Статии Фигури и данни

Фигури

rMA15 вируси. (А) Геномна последователност на rMA15, показваща 6-те аминокиселинни промени, открити в преминалия вирус. (Б) Диаграма на rMA15 мутантните вируси, използвани в експериментите. В имената на мутантите знак плюс означава, че вирусът съдържа аминокиселината МА15 в идентифицираната позиция, а знакът минус означава, че вирусът съдържа аминокиселината WT Urbani в тази позиция. Съгласно обозначенията на протеина, MA показва мутация rMA15 в посочения алел, докато WT показва Urbani аминокиселина в посочения алел. (C) Криви на растеж на мутантните вируси в клетките Vero E6, показващи ефективна репликация на рекомбинантните мутантни вируси, описани в панел Б.

детерминанти

Патогенеза на rMA15 мутантни вируси при млади мишки BALB/c. (А) Проценти на загуба на тегло за мишки, заразени с вируси на вариант rMA15. Заразените с MA-N9- и MA-S мишки показват намаляване на загубата на тегло по време на инфекция. Използвани са десет мишки на времева точка за вирус. (B) Титри на вируси с вариант rMA15 при 2 и 4 dpi в белия дроб. Титрите в белодробни проби се определят върху клетки Vero E6. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус и точка от времето. (C) Белодробните секции бяха оцветени с H&E и бяха оценени за количеството възпаление във всяка секция. Точкуването се извършва пет пъти за всяка времева точка и вирус. (D) Изображения на представителни H & E оцветени белодробни секции при 2 и 4 dpi.

rMA15 nsp9 и шипове мутанти при млади мишки. (A) Проценти на загуба на тегло за мишки, заразени с rMA15 вариантни вируси, диаграмирани на фиг. 1 B. Обърнете внимание, че младите мишки, заразени с nsp9 или S вариант, не показват загуба на тегло, докато тези, заразени с rMA15, го правят. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус. (Б) Титри на вируси с вариант rMA15 в белите дробове при 2 и 4 dpi. Титрите в белодробни проби се определят върху клетки Vero E6. Имайте предвид, че няма разлика между WT и мутантните вируси. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус.

Патогенеза на варианти на генома rMA15 при възрастни мишки. (А) Диаграма, показваща вируси на вариант rMA15, кодиращи само структурните мутации или само репликазните мутации. (Б) Проценти на загуба на тегло за мишки, заразени с вируси на вариант rMA15. Имайте предвид, че вариантите са толкова патогенни, колкото вирусът rMA15 при стари мишки. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус и точка от времето. (C) Титри на rMA15 вариантни вируси в белия дроб при 2 и 4 dpi. Титрите в белодробни проби се определят върху клетки Vero E6. Имайте предвид, че няма разлика в титрите на белодробния вирус между вариантите и дивия тип. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус и точка от времето. (D) Изображения на представителни H & E оцветени белодробни секции при 2 и 4 dpi. Обърнете внимание на високите нива на еозинофилна и неутрофилна инфилтрация в белите дробове на заразени мишки.

MA15 S и nsp9 вариантни вируси при възрастни мишки. (А) Проценти на загуба на тегло за мишки, заразени с вируси на вариант МА15. Възрастните мишки, заразени с MA-N9 или MA-S вирус, показват загуба на тегло, подобна на тази с rMA15. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус и точка от времето. (Б) Титри на вируси с вариант rMA15 в белия дроб при 2 и 3 dpi. Титрите в белодробни проби се определят върху клетки Vero E6. Имайте предвид, че има малка разлика в титрите на белите дробове сред вариантите и дивия тип при 2 или 3 dpi. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус и точка от времето. (C) Изображения на представителни H & E оцветени белодробни секции при 2 и 3 dpi. Забележете високите нива на възпаление и инфилтрация в тези бели дробове. Дихателните пътища показват продължително възпаление по време на инфекцията.

MA15 S и nsp9 комбинация от вируси при възрастни мишки. (А) Проценти на загуба на тегло на мишки, заразени с вируси на вариант rMA15. Възрастните мишки, заразени с WT + N9/S или MA-N9/S, показват загуба на тегло, подобна на тази с rMA15. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус. (B) Титрите на вируса в белите дробове при 4 dpi са нормални за MA-N9/S и WT + N9, докато WT + S и WT + N9/S демонстрират> 1-log-по-ниски титри. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус и точка от времето. (C) Изображения на представителни H & E оцветени белодробни секции при 4 dpi.

(А до С) Криви на доза-отговор на вируси с вариант rMA15 при възрастни мишки. WT MA15, както и WT + N9/S (A), MA-N9/S (B) и WT + S (C), се използва за заразяване на възрастни мишки с различни дози вируси. (D до F) Кривите на оцеляване се нанасят заедно с всяка крива доза-отговор. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус.

Сравнителна патогенеза на три адаптирани към мишки SARS-CoV. (А) Схема на мутационните разлики между rMA15, MA20 и v2163. (B) Криви на загуба на тегло за млади мишки, заразени с MA15, MA20 или v2163. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус. (C) Титри на вируси в белите дробове на мишки, заразени с rMA15, MA20 или v2163 при 2 и 4 dpi. Бяха проведени пет експеримента за всеки вирус и точка от времето.

Маси

Петдесет процента смъртоносна доза и среден ден на смърт за 1-годишни женски мишки BALB/c, инфектирани интраназално с посочената доза вирус а

Вирус и доза LD50 Среден ден на смъртта
MA15 2
10 2 5,4 ± 0,54
10 3 4,6 ± 0,54
10 4 4,2 ± 1,3
10 5 3,8 ± 1,09
WT + N9/S10 2.5
10 2 NA b
10 3 4,4 ± 0,54
10 4 4,8 ± 1,09
10 5 3,2 ± 0,44
MA-N9/S10 2.3
10 2 NA
10 3 5,6 ± 1,51
10 4 4,4 ± 1,14
10 5 3,2 ± 0,4
WT + S10 4.375
10 2 NA
10 3 NA
10 4 NA
10 5 6 ± 1,26

↵ a Използвани вируси са адаптирани към мишки SARS-CoV (MA15) и мутантни производни на MA15 и див тип SARS-CoV Urbani. За всяка доза от всеки вирус бяха заразени пет животни.