Резюме

ОБЕКТИВЕН—Да се ​​оценят ефектите на метформин върху глюкагоноподобния пептид 1 (GLP-1) и нивата на лептин.

глюкагон-подобен

ПРОЕКТИРАНЕ И МЕТОДИ НА ИЗСЛЕДВАНИЯТА- Общо 10 затлъстели недиабетни пациенти от мъжки пол са проучени преди и след 14-дневно лечение с 2 550 mg/ден метформин и са сравнени с 10 нелекувани затлъстели контролни субекта. На 0 и 15 дни бяха оценени нивата на лептин и GLP-1 (7–36) амид/(7–37) преди и след перорално натоварване с глюкоза по време на евгликемична хиперинсулинемична скоба, за да се избегне намесата на вариациите на инсулинемия и гликемия върху GLP -1 и секреция на лептин. Ефектите на метформин върху разграждането на GLP-1 (7–36) амид в човешката плазма и в буферен разтвор, съдържащ дипептидил пептидаза IV (DPP-IV) също са проучени.

РЕЗУЛТАТИ—Нивата на лептин не се повлияват от пероралното натоварване с глюкоза и не се променят след лечение с метформин. Метформин индуцира значителни (P 30 kg/m 2) пациенти на възраст 18–45 години с нормална гликемия на гладно и нормален глюкозен толеранс, които са били насочени към амбулаторната клиника на Секция по метаболитни заболявания, Обща болница Careggi, Флоренция, Италия, за лечение на затлъстяване. Пациентите от женски пол бяха изключени, за да се избегне намесата на колебанията в нивата на половите хормони върху секрецията на лептин (19). Субекти с известно стомашно-чревно заболяване; хипотиреоидизъм; или чернодробна, бъбречна или дихателна недостатъчност не са били включени в проучването. Също така бяха изключени тези с нива на серумен креатинин> 1,2 mg/dl, тиротропин> 4,0 mU/l, плазмена глюкоза на гладно> 6,3 mmol/l или плазмена глюкоза> 7,7 mmol/l на 120 минути след 75 g перорално натоварване . Нито един от пациентите не е подложен на фармакологично лечение през 2-те седмици, предхождащи проучването. Всички пациенти са дали писмено информирано съгласие преди записването си. Протоколът за изследване е одобрен от Етичния комитет на Университета във Флоренция.

Лечение

Пациентите са рандомизирани или към групата на активното лечение, или към контролната група. Пациентите в групата на активното лечение са били лекувани с метформин 2,550 mg/ден (850 mg три пъти дневно след закуска, обяд и вечеря) в продължение на 14 дни. Пациентите от контролната група не са получавали никакво лечение през цялото време на проучването. Групата с активно лечение и контролната група не се различават значително по отношение на възрастта (46,3 ± 10,9 срещу 48,2 ± 11,2 години), ИТМ (34,8 ± 3,1 срещу 34,6 ± 3,2 kg/m 2), обиколката на талията (116,5 ± 10,9 срещу 115,8 ± 14,3 cm) и гликемия на гладно и 2 часа след натоварване (съответно 5,5 ± 0,6 срещу 5,5 ± 0,7 mmol/l и 6,2 ± 1,0 срещу 6,1 ± 1,3 mmol/l). И в двете групи, GLP-1 и нивата на лептин са изследвани в дни 0 и 15, за да се проверят промените, предизвикани от терапията с метформин.

Пациентите са били записани при първото си посещение в амбулаторията и никой от пациентите не е получил специфично лечение за затлъстяване (напр. Диетично предписание, образователни програми и др.) През цялото време на проучването.

Оценка на нивата на лептин и GLP-1

Нивата на лептин и GLP-1 бяха оценени на ден 0 (преди началото на терапията с метформин в групата с активно лечение) и ден 15. Нивата на лептин и GLP-1 в плазмата бяха измервани на гладно и след орално натоварване с глюкоза; оценката е извършена по време на евгликемична хиперинсулинемична скоба (20), за да се избегнат индуцирани от метформин вариации в кръвната глюкоза или инсулин, пречещи на резултатите.

Инхибиране на разграждането на GLP-1 in vitro

Ефектът на метформин върху разграждането на амид на GLP-1 (7–36) in vitro се оценява в обединена човешка плазма от здрави доброволци, както е описано по-рано (21). Човешката плазма е получена от 11 (6 мъже и 5 жени) здрави, слаби (ИТМ 2), недиабетни доброволци на възраст 25–42 години. След едно нощно гладуване кръв се събира в 8:30 сутринта в евакуирани 10 ml EDTA епруветки с добавяне на 500 UI апротинин А (Trasylol; Bayer Farmaceutici, Милано, Италия). Плазмата незабавно се отделя чрез центрофугиране при 4 ° C и проби от 1 ml се инкубират при 37 ° C в продължение на 30 минути със 110 pmol/l синтетичен GLP-1 (7–36) амид (Peninsula Laboratories, Belmont, CA) в 0,1 mol/l Tris-HCl [pH 8] и с различни концентрации (0, 0,01, 0,05, 0,1 и 0,5 μg/ml) метформин (Molteni Farmaceutici, Firenze, Италия) за 0 и 30 минути (n = 6 проби за всяка експериментална точка). Реакцията беше спряна чрез добавяне на 20 μl DPP-IV инхибитор LC0014.

За да се провери дали ефектите на метформин върху разграждането на амид на GLP-1 (7–36) in vitro могат да бъдат медиирани чрез инхибиране на DPP-IV, 110 pmol/l на GLP-1 (7–36) амид в 0,1 mol/l Tris-HCl (pH 8) се инкубира с 0,06 U/ml свински бъбреци DPP-IV (Sigma, Сейнт Луис, МО) и с различни концентрации (0,01, 0,05, 0,1 и 0,5 μg/ml) на метформин (Molteni Farmaceutici) за 0 и 30 минути (n = 6 повторения за всяка експериментална точка). Реакцията се спира чрез добавяне на 20 μl от DPP-IV инхибитор LC0014 и инкубатите се съхраняват при -80 ° С до анализ. Кръвни проби за определяне на лептин се взимат в евакуирани гел епруветки, с добавяне на 500 UI апротинин А (Trasylol). Серумът се отделя чрез центрофугиране при 4 ° С и се замразява при -80 ° С до анализ.

Лабораторни анализи

GLP-1 (7–36) амид/(7–37) беше измерен чрез GLP-1 (активен) ензимно свързан имуноанализ (Linco). Този анализ се основава на моноклонално антитяло, фиксирано в покрита микропланшетна плоча, която свързва NH2-крайната област на активен GLP-1. Концентрацията на активен GLP-1 е пропорционална на флуоресценцията, генерирана от умбелиферон, който се получава от реакцията между алкална фосфатаза (конюгирана с анти-GLP-1 моноклонални антитела) и метил умбелиферил фосфат. Най-ниската отчетена граница на откриване е 2 pmol/l; докладваният коефициент на вариация в рамките на анализа (CV) е 8% при ниски и високи концентрации (диапазон 4–76 pmol/l), а CV между промените е 12% при 4-8 pmol/l и 7% при 28 –76 пмол/л. Проверихме CV в рамките на и между тестовете, които бяха съответно 12,5 и 15,5% при 8 pmol/l и 9,5 и 13,5% при 76 pmol/l. Кръстосаната реактивност на анализа е 100% за GLP-1 (7–36) амид и GLP-1 (7–37), но не е откриваема за GLP-1 (9–36) амид, GLP-2 и глюкагон. Серумният лептин се измерва с помощта на състезателен комплект за радиоимуноанализ за човешки лептин (Linco). Инсулинът се измерва чрез имуноанализ, извършен на анализатор IMX System (Abbott Laboratories Diagnostic Division, Токио); С-пептидът е измерен чрез имуноанализ, извършен върху анализатор Immulite 2000 (DPC, Лос Анджелис).

Статистически анализ

Данните са изразени като средни стойности ± SD, с изключение на ненормално разпределените променливи, които са изразени като медиана (25–75-и персентил). Двустранни сдвоени и несдвоени t-тестове на Student бяха приложени за сравнение на средствата на променливи с нормално разпределение, когато е подходящо; Тестовете на Wilcoxon’s и Mann-Whitney U бяха приложени в случай на променливи с ненормално разпределение, като циркулиращ инсулин. Еднопосочен дисперсионен анализ (ANOVA) е използван за сравнения между повече от две проби. Двупосочен ANOVA се използва за сравнение на секрецията на GLP-1 между групи по време на стимули. Корелациите бяха оценени по метода на Пиърсън.

РЕЗУЛТАТИ

Ефекти на метформин върху нивата на лептин и GLP-1 при пациенти със затлъстяване

Всички пациенти както в активното лечение, така и в контролните групи са завършили проучването. Нито един от пациентите не е имал сериозни нежелани събития. Двама пациенти от групата на активното лечение съобщават за лека и преходна диария, която не определя прекратяване на терапията с метформин.

Ефекти на метформин върху разграждането на амид на GLP-1 (7–36) in vitro, показан от концентрациите на амид на GLP-1 (7–36) (% отклонение от времето 0) след 30-минутна инкубация с метформин в обединени серуми от човешки доброволци ( A) и в буферен разтвор, съдържащ DPP-IV (B), с добавен 110 pmol/l GLP-1 (7–36) амид. Данните са изразени като средни стойности ± SD. * P c.rotelladfc.unifi.it .

Получено за публикуване на 13 юли 2000 г. и прието в преработен вид на 10 ноември 2000 г.

C.M.R. е член на Международния консултативен съвет по аналозите на GLP-1 на Novo Nordisk, Дания. Той е получил хонорари от Molteni Farmaceutici, Firenze и Bayer Farmaceutici, Милано, Италия, които в момента продават метформин в Италия. E.M. е платен консултант за Molteni Farmaceutici.

Таблица на друго място в този брой показва конвенционални и Système International (SI) единици и коефициенти на преобразуване за много вещества.