Допринесе еднакво за тази работа с: Nuermaimaiti Tuersunjiang, John F. Odhiambo

програмите

Роли Концептуализация, официален анализ, разследване, методология, администриране на проекти, визуализация, писане - оригинален проект

Настоящ адрес: Катедра по микробиология и молекулярна генетика, Калифорнийският университет Ървайн, Ървайн, Калифорния, Съединени американски щати

Партньорски център за изследване на фетално програмиране, Департамент по животновъдство, Университет в Уайоминг, Ларами, Уайоминг, Съединени американски щати

Допринесе еднакво за тази работа с: Nuermaimaiti Tuersunjiang, John F. Odhiambo

Роли Куриране на данни, формален анализ, разследване, методология, администриране на проекти, визуализация, писане - оригинален проект, писане - преглед и редактиране

Партньорски център за изследване на фетално програмиране, Департамент по животновъдство, Университет в Уайоминг, Ларами, Уайоминг, Съединени американски щати

Партньорски център за изследване на фетално програмиране, Департамент по животновъдство, Университет в Уайоминг, Ларами, Уайоминг, Съединени американски щати

Роли Формален анализ, визуализация

Партньорски център за изследване на фетално програмиране, Департамент по животновъдство, Университет в Уайоминг, Ларами, Уайоминг, Съединени американски щати

Концептуализация на роли, придобиване на финансиране, писане - преглед и редактиране

Партньорски център за изследване на фетално програмиране, Департамент по животновъдство, Университет в Уайоминг, Ларами, Уайоминг, Съединени американски щати

Роли Концептуализация, куриране на данни, набиране на средства, разследване, администриране на проекти, писане - оригинален проект, писане - преглед и редактиране

Партньорски център за изследване на фетално програмиране, Департамент по животновъдство, Университет в Уайоминг, Ларами, Уайоминг, Съединени американски щати

  • Nuermaimaiti Tuersunjiang,
  • Джон Ф. Одиамбо,
  • Дезире Р. Шаса,
  • Ашли М. Смит,
  • Питър У. Натаниелс,
  • Стивън П. Форд

Фигури

Резюме

Екстракция на протеини и Western blotting

Протеинът се екстрахира чрез хомогенизиране

100 mg прахообразна хипофиза, дъгообразно ядро ​​на хипоталамуса и чернодробните тъкани в ледено студен лизисен буфер с помощта на политрон хомогенизатор. След това хомогенатите се центрофугират и супернатантите се смесват с 2 х стандартен SDS буфер за зареждане на проби и след това се варят при 95 ° С в продължение на 5 минути. Приблизително 50 μg протеинови екстракти бяха разделени в SDS-PAGE гелове и прехвърлени в нитроцелулозни мембрани за имуноблотинг с първични антитела за лептин, OB-Rb, GH освобождаващ хормон (GHRH), GH инхибиращ хормон (GHIH, соматостатин), GH рецептор ( GHR), IGF1, IGF-свързващ протеин 3 (IGFBP3), IGF1 рецептор (IGF1R), 11 β хидроксистероид дехидрогеназа (HSD) 1, 11-β HSD2, хексоза-6-фосфат дехидрогеназа (H6PD) и β-актин. Мембраните се инкубират с подходящи вторични антитела и след това се визуализират с помощта на засилена хемилуминесценция (Amersham Biosciences) и излагане на рентгенов филм. Плътността на целевата протеинова лента беше анализирана чрез софтуера ImageQuant TL (Amersham Biosciences) и нормализирана в съответствие с плътността на β-актина, както е описано по-рано [30].

Статистически анализ

Повтарящите се променливи бяха анализирани, използвайки PROC MIXED процедури на SAS (SAS Institute Inc., Cary, NC) с повтарящи се мерки, включително анализ на лептин, ACTH и кортизол от различните времеви точки. Моделът съдържаше време, лечение и тяхното взаимодействие за многократни измервания. PROC CORR се използва за корелационен анализ на ACTH и кортизол. Различията в неповторените променливи бяха определени с помощта на дисперсионен анализ чрез PROC GLM в SAS с третиране в изявлението на модела. Разликите се считат за значими при P≤0.05, тенденции при P≤0.10. Данните са представени като средно ± SEM.

Резултати

Плазмен ACTH и кортизол и чернодробна експресия на ензими, които регулират метаболизма на кортизола

Плазмените концентрации на ACTH са сходни между CON и MO потомството както в началото, така и в края на изпитването за хранене (Фиг. 1А). Въпреки това, беше установено значително увеличение (P 0.10), установено при аутопсия.

a, b, c Средства ± SEM с различни индекси се различават (P Фигура 2. Експресия на гени и протеини на 11βHSD1 (A, C), 11βHSD2 (B, D) и експресия на протеин на H6PD (E) в черния дроб на CON ( отворени решетки, n = 6) и MO (плътни решетки; n = 6) възрастни мъжки потомци F1.

# Средства ± SEM са склонни да се различават (P Фиг. 3. Локализация на GH и лептинов рецептор (OB-Rb) върху парафинови вградени хипофизни секции с помощта на двойно маркирана имунофлуоресцентна микроскопия.

GH (зелени) положителни клетки (A); OB-Rb (червени) положителни клетки (B); и обединени изображения за GH и OB-Rb експресиращи клетки (C), показващи ко-локализация в соматотропи.

Изразяване на компонентите и регулаторите на оста GH/IGF1

Беше определена протеинова експресия на хипоталамусни GHRH и GHIH пептиди и не бяха открити значителни разлики (P> 0.10) в експресията на протеин в нито един от тези пептиди в CON и MO възрастни потомци. Освен това съотношението на GHRH/GHIH не се различава между MO и CON групите (данните не са показани). Въпреки това, както mRNA, така и протеиновата експресия на OB-Rb в хипофизата бяха намалени (P 0,05) бяха открити в чернодробна IGFBP3 mRNA или експресия на протеин (Фигури 4E & 5E).

* Средствата ± SEM се различават, (P Фиг. 5. Протеинова експресия на OB-Rb (A) и GH (B) в хипофизата и GHR (C), IGF1 (D) и IGFBP3 (E) в чернодробни проби от CON (отворени решетки, n = 6) и MO (плътни решетки; n = 6) възрастни мъжки потомци F1.

Тематични области

За повече информация относно предметните области на PLOS кликнете тук.

Искаме вашите отзиви. Имат ли смисъл тези предметни области за тази статия? Щракнете върху целта до неправилната тема и ни уведомете. Благодаря за вашата помощ!

Е тематичната област "Хормон на растежа" приложим за тази статия? да не

Благодаря за отзивите ви.

Е тематичната област "Лептин" приложим за тази статия? да не

Благодаря за отзивите ви.

Е тематичната област "Хипофизната жлеза" приложим за тази статия? да не

Благодаря за отзивите ви.

Е тематичната област "Кортизол" приложим за тази статия? да не

Благодаря за отзивите ви.

Е тематичната област "Затлъстяване" приложим за тази статия? да не

Благодаря за отзивите ви.

Е тематичната област "Протеинова експресия" приложим за тази статия? да не

Благодаря за отзивите ви.

Е тематичната област "Секрет" приложим за тази статия? да не

Благодаря за отзивите ви.

Е тематичната област "Мастна тъкан" приложим за тази статия? да не