Ефект на различни WAT маси от затлъстели мишки върху морфологичните промени на колониите на MDA-MB-231 клетки в 3D култура. (а) Представителни изображения на MDA-MB-231 клетки, отгледани в 3D култура със или без 200 mg или 800 mg затлъстяла подкожна или висцерална среда на мастна тъкан (CM); скална лента = 100 цМ. (б) Общите проценти на структурни форми са показани като средно ± SD и са изчислени от шест биологични повторения. Цялостната значимост на дела на формите на колониите между групите беше оценена чрез χ2 анализ, **** p a, b, c p 1,2,3 p α p> 0,05 за кръгли/масоподобни.

Ефект на различни WAT маси от затлъстели мишки върху експресията на виментин и CD24 протеин в клетки MDA-MB-231. (а) Представителни изображения на клетки MDA-MB-231, култивирани със или без 200 mg или 800 mg затлъстяване подкожно или висцерално WAT-CM и оцветени заедно с анти-виментин, анти-CD24 и DAPI; скала = 100 µm. (b) и (c) са относителната експресия на съответните маркери, средно ± SEM (n = 6 биологични повторения). Средната експресия на протеин от пет изображения на реплика се нормализира до DAPI и се анализира спрямо контролните култури. Не е установено, че групите се различават значително от теста на Фридман.

Ефект на различни WAT маси от затлъстели мишки върху епителната експресия на биомаркер в клетки MDA-MB-231. (а) Представителни изображения на клетки MDA-MB-231, култивирани със или без 200 mg или 800 mg затлъстяване подкожно или висцерално WAT-CM и оцветени заедно с анти-Е-кадхерин, анти-клаудин-7 и DAPI; скала = 100 µm. (b) и (c) са относителната експресия на съответните маркери, средно ± SEM (n = 6 биологични повторения). Средната експресия на протеин от пет изображения на реплика се нормализира до DAPI и се анализира спрямо контролните култури. Не е установено, че групите се различават значително от теста на Фридман.

Log2-трансформирани съотношения на експресия на Е-кадхерин и виментин демонстрират хибриден фенотип в третирани с WAT-CM клетки MAD-MB-231. Log2-трансформираното съотношение E-кадхерин/виментин се определя, като се използват данните за имунофлуоресценцията на MDA-MB-231 клетки, третирани със или без WAT-CM в 3D култура. Клетките, които имат морфология на звездни колонии и съотношение E-cad/vim 0, се считат за епителни. Клетките със смесена мезенхимна и епителна морфология на колониите и несъответстващо съотношение Е-кадхерин/виментин се считат за хибридни.

Схематично представяне на експерименталния дизайн. Слаби или затлъстели женски мишки C57BL/6 бяха евтаназирани и 200, 400 или 800 mg подкожно и висцерално WAT бяха събрани и смлени на по-малки тъканни фрагменти. Смляните тъканни фрагменти се вграждат в Matrigel и се култивират ex vivo, за да се генерира WAT-CM. След това клетките MDA-MB-231 се култивират в 3D със или без WAT-CM в продължение на пет дни. На петия ден клетките бяха фиксирани с параформалдехид и оцветени за имунофлуоресцентна конфокална микроскопия.

Резюме

ijms

Ефект на различни WAT маси от затлъстели мишки върху морфологичните промени на колониите на MDA-MB-231 клетки в 3D култура. (а) Представителни изображения на клетки MDA-MB-231, отгледани в 3D култура със или без 200 mg или 800 mg затлъстяла подкожна или висцерална среда на мастна тъкан (CM); скална лента = 100 цМ. (б) Общите проценти на структурни форми са показани като средно ± SD и са изчислени от шест биологични повторения. Цялостната значимост на дела на формите на колониите между групите беше оценена чрез χ2 анализ, **** p a, b, c p 1,2,3 p α p> 0,05 за кръгли/масоподобни.

Ефект на различни WAT маси от затлъстели мишки върху експресията на виментин и CD24 протеин в клетки MDA-MB-231. (а) Представителни изображения на клетки MDA-MB-231, култивирани със или без 200 mg или 800 mg затлъстяване подкожно или висцерално WAT-CM и оцветени заедно с анти-виментин, анти-CD24 и DAPI; скала = 100 µm. (b) и (c) са относителната експресия на съответните маркери, средно ± SEM (n = 6 биологични повторения). Средната експресия на протеин от пет изображения на реплика се нормализира до DAPI и се анализира спрямо контролните култури. Не е установено, че групите се различават значително от теста на Фридман.

Ефект на различни WAT маси от затлъстели мишки върху епителната експресия на биомаркер в клетки MDA-MB-231. (а) Представителни изображения на клетки MDA-MB-231, култивирани със или без 200 mg или 800 mg затлъстяване подкожно или висцерално WAT-CM и оцветени заедно с анти-Е-кадхерин, анти-клаудин-7 и DAPI; скала = 100 µm. (b) и (c) са относителната експресия на съответните маркери, средно ± SEM (n = 6 биологични повторения). Средната експресия на протеин от пет изображения на реплика се нормализира до DAPI и се анализира спрямо контролните култури. Не е установено, че групите се различават значително от теста на Фридман.

Log2-трансформирани съотношения на експресия на Е-кадхерин и виментин демонстрират хибриден фенотип в третирани с WAT-CM клетки MAD-MB-231. Log2-трансформираното съотношение E-кадхерин/виментин се определя, като се използват данните за имунофлуоресценцията на MDA-MB-231 клетки, третирани със или без WAT-CM в 3D култура. Клетките, които имат морфология на звездни колонии и съотношение E-cad/vim 0, се считат за епителни. Клетките със смесени мезенхимни и епителни морфологии на колониите и несъответстващо съотношение Е-кадхерин/виментин се считат за хибридни.

Схематично представяне на експерименталния дизайн. Слаби или затлъстели женски мишки C57BL/6 бяха евтаназирани и 200, 400 или 800 mg подкожно и висцерално WAT бяха събрани и смлени на по-малки фрагменти от тъкани. Смляните тъканни фрагменти се вграждат в Matrigel и се култивират ex vivo, за да се генерира WAT-CM. След това клетките MDA-MB-231 се култивират в 3D със или без WAT-CM в продължение на пет дни. На петия ден клетките бяха фиксирани с параформалдехид и оцветени за имунофлуоресцентна конфокална микроскопия.