1 Лаборатория по химия-биохимия, околна среда, хранене и здраве, Медицински и фармацевтичен факултет на Казабланка, Университет Хасан II, 19 улица Tarik Ibn Ziad, Казабланка, Мароко

изследване

2 Лаборатория по фармакогнозия, Факултет по медицина и фармация в Казабланка, Университет Хасан II, 19 улица Tarik Ibn Ziad, Казабланка, Мароко

3 Лаборатория за здраве и хранително-вкусова храна, Факултет по наука и технологии, Университет Хасан I, Route de Casablanca Km. 3,5, BP 539, Settat, Мароко

4 Отдел за науката за живота, Национален център за енергетика, науки и ядрени техники, BP 1382, 10001 Рабат, Мароко

Резюме

1. Въведение

Преди много години лечебните растения са били широко използвани при лечението на много заболявания по целия свят; растенията съдържат естествено голямо разнообразие от химични вещества с различна фармакологична и биологична активност. Както се съобщава в литературата, процентът на хората от Мароко, които използват традиционни лекарства, варира от 50 до 75% [1]; междувременно много други проучвания показват, че огромно количество билки, използвани без научни доказателства, могат да проявят прекомерно токсични ефекти [2].

Любезно се отбелязва, че целта на това проучване е да се оцени фитохимичният скрининг, острата и подостра токсичност на A. baetica приготвени в отвара; по този начин на мишки се прилагат различни дози от изследваното растение, изследват се биохимични параметри и хистологични промени

2. Материали и методи

2.1. Растителен материал

Корените на A. baetica бяха събрани от град Мекнес, град в Мароко, на около 150 км източно от столицата на Мароко (Рабат) през октомври 2016 г. Образец на ваучер беше таксономично идентифициран и депозиран в Хербариума на Научния институт на Университета Мохамед V – Рабат – Мароко. A. baetica корени бяха измити с вода, изсушени при стайна температура и смлени на фин прах с помощта на електрически миксер.

2.2. Приготвяне на воден екстракт

Водният екстракт от A. baetica е приготвен по стандартния традиционен метод, описан в литературата [13]. Прахът от корени първо се вари в продължение на 20 минути при 100 ° С. След това получената смес се охлажда при стайна температура и след това се центрофугира и супернатантата се филтрира с помощта на филтърна хартия Whatman. Филтратът се концентрира в ротационен вакуумен изпарител. Суровият екстракт, възстановен ежедневно в дестилирана вода за крайни концентрации, необходими за перорално приложение [14].

2.3. Предварителен качествен фитохимичен скрининг

Растителният материал е бил подложен на качествен фитохимичен скрининг, за да се определят качествено някои видове заинтересовани фитоорганични съставки, които са отговорни за биологичните дейности, алкалоиди, флавоноиди, полифеноли, антрахинони, сапонини, танини, стероли и терпени, които са били основните бузи групи, използващи стандартни методи.

2.4. Животински материал

Възрастни швейцарски мишки албиноси с тегло приблизително 25 g са използвани както за остра, така и за подостра токсичност; мишките са закупени от животинската колония на Института Пастьор (Казабланка, Мароко). Всички животни бяха държани в полипропиленови клетки. Животните се аклиматизират за една седмица при лабораторни условия на редовни цикли светлина/тъмнина (12/12 часа) и температура (24 ± 2 ° С). Животните имаха свободен достъп до чешмяна вода и нормална диета с гранули [15].

2.5. Изследване на острата токсичност

Общо 24 мъжки възрастни мишки бяха разделени на случаен принцип в 4 експериментални групи от по 6 мишки всяка; животните бяха групирани според избрани дози растителен екстракт, една контролна група и три обработки. След гладуване през нощта, водният екстракт от корените на растенията се прилага на всяка третираща група при единични дози от 1, 2 и 4 mg/kg телесно тегло; към момента, в който контролната група получи еквивалентен обем дестилирана вода (носител). След лечението мишките се наблюдават индивидуално за клинични симптоми, смъртност и промени в общото поведение през периода на лечение [16]. Това проучване е проведено съгласно Насоки № 425 на Организацията за икономическо сътрудничество и развитие (ОИСР) [17].

2.6. Изследване на подостра токсичност

Проучването за подостра токсичност е извършено съгласно Насоки № 407 на Организацията за икономическо сътрудничество и развитие (OECD) [18]. Общо 24 мъжки възрастни мишки бяха произволно разделени в 4 групи от 6 мишки на група за всяка; мишките бяха групирани според избрани дози растителен екстракт, избрани за изпитване, една контролна група и три обработки. Животните в третирани групи са получавали многократно B. dioica екстракт от корен в дози 1, 1,5 и 2 mg/kg/ден в продължение на 28 дни; към момента, в който контролната група получи еквивалентен обем дестилирана вода (носител). По време на периода на лечение теглото на животните се измерва веднъж седмично. Животните също са наблюдавани за признаци на токсичност, смъртност, промени в общото поведение и промени във външния вид [19].

2.7. Биохимично изследване

На 28-ия ден всички оцелели животни бяха лишени от храна за една нощ и жертвани за събиране на кръв. Хепариновите епруветки, съдържащи събрана кръвна проба, се центрофугират при 6000 rpm при 4 ° C в продължение на 20 минути, за да се получи серумът. Измерването беше извършено съгласно метода, описан от Taj et al. (2014) [20], с помощта на автоматизиран анализатор (roche cobas mira plus, Швейцария). Параметрите на клиничната биохимия включват аспартат аминотрансфераза (AST), аланин аминотрансфераза (ALT), лактат дехидрогеназа (LDH), урея и креатинин.

2.8. Хистопатологична оценка

В края на периода на лечение основните органи (черен дроб и бъбреци) бяха отстранени за хистопатологично изследване. Органите бяха внимателно фиксирани в 10% буфериран формалин (рН 7.4). След фиксирането пробите от тъкани се дехидратират в степенувана серия етанол (70–100%). След организирано изрязване и влагане на парафин, пробите от тъкани се оцветяват с хематоксилин и еозин (H&E) преди микроскопско изследване. Патологичното изследване на чернодробна и бъбречна тъкан се извършва от патолог с помощта на светлинен микроскоп. Микроскопските характеристики на изследваните органи на третирани групи бяха сравнени с контролната група [21].

2.9. Статистически анализ

Всички количествени данни са изразени като средни стойности ± SD (стандартно отклонение). Статистическата значимост между средствата за контрол и лекуваните групи се определя от еднопосочен ANOVA, използвайки софтуера GraphPad Prism 7. Средните стойности се сравняват по двойки, използвайки тест на Tukey и разликите се считат за статистически значими при р по-малко от 0,05.

3. Резултати

3.1. Качествен фитохимичен скрининг

Констатациите от предварителния качествен фитохимичен скрининг на A. baetica корени са показани в Таблица 1; те разкриха наличието на флавоноиди, полифеноли, алкалоиди, танини и сапонини и липсата на антрахинон, стероли и терпени.

3.2. Остра токсичност

По време на проучването за остра токсичност не се наблюдава смъртност или признаци на токсичност при мишки, лекувани с доза по-малка от 4 g/kg; мишките се характеризират само с ускорено бягане около 3 до 5 минути. Лечението с доза от 4g/kg обаче е отговорно за задух, необичайно движение, хипоактивност, тенденция към задълбочаване и нежно, слюноотделяне, липса на апетит, летаргия, реверсивно отражение, случайни конвулсии и 16% от смъртните случаи.

3.3. Подостра токсичност

Общото поведение на мишките и признаците на токсичност са наблюдавани, като се има предвид смъртността през 28-те дни на хранене с водния екстракт; по време на целия период на дозиране не са забелязани видими токсични ефекти при групи, лекувани с 1 и 1,5 g/kg/ден. От втората седмица на лечението мишките, лекувани с 2g/kg/ден, представляват анормално движение, атаксия, анорексия, хипоактивност и депресия.

3.3.1. Ефект на водния екстракт върху теглото на мишките по време на периода на лечение

По време на периода на лечение не забелязахме значителна промяна в теглото на третираните мишки с 1 и 1,5 g/kg/ден телесно тегло (група А и В) в сравнение с контролната група (р> 0,05). Това леко отклонение в теглото може да се дължи на нервността и стреса на животните по време и след тампон. От друга страна, лекуваните мишки с доза 2 g/kg/ден (група С) причиняват загуба на тегло от втората седмица на лечението, която става значима след 20 и 28 дни лечение (p

3.3.2. Ефект на водния екстракт върху биохимичните параметри

Измерват се някои от биохимичните маркери на чернодробната функция като аланин аминотрансфераза (ALT), аспартат аминотрансфераза (AST) и бъбречна функция като урея, креатинин и лактат дехидрогеназа (LDH) като повсеместен ензим. Резултатите са представени на фигура 2.


По отношение на чернодробните маркери, биохимичните резултати показват значително увеличение на AST, дозиран в група С (2 g/kg/ден) в сравнение с регистрираното в контролната група (p 0,05). по отношение на ALT трансаминазите има регистрирано незначително увеличение в групи А и В, лекувани съответно с 1 и 1,5 g/kg/ден в сравнение с контролната група; междувременно отбелязваме значително увеличение в група С (2 g/kg/ден) (p 0,05). По отношение на вездесъщия ензим (LDH), не регистрирахме значимо увеличение в групи А и В, третирани съответно с 1 g/kg/ден и 1,5 g/kg/ден, в сравнение с контролната група (p> 0,05). Въпреки това, значително увеличение се наблюдава в група С, лекувани с 2 g/kg/ден (стр
а)
б)
(° С)
(д)

(A) Бъбречна некроза, (B) кортикална некроза и (C) минимален възпалителен инфилтрат.

3.3.5. Черен дроб

Микроскопското наблюдение показва, че не са настъпили забележителни хистопатологични промени в черния дроб на третирани групи с дози от 1 и 1,5 g/kg/ден; от друга страна, бъбречната тъкан от група С (2g/kg/ден) е описана чрез възпалителен инфилтрат, чернодробна некроза и чернодробна холестаза; основните резултати са обобщени на Фигура 4.

(A) Възпалителен инфилтрат и чернодробна некроза, (B) чернодробна некроза и (C) минимален възпалителен инфилтрат.

4. Дискусия

Билковите лекарства се оценяват до голяма степен от обществеността, защото се смята, че нямат странични ефекти поради естествения им произход и често се разглеждат като безопасни хранителни добавки, а не като лекарства. Лечебните растения често се предписват самостоятелно от билкар без контрол и преглед по отношение на дозировката, начина и честотата на приложение. В действителност химикалите в лечебното растение може да са натуралистични за самото растение, но те не са натуралистични за човешкото тяло. Наистина всяко химично съединение с терапевтичен ефект има възможност да бъде предписано погрешно или предозирано.

Фитохимичният профил на растителния екстракт разкрива, че наличието на алкалоиди, полифеноли, флавоноиди, танини и сапонини може да бъде отговорното съединение за токсичния ефект на изследваното растение. Според резултатите от остра токсичност степента на смъртност е оценена на 16% поради най-високата доза фураж (4g/kg); като се има предвид мащаба на Viala (1998) [22], водният екстракт от отвара от корени може да не е или много малко токсичен [23]. От друга страна, няма връзка между LD50 и съдържанието на аристолохични киселини, регистрирани в острата токсичност на органичния екстракт от Aristolochia manshuriensis както се съобщава в литературата [23]. Следователно, тези резултати предполагат, че други компоненти в екстракта могат да доминират в острата токсичност.

В условията на остра и подостра токсичност на отвара от корени на A. baetica, наблюдаваните клинични признаци като хипоактивност и загуба на тегло могат да бъдат свързани с липса на апетит [6], летаргия, слюноотделяне и анорексия, което може да се отдаде на свойствата на изследваното растение [24]; изброените припадъци ни показаха вероятния невротоксичен ефект на отвара от корени на A. baetica [25]. Нашите открития бяха сравнени с тези, докладвани в проучването за подостра токсичност на A. fructus [19], в която се съобщава, че животните се хранят с 22,2 g/kg растителен екстракт от A. fructus са били засегнати от явление, конвулсии, реверсивно отражение и задух, слаба и груба коса и затварянето на птозата.

Като се вземе предвид изобилието от възпалителен инфилтрат в два изследвани органа и особено в околните лезии, хистопатологичните резултати, записани по време на тази работа, могат да се отдадат на имуномодулиращите свойства на екстракта от корени на A. baetica което може да предизвика автоимунен отговор при токсичните лезии [29]. Всъщност няколко проучвания показват, че поглъщането на лечебни растения, включително род Aristolochia, може да бъде отговорно за тежко бъбречно увреждане, включително бъбречна интерстициална фиброза [30, 31]. трябва да бъде отбелязано че A. baetica и 31 сродни вида са признати да съдържат аристолохинови киселини [5].

5. Заключение

Според резултатите от остра токсичност, докладвани в тази работа, водният екстракт от A. baetica беше малко токсичен; междувременно същият екстракт показва висока токсичност върху серумните параметри и хистологичните тъкани, когато се поглъща продължително време в условията на субакутна токсичност. Имайки предвид резултата от това проучване, трябва да обърнем повече внимание на биологичното разнообразие на растенията за контрол на безопасността

Наличност на данни

Конфликт на интереси

Авторите декларират, че няма конфликт на интереси.

Благодарности

Авторите благодарят на персонала на Специализирания патологичен център (Casapath) за техния принос.

Препратки