Изследване на инхибитори с ниско и високо молекулно тегло по метода CTELS. (а) Теоретично предсказване на ефектите на blasticidin S (BLS) върху транслацията на FLUC и CTELS1, като се има предвид, че лекарството специфично инхибира терминацията. Когато съединението се добави към безклетъчната система, програмирана от FLUC (сини криви), то трябва да потисне неговата транслация поради инхибиране на освобождаването на пептиди, докато добавянето му към сместа с CTELS иРНК (червени криви) не трябва да влияе върху активността на луциферазата добив в началния етап, докато не бъдат завършени всички ензимни молекули, синтезирани от пионерски рибозоми; само след това транслацията на CTELS иРНК също трябва да бъде заключена, което води до плато в кривата. (b) Луциферазна активност, получена чрез транслация на затворени и полиаденилирани FLUC и CTELS1 иРНК в RRL. Показани са представителни криви на три независими експеримента. ( ° С ). Теоретично прогнозиране на ефектите на eRF1 (AGQ) върху транслацията на FLUC и CTELS1, като се има предвид, че протеинът специфично инхибира терминирането. (d) Резултати от експеримент със същите репортерни иРНК, както в (b) с добавяне на 25 ng/μL от eRF1 мутанта (пунктирани криви) или буфер (плътни криви).

Ефекти от съкращаването на 3 ′ UTR върху прекратяването на транслацията, както се разкрива от подхода CTELS. (а) Набор от затворени неполиаденилирани FLUC mRNA конструкции, използвани в експеримента. Не е показан същият набор от преписи CTELS2. (b - d) Луциферазна активност, получена чрез транслация на FLUC и CTELS2 иРНК в три различни безклетъчни системи: RRL (b), екстракт от Krebs-2 S30 (c) и хибридна RRL/Krebs-2 система (d) . Показани са представителни криви на поне три независими експеримента.

Ефекти от индуциращата последователност за четене върху скоростта на прекратяване на транслацията. Чифт репортерски иРНК (FLUC и CTELS2), носещи в 3 ′ края или 3 ′ UTR с изкуствената последователност (agcatc) 10 (3′UTR_60), структурата, получена от VEEV 3 ′ UTR, или не 3 ′ UTR изобщо (3′UTR_0), както и неспирната иРНК, бяха преведени в RRL (a) или хибридни RRL/Krebs-2 (b) безклетъчни системи. Показани са представителни криви на поне три независими експеримента.

Модел на потискане на глупости, предизвикано от забавяне и преждевременно прекратяване. (Отгоре) Редовно удължаване и прекратяване, което обикновено се случва по смисъл (зелени правоъгълници) и стоп кодони (съответно в червено). (Отдолу) рядък кодон (вляво) или контекст за насърчаване на четенето на стоп кодон (вдясно) причиняват временно спиране, което може да бъде разрешено по неподходящи начини поради свързване на рибозомни фактори на освобождаване с чувствителния кодон или супресорна тРНК към стоп кодон, водещ съответно до преждевременно прекратяване или разчитане. eEF1A е показан от тъмнозелената фигура, eRF1 – eRF3 комплексът от розовите и оранжевите.

Резюме

безклетъчна

Изследване на инхибитори с ниско и високо молекулно тегло по метода CTELS. (а) Теоретично предсказване на ефектите на blasticidin S (BLS) върху транслацията на FLUC и CTELS1, като се има предвид, че лекарството специфично инхибира терминацията. Когато съединението се добави към безклетъчната система, програмирана от FLUC (сини криви), то трябва да потисне неговото транслация поради инхибиране на освобождаването на пептиди, докато добавянето му към сместа с CTELS иРНК (червени криви) не трябва да влияе върху активността на луциферазата добив в началния етап, докато не бъдат завършени всички ензимни молекули, синтезирани от пионерски рибозоми; само след това транслацията на CTELS иРНК също трябва да бъде заключена, което води до плато в кривата. (b) Луциферазна активност, получена чрез транслация на затворени и полиаденилирани FLUC и CTELS1 иРНК в RRL. Показани са представителни криви на три независими експеримента. ( ° С ). Теоретично прогнозиране на ефектите на eRF1 (AGQ) върху транслацията на FLUC и CTELS1, като се има предвид, че протеинът специфично инхибира терминирането. (d) Резултати от експеримент със същите репортерни иРНК, както в (b) с добавяне на 25 ng/μL от eRF1 мутанта (пунктирани криви) или буфер (плътни криви).

Ефекти от съкращаването на 3 ′ UTR върху прекратяването на превода, както се разкрива от подхода CTELS. (а) Набор от затворени неполиаденилирани FLUC mRNA конструкции, използвани в експеримента. Не е показан същият набор от преписи CTELS2. (b - d) Луциферазна активност, получена чрез транслация на FLUC и CTELS2 иРНК в три различни безклетъчни системи: RRL (b), екстракт от Krebs-2 S30 (c) и хибридна RRL/Krebs-2 система (d) . Показани са представителни криви на поне три независими експеримента.

Ефекти от индуциращата последователност за четене върху скоростта на прекратяване на превода. Чифт репортерски иРНК (FLUC и CTELS2), носещи в 3 ′ края или 3 ′ UTR с изкуствената последователност (agcatc) 10 (3′UTR_60), структурата, получена от VEEV 3 ′ UTR, или не 3 ′ UTR изобщо (3′UTR_0), както и неспирната иРНК, бяха преведени в RRL (a) или хибридни RRL/Krebs-2 (b) безклетъчни системи. Показани са представителни криви на поне три независими експеримента.

Модел на потискане на глупости, предизвикано от забавяне и преждевременно прекратяване. (Отгоре) Редовно удължаване и прекратяване, което обикновено се случва по смисъл (зелени правоъгълници) и стоп кодони (съответно в червено). (Отдолу) рядък кодон (вляво) или контекст за насърчаване на четенето на стоп кодон (вдясно) причиняват временно спиране, което може да бъде разрешено по неподходящи начини поради свързване на рибозомни фактори на освобождаване с чувствителния кодон или супресорна тРНК към стоп кодон, водещ съответно до преждевременно прекратяване или разчитане. eEF1A е показан от тъмнозелената фигура, eRF1 – eRF3 комплексът от розовите и оранжевите.