unshiu бяха закупени през ноември 2012 г. от The Village Green (Чеджу, Южна Корея) и белени. Кората на C. unshiu се изсушава при 56 ° С за 8 часа и след това към 1,823 kg проба се добавят 7 L 70% етанол (Daehan Ethanol Life Co., Сеул, Южна Корея). След 3 h екстракция при 75 ° C, пробата се охлажда, филтрира и изпарява (EYELA N1100, Tokyo Rikakikai Co., Tokyo, Japan). Крайният концентриран концентрат е 445,7 g екстракт с 16,13% съдържание на влага. След това беше извършен анализ на високоефективна течна хроматография (HPLC, HP 1100, Agilent Technologies, Калифорния, САЩ) върху пробата за откриване на нейния флавоноиден състав. CP пробата се разтваря в метанол и се инжектира в 5 μm колона Supercosil LC-18. (250 × 4,6 мм Sigma-Aldrich Corp., Сейнт Луис, САЩ). Като стандарти бяха използвани хесперидин (Sigma-Aldrich Corp., Сейнт Луис, САЩ), разтворен в 0,1 М NaOH и нарирутин (Exstrasynthese, Лион, Франция). Ацетонитрил и 0,5% оцетна киселина бяха използвани като разтворители на подвижна фаза в HPLC система за изпомпване на два разтворителя. Пробите се инжектират в момент 0 и градиентният профил започва от 0% за смес от разтворители А и се променя на 85% А за 35 минути. Скоростта на потока се регулира на 1.0 mL/min и температурата на колоната се поддържа на 30 ° C по време на всички цикли.

2.2. Експеримент с животни

2.3. Плазмена биохимия

Общият холестерол (TC), триглицеридите (TG) и липопротеиновият холестерол с висока плътност (HDL-c) в кръвната плазма се анализират чрез ензимен колориметричен метод, използвайки комплекти за анализ (Human 10028, 10724, 10084, Wiesbaden, Germany). По същия начин концентрациите на TG и TC в чернодробните тъкани също са анализирани със същия метод след екстракция на липид в тъканите по метода на Folch [14]. Липопротеиновият холестерол с ниска плътност (LDL-c) се изчислява по формулата на Friedewald, а атерогенният индекс (AI) се изчислява по формулата на Розенфелд [15]. Аспартат аминотрансферазата (AST) и аланин аминотрансферазата (ALT) бяха измерени с пробен комплект (Bio Vision K753-100, K752-100, CA, USA) за откриване на тъканна токсичност и общата стойност, изчислена чрез измерване на оптичната абсорбция с помощта на четец на микроплаки ( Термо, Масачузетс, САЩ).

2.4. Морфология на адипоцитите

Изследвани са морфологични промени в епидидималната мастна тъкан. Накратко, събраната епидидимна мастна тъкан се фиксира в 12% разтвор на неутрален формалин. След фиксиране за 12 h, пробите се дехидратират с етанол и се измиват с ксилол за вграждане в парафин. И накрая, 0,4 μm участъци от пробите бяха подготвени за оцветяване с хематоксилин-еозин (H&E, Sigma-Aldrich Corp., Сейнт Луис, САЩ). Всички морфологични промени на оцветените проби се определят микроскопски с помощта на обърнат микроскоп (Nikon Eclipse, Токио, Япония) и се изчисляват чрез използване на софтуер за анализ на изображения (ImageJ, NIH, MD, USA).

2.5. Западно петно

Събраната мезентериална тъкан на мишки беше лизирана в ледено студен RIPA буфер за екстракция и количеството протеин

Маса 1 . Състави на експериментални диети в DIO модел, индуциран с високо съдържание на мазнини.

C: Чау диета, HF: Диета с високо съдържание на мазнини, CP: Диета с високо съдържание на мазнини + Екстракт от цитрусова кора (300 mg/kg), O: Диета с високо съдържание на мазнини + Орлистат (30 mg/kg).

събраните бяха измерени по метода на Брадфорд. Равни количества протеин се разделят чрез електрофореза на натриев додецил сулфат-полиакриламиден гел (SDS-PAGE), прехвърлят се върху нитроцелулозна мембрана (ELPIS, Daejon, Южна Корея) и се блокират в 5% (w/v) обезмаслено мляко. След това мембраната се инкубира в продължение на 2 часа при стайна температура с разредено 1: 2000 първично антитяло на моноцитен хемоаттрактант протеин-1 (MCP-1), TNF-α, FAS, фосфорилирана AMP-активирана протеин киназа (P-AMPK), AMP- активирана протеин киназа (AMPK), фосфорилирана хормон чувствителна липаза (P-HSL), хормонално чувствителна липаза (HSL) и α-тубулин. Свързани с мембрана белязани протеинови ленти се визуализират чрез разтвор на ECL Western blotting и се откриват чрез хемилуминесценция с рентгенови филми. И накрая, лентовите плътности на уестърн блот бяха определени с помощта на софтуер за анализ на изображения (ImageJ, NIH, MD, САЩ).

2.7. Статистически анализ

Данните са изразени като средна стойност ± SD. Разликите между средствата на отделните групи бяха оценени чрез еднопосочен ANOVA с многобройни тестове на Дънкан. Значимостта на разликите е изразена при p Фигура 1. HPLC хроматограма за стандарта на нарирутин (а) и хесперидин (б) и двете бяха открити в екстрактите на СР (в). Използвайки HP 1100 (Agilent Technologies, САЩ), тяхното състояние беше тази колона; LichroCART (LC-18, 5 μm, 250 × 4.6), детектор; DAD (530 nm), уд. об .; 20 μL, дебит; 1 mL/min, разтворител-I; вода (0,1% AcOH), разтворител-II; AcCN (0.5% AcOH) и условието на градиент се променя за 0 - 35 минути.

значително по-висока от тази на групата CP. Групата за лечение с орлистат е единствената група, която показва намаляване на телесното тегло.

3.3. Кръвна биохимия и чернодробна токсичност

3.4. Морфология на адипоцитите в епидидималната тъкан

От морфологичните промени, наблюдавани в епидидималната тъкан чрез H&E оцветяване и последващи изчисления

Таблица 2. Екстрактите от цитрусова кора с етанол променят телесната и мастната маса, FER и кръвните и чернодробните липидни профили.

Това проучване сравнява CP лечението с нелекувана СН група и лечение с орлистат. Нашите резултати показват, че лечението на CP е сравнима с това на лечението с орлистат, не е толкова добро, колкото ефектите на орлистат върху намаляването на натрупването на мазнини и осигуряват достатъчно достоверност, че CP е естествен източник за нов кандидат за затлъстяване. Флавоноидите са ароматни вторични растителни метаболити, които са важни поради тяхната хранителна стойност. Те показват няколко биоактивност като антиадипогенна, антивирусна, антимикробна и противовъзпалителна активност [16] - [20]. Цитрусовите плодове са важен източник на биоактивни флавоноиди, които са били насочени към много проучвания, търсещи естествени вещества, които насърчават здравето, които могат да действат върху различни заболявания като затлъстяване и затлъстяване [21] [22]. Няколко клинични проучвания демонстрират, че цитрусовите флавоноиди имат положителни ефекти срещу затлъстяването, като понижаване на LDL-c и TG и имат отрицателен ефект върху провъзпалителните цитокини чрез регулиране на активността на чернодробните ензими [23] - [25] .

Най-разпространените флавоноиди в цитрусовите плодове са хесперидин, нарирутин и неохесперидин; и те се извличат главно чрез използване на разтвори на етанол или метанол на водна основа [26]. При повечето видове количеството хесперидин в кората на цитрусовите плодове е регистрирано като по-високо от това на нарирутин [27], но предишно проучване показа, че хесперидинът има малко по-висока разтворимост в метанол и вода, отколкото нарирутин [28]. Като се има предвид, че екстракцията от кората на C. unshiu е проведена в 70% етанол, се очаква съдържанието на нарирутин да бъде по-високо от това на хесперидин.

Известно е, че съществува връзка между промените в липопротеиновия холестерол и затлъстяването. В случаите на затлъстяване често се наблюдава намаляване на нивото на HDL-c, а повишаването на нивото на HDL-c е една от целите за лечение на затлъстяване [33]. Освен това HDL участва в активирането на специфичен сигнален път, който регулира надолу експресията на възпалителни цитокини като TNF-α [34] [35]. Нашите резултати показват, че лечението с CP значително повишава нивото на HDL-c и съответно значително намалява нивото на LDL-c. Също така резултатите показват, че CP е по-ефективен от орлистат за повишаване на HDL-c.

В повечето случаи сравнението с HF групата показва, че CP групата смекчава ефектите от диета с високо съдържание на мазнини; О групата обаче регулира силно промените в мастната тъкан, като причинява промени, които са или повече или по-малко от нивата на С групата, докато регулирането от групата СР причинява само промени, които произвеждат нива, подобни на тези в С групата. Тази разлика се наблюдава и при измерване на тегло на епидидима, мезентериална и подкожна мастна тъкан. В допълнение, H&E оцветяването на мастната тъкан разкрива същите ефективни промени в натрупването на липиди в мастната тъкан. Като се имат предвид тези резултати, се предполага, че лечението с цитрусова кора е ефективно по различен начин от лечението с орлистат.

За да се даде основа и да се даде представа за механизма на действие на CP, бяха проведени Western blotting и RT-PCR експерименти. Диетата с високо съдържание на мазнини понижава съотношението p-AMPK/AMPK в сравнение с нормалната диета, докато лечението с екстракт от CP и орлистат води до значително увеличение на съотношението p-AMPK/AMPK в сравнение с групата С. Намаляването на съдържанието на TG и TC и повишените нива на p-AMPK показва, че както CP, така и O групите са имали тенденция към повишен клетъчен енергиен метаболизъм, което може да причини ефекта срещу затлъстяването и да облекчи високия индуциран от мазнини чернодробен стрес.

Тази работа е подкрепена от Програма за съвместни изследвания за наука и развитие на селското стопанство (PJ907089) и Програма за подкрепа на комерсиализацията на технологии, Министерство на храните, земеделието, горите и рибарството (811003031SU000), Република Корея.

Et Екстрактът от етанол на кора от цитрусов нешиу блокира натрупването на липиди.

Extract Етаноловият екстракт от цитрусова кора намалява експресията на TNF-α при мишки, предизвикани от затлъстяване.

・ Цитрусовата кора е обещаващ кандидат за разработване на естествено лекарство против затлъстяване.

Тази работа е подкрепена от Програма за съвместни изследвания за наука и развитие на селското стопанство (PJ907089) и Програма за подкрепа на комерсиализацията на технологии, Министерство на храните, земеделието, горите и рибарството (811003031SU000).