научна статия

  • Пълен член
  • Цифри и данни
  • Препратки
  • Цитати
  • Метрика
  • Препечатки и разрешения
  • PDF

Резюме

Воден екстракт от Viburnum opulus Листът на L. (Caprifoliaceae) (VO) е изследван за антиноцицептивни и противовъзпалителни дейности при мишки и плъхове. За определяне на тези ефекти са използвани тест за изтръпване на опашката, тест за извиване с оцетна киселина и тест за оток на лапи на плъхове, предизвикан от карагенан. Нашите открития показват, че VO предизвиква свързано с дозата инхибиране при индуцирано от оцетна киселина коремно разтягане при мишки. VO инхибира коремното разтягане при 100 и 200 mg/kg. VO показа антиноцицептивна активност, която беше количествено определена чрез тест за движение на опашката при дози от 100 и 200 mg/kg. Въпреки това, VO не е имал противовъзпалителен ефект при тези дози. LD50 на VO се определя като 5.447 g/kg.

пълна

Въведение

Родът Калина (Caprifoliaceae) се състои от над 230 вида, разпространени от Южна Америка до Югоизточна Азия, като по-голямата част от тях са ендемични (Lobstein et al., 1999). Растението е представено от четири вида във флората на Турция: Viburnum opulus L., V. orientale Палада, V. лантана Земя V. тинус L. (Davis, 1972; Davis et al., 1988).

В Средна Анатолия е приготвена традиционна напитка, наречена „гилабуру“ от плодовете на V. opulus. Ядливите плодове имат тъмночервен цвят. Кората на V. лантана е бил използван в народната медицина като рубефактик и аналгетик (Baytop, 1999). Превантивният ефект на V. dilatatum Thunb. за окислително увреждане е открито при плъхове, подложени на стрес (Iwai et al., 2001) и при стрептозотоцинови диабетични плъхове (Iwai et al., 2004). В допълнение, ефектите от V. dilatatum върху антиоксидантните ензими в плазмата, черния дроб и стомаха бяха изследвани и резултатите показват, че поглъщането на това растение може да допринесе за намаляване на консумацията на антиоксидантни ензими, като супероксиддисмутаза, каталаза, глутатион пероксидаза и глутатион (Kim et al., 2005). Алкохолните екстракти от V. erubescens Стена. се съобщава, че показват антивирусна активност (Dhar et al., 1968). Някои иридоидни алдехиди, изолирани от V. luzonicum Rolfe проявява умерена инхибиторна активност срещу ракови клетки HeLa S3 (Fukuyama et al., 2005b).

Родът Калина е известно, че съдържа тритерпеноиди (Machida & Kikuchi, 1997; Kagawa et al., 1998; Fukuyama et al., 2002), дитерпеноиди (Kubo et al., 2001; Fukuyama et al., 2005a), сескитерпени (Fukuyama et al., 1996), иридоиди (Iwagawa & Hase, 1986; Iwagawa et al., 1990; Çalış et al., 1995; Tomassini et al., 1997) и полифеноли (Machida et al., 1991; Parveen et al., 1998; Lobstein et al., 2003). Биологичните дейности на това растение могат да бъдат свързани с тези съединения.

Целта на това проучване е да се определят антиноцицептивните и противовъзпалителни ефекти на V. opulus. Тези дейности не са проучвани по-рано за този вид.

Материали и методи

Растителен материал

V. opulus L. е събрана през 2005 г. от цъфтящи растения близо до Кайсери (Турция). Таксономичната идентичност на растението е потвърдена от проф. Д-р Х. Думан, растителен таксономист в Департамента по биологични науки, Факултет по изкуства и наука, Университет Гази, Анкара, Турция. Образци на ваучери са съхранявани в хербариума на университета в Анкара, Фармацевтичен факултет (AEF № 23696).

Приготвяне на екстракт

Изсушени на въздух и прахообразни листа на растението се екстрахират с вода. Водният екстракт се приготвя чрез мацериране на 100 g растителен прах в 1000 ml студена дестилирана вода за 1 ден. Мацератът се изпарява и лиофилизира. Добивът на екстракта е 22.4% (w/w).

Животни

Мъжки и женски плъхове Sprague-Dawley (200–250 g) и швейцарски мишки-албиноси (20–24 g) бяха държани в къщата за животни на Медицинския факултет на университета Yüzüncü Yıl. Животните са отглеждани в институционалната къща за животни на университета, но първоначално родът е получен от Института за здравна защита в Анкара (правителствена организация). Животните бяха настанени в стандартни клетки (48 cm × 35 cm × 22 cm) при стайна температура (22 ± 2 ° C) с изкуствена светлина от 7.00 ч. До 19.00 ч. И снабдени с гранулирана храна (Van Animal Feed Factory, Van- Турция) и вода ad libitum. Протоколът за проучването е одобрен от Етичния комитет на Медицински факултет на Университета Юзюнцу Йъл Развъждане и изследвания на животни.

Наркотици и химикали

Ламбда-карагенан тип IV и индометацин са получени от Sigma (Steinheim, Германия), етодолак е получен от Fako (Истанбул, Турция), а аспиринът е получен от Bayer (Истанбул, Турция).

Тест за остра токсичност

Мъжки и женски мишки бяха разпределени на случаен принцип в девет групи с по шест животни във всяка група. Първата група беше контролната група и беше третирана с изотоничен физиологичен разтвор (ISS; 0.9% NaCl). Останалите осем групи бяха лекувани с Viburnum opulus даден i.p. в нарастващи дози от 0.20, 0.32, 0.40, 0.80, 1.60, 3.20, 4.80 и 6. 40 mg/kg телесно тегло. Смъртността във всяка клетка се оценява 72 часа след приложение на V. opulus. Процентът на смъртността се превръща в пробит. Регресионните линии бяха монтирани по метода на най-малките квадрати и границите на доверие за стойностите LD1, LD10, LD50, LD90 и LD99 бяха изчислени по методите на Litchfield и Wilcoxon (1949) и Kouadio et al. (2000) .

Антиноцицептивна активност

Тест за извиване, предизвикан от оцетна киселина

Методът на Koster et al. (1959) е използван с лека модификация. Животните се държат в контролирана температура (22 ± 2 ° C) с 12-часов цикъл светлина-тъмнина. Храната и водата бяха свободно достъпни. Изкривяване на корема е въведено от i.p. инжектиране на оцетна киселина (6%, 60 mg/kg). Животните бяха предварително обработени с воден екстракт чрез i.p. приложение, 30 минути преди инжектирането на оцетна киселина и 5 минути след началото на теста. Растителният екстракт е тестван при 100 и 200 mg/kg i.p. Контролните животни получават същия обем ISS (0,2 ml). Ацетилсалициловата киселина в доза от 300 mg/kg, което е преференциална доза при такива проучвания, се дава през устата и се използва като стандарт за сравнение (Hunskaar et al., 1985). След предизвикване двойки мишки бяха поставени в стъклена клетка с размери 44 cm × 44 cm × 25 cm. Броят на разтяганията, възникващи в продължение на 15 минути непосредствено след инжектирането на оцетна киселина. Използвани са шест мишки на група. Животните се умъртвяват веднага след всеки 15-минутен експеримент. Резултатите бяха оценени чрез изчисляване на средния брой разтягания на група и те бяха представени като процентно инхибиране на разтягащите движения в сравнение с контролната група (Tanker et al., 1996):

където н е средният брой разтягания на контролната група, и н′ Е средният брой разтягания на тестовата група.

Тест с движение на опашката

Антиноцицептивният отговор се оценява с апарат за придвижване с опашка (LSI Letica LE 7106; Барселона, Испания), като се използва метод, първоначално описан от D’Amour и Smith (1941). Животните бяха обездвижени внимателно с помощта на ръкавица и лъчистата топлина беше фокусирана върху почерненото място на 1-2 см от върха на опашката. Интензитетът на лъча се регулира, за да се получи латентност на придвижването на опашката от 5–8 s при контролните животни. Измерването се прекратява, ако латентността надвиши крайното време (15 s), за да се избегне увреждане на тъканите. Във всички експерименти мишките бяха тествани два пъти във всяка точка от времето. Тестът се провежда 30 минути преди администриране на лекарството, което служи като базова латентност, и 30, 90 и 150 минути след приложението на лекарството. Като референции са използвани аспирин (150 mg/kg, р.о.) и морфин хидрохлорид (10 mg/kg, s.c.) (Parimala Devi et al., 2003; Matsumoto et al., 2004). На контролната група се дава само изотоничен физиологичен разтвор (ISS) (0,2 ml, i.p.). Viburnum opulus екстракт 100 и 200 mg/kg се дава i.p. да се Viburnum opulus групи.

Данните, получени от всички групи, са стандартизирани чрез използване на следната формула (Tanker et al., 1996) за статистически анализ:

където н представлява резултатите от движението на опашката на 30-та, 90-та и 150-та минута и нi представлява резултатите от движението на опашката преди приложението на лекарството.

Противовъзпалителна активност

Методът на Winter и др. (1962) с лека модификация. Тридесет и шест плъха от двата пола бяха разделени на шест групи от по шест животни всяка. Плъховете са гладували 12 часа и са лишени от вода само по време на експеримента. Лишаването от вода е трябвало да осигури равномерна хидратация и да сведе до минимум вариабилността на оточния отговор. Възпалението на задната лапа се предизвиква чрез инжектиране на 0,05 ml пресен λ карагенан (флогистичен агент) в субплантарната повърхност на дясната задна лапа (Winter et al., 1962). На контролна група I е даден нормален физиологичен разтвор, а на контролна група II е етилов алкохол. Третата група (референтна група I) получава индометацин (3 mg/kg, i.p.) (Rimbau et al., 1999), а останалите три групи получават екстракта в дози 50, 100 и 200 mg/kg, i.p. Дозите екстракт, използвани в настоящото проучване, са избрани според стойността на LD1 (LD1 = 2,345 g/kg).

Измерването на обема на стъпалото се извършва чрез техника на изместване с помощта на плетизмометър (Ugo Basile 7140; Comerio, Италия), непосредствено преди и 3 часа след инжектирането. Процентът на инхибиране на възпалителната реакция се определя за всяко животно чрез сравнение с контролите и се изчислява по формулата (Kouadio et al., 2000):

къдет е разликата в обема на лапата в лекуваната група и d° С е разликата в обема на лапата в контролната група.

Статистически анализ

Резултатите се отчитат като средна стойност ± SEM (стандартна грешка на средната стойност). Общата вариация се анализира чрез извършване на еднопосочен дисперсионен анализ (ANOVA). За определяне на значимостта бяха използвани HSD на Tukey’s (честно значима разлика), LSD (най-малко значима разлика) и T2 тестовете на Dunnett и Tamhane. Нивата на вероятност под 0,05 се считат за значими.

Резултати

Тест за остра токсичност

Мишките бяха използвани за определяне на i.p. LD50 стойност на V. opulus. Установено е, че LD50 стойността на екстракта е 5.447 g/kg при мишки. Тези данни ни позволиха да изберем дозата, която да се прилага на плъхове за оценка на неговата антиноцицептивна и противовъзпалителна активност. Резултатите за летални дози са показани в Таблица 1.

Публикувано онлайн:

маса 1. Смъртоносни дози от Viburnum opulus.

Антиноцицептивна дейност

Тест за извиване, предизвикан от оцетна киселина

Viburnum opulus (VO) причинява свързано с дозата инхибиране на индуцираната от оцетна киселина реакция на разтягане на корема при мишки (Таблица 2). VO при 100 и 200 mg/kg (р.о.) значително намалява болката в корема, предизвикана от оцетна киселина, съответно с 56,59 и 63,21%.

Публикувано онлайн:

Таблица 2. Резултати за V. opulus в теста за извиване на оцетна киселина при мишки.

Ацетилсалициловата киселина инхибира химическата болка (44,37%) в доза от 300 mg/kg. Степента на инхибиране за всяка от трите групи е значителна в сравнение с контролната група. Сравнението на групите с аспирин и VO не показва статистически значима разлика.

Тест с движение на опашката

Резултатите за водния екстракт от VO в теста за движение с опашка са показани в Таблица 3. VO е тестван при 100 и 200 mg/kg i.p.

Публикувано онлайн:

Таблица 3. Резултати за V. opulus, ацетилсалицилова киселина, морфин и контролни групи при тест с придвижване на опашката.

Антиноцицептивният ефект на аспирина започва през първите 30 минути, но показва значителна аналгезия след 150 минути. От друга страна, морфиновата група показа значителен антиноцицептивен ефект на 30 и 90 минути; този ефект не се наблюдава на 150-та минута. Екстрактът VO показва антиноцицептивен ефект при дози от 100 и 200 mg/kg през всички периоди от време, но ефектът не е статистически значим на 30-та минута. Екстрактът VO имаше подобен антиноцицептивен ефект през 90-ата минута на тази на морфиновата група и на 150-тата минута на тази на аспириновата група. И двете дози екстракт от VO създават подобен аналгетичен ефект.

Противовъзпалителна активност

Таблица 4 показва резултатите за антиедемния ефект на интраперитонеално приложена VO върху оток на карагенановата лапа при плъхове. Екстрактът VO не показва значителен противовъзпалителен ефект при никоя от тестовите дози. В сравнение с контролите, най-голямата противовъзпалителна активност се наблюдава в референтната група, приемаща индометацин, с 95,7% регресия на възпалението.

Публикувано онлайн:

Таблица 4. Противовъзпалителен ефект на V. opulus.

Дискусия

Нивото LD50 на екстракта от листа на Viburnum opulus беше определено на 5.447 g/kg. Екстрактът от VO изглежда доста безопасен поради високата си стойност LD50. LD50 се отнася до дозата, която води до смърт при половината от изследваните животни. Високият LD50 показва по-ниска токсичност, тъй като това означава, че е необходимо повече от тестваното съединение да доведе до смърт.

В сравнение с аспирина, екстрактът VO по подобен начин инхибира разтягането на корема при 100 и 200 mg/kg. Екстрактът VO показва антиноцицептивна активност за термична болка и при двете дози.

Антиноцицептивната активност на Viburnum toronis също е изследван от Calle et al. (1999). Те откриха, че етилацетатният екстракт от V. toronis имаше значителна активност при доза от 250 mg/kg, използвайки теста за извиване на оцетна киселина. Екстрактът намалява болката в корема, предизвикана от оцетна киселина, с 68,6% при тази доза. Получените резултати за антиноцицептивната активност на V. opulus са в съгласие с резултатите на Calle et al. (1999) .

В предишното ни проучване (Sever Yılmaz et al., 2007), антиноцицептивните и противовъзпалителни дейности на Viburnum lantana (VL) екстракт от листа имаше подобен ефект при доза от 100 mg/kg. Той обаче има по-силна антиноцицептивна активност в сравнение с аспирина при доза от 200 mg/kg. VL показа мощна антиноцицептивна активност, определена чрез тест с движение на опашката при доза от 100 mg/kg.

С изключение на инхибирането на химически болезнени стимули, резултатите от антиноцицептивната и противовъзпалителна активност за екстракт от VO са в съгласие с резултатите на Sever Yılmaz et al. (2007) .

Причината за по-силната антиноцицептивна активност на екстракта VL при дози от 200 mg/kg в сравнение с тази на екстракта VO може да бъде свързана с фитохимичното съдържание на растенията.

В предишните ни проучвания, Viburnum opulus и V. лантана екстрактите също бяха анализирани за съдържанието на салицин, хлорогенова киселина и аментофлавон с помощта на високоефективна течна хроматография (HPLC) с система от разтворители вода, тетрахидрофуран и ортофосфорна киселина (97,7: 1,8: 0,5, об/об/об) Йълмаз, 2007). Нашите резултати показаха, че екстрактът от VO е обогатен със салицин и хлорогенова киселина. Екстрактът VL обаче съдържа повече аментофлавон, отколкото екстрактът VO.

Както посочихме и преди, Калина видовете съдържат тритерпеноиди, дитерпеноиди, сесквитерпеноиди, иридоиди и полифеноли. Следователно може да бъде възможен синергизъм между тези вещества. Антиноцицептивните и противовъзпалителни дейности на тези химикали са докладвани преди за някои Калина видове (Calle et al., 1999). Метанолните екстракти и екстрактът в етилацетат от Viburnum toronis намалява гърчовете при мишки, индуцирани от 1% оцетна киселина при дози от 250 mg/kg. Антиноцицептивната активност се приписва на 2-метил-бутенова, 2-метил-2-бутенова, 3-метилбутенова киселина и 4-хидрокси-4-метил-пентанон, изолирани от метанолния екстракт в етилацетат.

Друго проучване съобщава, че метанолният екстракт и екстрактът в бутанол от Viburnum sargentii имал активност при тестове за възпаление и гърчове (Youn et al., 2007).

Екстрактът VO няма значителна противовъзпалителна активност при никоя от тестваните дози в сравнение с контролната група. Групата на индометацин, която беше избрана за референтна група, показа значителна противовъзпалителна активност в сравнение с екстракта VO при всички дози. В резултат не се наблюдава противовъзпалителен ефект за екстракта VO. Това беше в добро съгласие с предишното ни проучване, където не съобщавахме за противовъзпалителна активност с екстракта VL (Sever Yılmaz et al., 2007).

В заключение, настоящото проучване разкрива, че водният екстракт от Viburnum opulus притежава обещаваща антиноцицептивна активност. На този етап не знаем причината (ите) зад тези наблюдения. Независимо от това, това може да се дължи на гликозиди, терпени и полифеноли в екстракта (Machida et al., 1991; Fukuyama et al., 1996, 2002, 2005a, Lobstein et al., 2003).

За да се изясни механизмът (механизмите), чрез които компонентите на екстракта от VO проявяват антиноцицептивни и противовъзпалителни ефекти, които демонстрирахме в това проучване, ще последват допълнителни проучвания с изолираните компоненти.

маса 1. Смъртоносни дози от Viburnum opulus.

Таблица 2. Резултати за V. opulus в теста за извиване на оцетна киселина при мишки.

Стойностите за коремно разтягане са средни ± SE, н = 6, стр а стр Таблица 3. Резултати за V. opulus, ацетилсалицилова киселина, морфин и контролни групи при тест с придвижване на опашката.

ISS, изотоничен физиологичен разтвор. Стойностите са средни ± SE, н = 6, стр а стр б стр ° С стр Таблица 4. Противовъзпалителен ефект на V. opulus.