Ариан ван Копен

Катедра по нефрология и хипертония, Университетски медицински център Утрехт

Мариан К. Верхаар

Отделение по нефрология и хипертония, Университетски медицински център Утрехт

Lennart G. Bongartz

Отделение по нефрология и хипертония, Университетски медицински център Утрехт

Яап А. Джоулс

Отделение по нефрология и хипертония, Университетски медицински център Утрехт

Резюме

Въведение

Поради прогресивния си характер, последващия бъбречно заболяване в краен стадий и свързаната сърдечно-съдова заболеваемост и смъртност, ХБН е нарастващ проблем на общественото здраве 1. Следователно забавянето на прогресията на ХБН е основен здравен приоритет. Тъй като ХБН се характеризира със сложни нарушения на хомеостазата, интегративни животински модели са необходими за изследване на развитието и прогресията на ХБН. Бъбрекът се състои от широк спектър от различни видове клетки, които взаимодействат помежду си. Тази сложност не може да бъде имитирана in vitro.

Прогресията на бъбречната недостатъчност се проследява чрез събиране на урина (за измерване на количеството протеин и креатинин), кръв (плазмен карбамид и креатинин) и систолично кръвно налягане. Ние осъзнаваме, че развитието на хипертония може да бъде проследено по-точно, когато се използва телеметрия вместо плетизмография на маншета на опашката. Креатининовият клирънс може да бъде изчислен, но има тенденция да подценява спада на GFR поради обширна тубуларна секреция на креатинин при плъхове 16, подчертавайки значението на метода на златния стандарт за определяне на бъбречната функция чрез клирънс на инулин и PAH 17, 18, 19. Koeners и сътр. описа цялата процедура 20. Клирънсът на инулин и PAH се изчислява от тяхната концентрация в пробата от урина (U), скоростта на потока на урината (V) и тяхната плазмена концентрация (P). По-рано показахме значително намаляване на GFR и ERPF в този модел, използвайки класическа технология за изчистване, докато това беше по-малко очевидно от промените в плазмения креатинин, плазмения урея или креатининовия клирънс 13 .

диета

Фигура 1. Времева линия на L-NNA, диета с високо съдържание на сол, UNX и SNX. Посочени са надлъжни измервания за определяне на бъбречната функция и точка на прекратяване. Когато е необходимо по-продължително проследяване след SNX, 6% NaCl диета може да продължи с течение на времето.

Фигура 2. Дисекция на надбъбречната жлеза. За да премахнете надбъбречната жлеза, без да я безпокоите, поставете форцепс в мазнината между бъбрека и надбъбречната жлеза и се придвижете от полюса на съда нагоре към върха, както е показано с червената линия. Фигура, адаптирана от 20-то американско издание на Анатомията на човешкото тяло на Грей, 1918 г.

Фигура 3. Субтотална нефректомия. Червените линии означават режещи ръбове. Фигура, адаптирана от 20-то американско издание на Анатомията на човешкото тяло на Грей, 1918 г.

Фигура 4. Процент на отстранена бъбречна тъкан след субтотална нефректомия в два различни експеримента. Опит 1; п = 16, опит 2; n = 23.

Фигура 5. Развитие на бъбречна недостатъчност при плъхове с ХБН, прекратено 6 седмици след SNX (прекъснати линии n = 5) спрямо здрави контроли (пунктирани линии n = 5) и при плъхове с ХБН, прекратени 12 седмици след SNX (£ n = 8) спрямо здрави контроли (• п = 8). Плъховете с ХБН получават L-NNA до седмица 4 и диета с високо съдържание на сол от седмица 1 до прекратяване (не е показано на графики). SNX предизвиква хипертония (измерена чрез плетизмография на опашката) (А), уремия (Б), анемия (° С) и протеинурия (Д) и подчертано намаляване на GFR (E) и ERPF (F) 13. * Посоченият p 21 позволява проследяване на клетки на администрирани донорски клетки в реципиент (nonGFP +) плъх. Плъхът Lewis е относително устойчив на развитие на бъбречно увреждане и развитието на ХБН е бавно в сравнение с други щамове 22, 15. Поради това комбинирахме отстраняването на 5/6-та бъбречна маса с изчерпване на NO и диета с високо съдържание на сол, тъй като това прилича на няколко аспекта на човешката ХБН, като висок прием на сол и ендотелна дисфункция. Читателите трябва да имат предвид, че необходимостта от комбиниране на 5/6-та нефректомия с диета с високо съдържание на сол и/или изчерпване на NO зависи от щама на плъховете, използвани за експериментите.

Направихме 5/6-та нефректомия в двуетапна процедура, вместо в едноетапна, тъй като това се счита за по-малко обременяващо за животното, свързано е с по-малко смъртност, свързана с операцията, и е предпочитано от нашия експериментален комитет по животни. Предпочитахме фланговия разрез, а не лапаратомията, за да достигнем до бъбреците, тъй като лапаротомията е свързана с по-висок риск от инфекция на рани, разхлабване на шевовете, подкожна херния и сраствания с червата в сравнение с фланговия разрез. Освен това, ако експерименталният дизайн включва интервенция с лапаротомия - какъвто е случаят в нашите експериментални проучвания за прилагане на клетки от костен мозък в бъбречната артерия на остатъчния бъбрек, извършването на лапаротомии за SNX не е за предпочитане, тъй като повторните лапаротомии трябва да се избягват.

След хирургично отстраняване на 5/6 от бъбречната маса могат да възникнат няколко критични проблема. По време на UNX може да има трудности при стабилизиране на бъбреците, тъй като околната мазнина лесно ще се отдели. За излагане на бъбреците могат да се използват два метода. 1) Използвайте по-малки форцепс, за да хванете бъбречните съдове, като внимателно се придвижите надолу от долния полюс на бъбрека към васкулатурата и внимателно дръпнете, докато успеете да стабилизирате бъбрека. 2) Използвайте тъп форцепс, за да извадите внимателно бъбрека от корема. Когато бъбрекът е изложен, може да се използва марля за спиране на кървенето, което може да възникне по време на тази процедура. За да предотвратите кървене, започнете да издърпвате мазнината в долния полюс на бъбрека, където мазнината е силно прикрепена към бъбрека.

Важно е да се създаде пространство между възела около бъбречния съд и бъбреците, за да се предотврати кървенето след отстраняване на бъбрека, тъй като възелът може да се изплъзне от бъбречните съдове поради входящия кръвен поток, като бързо запълва корема с кръв. Може да се използва марля за отстраняване на кръвта и трябва да се приложи натиск за спиране на кървенето. Използвайте форцепс, за да захванете бъбрека и да поставите нова лигатура. Когато бъбречните съдове не могат да бъдат проследени назад, поддържайте натиск, докато кървенето спре. Добавете 1 ml физиологична сол, за да предотвратите дехидратация поради кървене в коремната кухина и изчакайте приблизително 5 минути, преди да затворите мускулния и кожен слой. Следете много внимателно плъховете през следващите дни. Когато лигатурата е все още на място след отстраняване на бъбрека, но бъбречните съдове кървят, дългите краища на лигатурата могат да се използват за връзване на съдовете.

Когато след дисекция на полюсите, въпреки задържането на натиск върху подложките с гелна пяна, ако кървенето продължава, това вероятно се дължи на нараняване на голяма бъбречна артерия или бъбречно легенче. Това кървене може да бъде спряно чрез поставяне на нови подложки с гел пяна върху раната, като се внимава да не се движи пяната подложка по време на повдигане на остатъка, тъй като по-големите съдове са близо до хилума, и се изчаква по-дълго време.

Кръвта може да бъде проследена в урината до 2 дни след операцията. Когато бъбречното легенче е увредено или голям бъбречен съд продължава да кърви, ще има постоянна следа от хематурия. Плъхове с персистираща хематурия след операция трябва да бъдат евтаназирани, тъй като не е възможно да се спре кървенето. Ако се наблюдава хематурия в по-късна точка от времето след операцията, която може да се появи до 2 седмици след операцията, плъхът също трябва да бъде евтаназиран, тъй като кръвта се е съсирила в бъбречното легенче и в крайна сметка ще запуши уретера и пикочния мехур, което води до запушване.