Принадлежност

  • 1 Immunologia Clinica e Virologia, Dipartimento di Medicina di Laboratorio, Azienda Ospedaliera Santa Maria degli Angeli, Порденоне, Италия.

Автори

Принадлежност

  • 1 Immunologia Clinica e Virologia, Dipartimento di Medicina di Laboratorio, Azienda Ospedaliera Santa Maria degli Angeli, Порденоне, Италия.

Резюме

Заден план: Излагането и контактът с ларви на пчелен молец (Galleria mellonella) (Gm) може да предизвика алергична реакция както при риболовците, така и при животновъдите. Описахме случая с любител рибар, който изпитва алергична реакция, използвайки Gm, но не използвайки термично обработен Gm (h-Gm) (мумии). Целта на това проучване беше да се демонстрира чрез експерименти за инхибиране на имуноблотинг и радиоалергосорбентен тест (RAST) загубата на алергенни епитопи в h-Gm екстракти.

mellonella

Методи: Ларвите на Galleria mellonella и h-Gm се хомогенизират и се екстрахират при 10% (w/v) в 0,5 М фосфатно буфериран физиологичен разтвор, pH 7,4, съдържащ 0,5% NaN (3) в продължение на 16 h при 4 градуса C. Екстракти от Gm и h-Gm се електрофорезират в 10% полиакриламиден предварително сглобен Nupage Bis-Tris гел при 180 mA в продължение на 1 h и отделените протеини се оцветяват с 0,1% Coomassie брилянтно синьо и се изчислява молекулното тегло. За откриване на имуноблотинг на алергенни компоненти, разтворените екстракти се прехвърлят върху нитроцелулозна мембрана и се инкубират със серума на пациента. Свързаният специфичен IgE се открива от конюгирана с пероксидаза анти-човешки IgE. Експериментите за инхибиране на RAST бяха проведени по метода на Ceska.

Резултати: Протеиновият профил на екстрактите Gm и h-Gm доведе до значително различен брой, интензивност и положение на лентите, което показва, че топлинната обработка променя химико-физичните характеристики на съдържанието на протеини. Екстрактът Gm показва силно оцветена лента при 73 kDa и повече от 20 компонента, вариращи от 12 до 133 kDa; h-Gm показа две основни ленти при 77 и 38 kDa и около 15 слаби ленти между 20 и 133 kDa, очевидно без никакво съответствие с лентите, присъстващи в екстракта на Gm. Имуноблотингът със серума на пациента демонстрира няколко ленти на реактивност с екстракт от Gm, вариращ от 20 до 100 kDa и без разпознаваеми ленти, а само дифузно намазване с h-Gm. Когато се използва в експеримент за инхибиране на RAST, екстрактът h-Gm демонстрира неспособност да се конкурира с Gm за свързване към IgE серума на пациента.

Заключения: Изглежда, че h-Gm губи алергенните епитопи и има две предимства за риболовците: да избягва нови възможни сенсибилизации, както и алергични симптоми при сенсибилизирани хора, без да пречи на техните умения и удовлетворение от риболовните им показатели.