•  

Супанимит Теекачунхатеан

1 Катедра по фармакология, Медицински факултет, Университет Чианг Май, Чианг Май 50200, Тайланд

2 Център по тайландска традиционна и допълнителна медицина, Медицински факултет, Университет Чианг Май, Чианг Май 50200, Тайланд

Нисануч Тосри

3 Болница Phisaleeh, Nakhon Sawan 60220, Тайланд

Noppamas Rojanasthien

1 Катедра по фармакология, Медицински факултет, Университет Чианг Май, Чианг Май 50200, Тайланд

Somdet Srichairatanakool

4 Катедра по биохимия, Медицински факултет, Университет Чианг Май, Чианг Май 50200, Тайланд

Чайчан Сангди

1 Катедра по фармакология, Медицински факултет, Университет Чианг Май, Чианг Май 50200, Тайланд

Резюме

1. Въведение

2. Материали и методи

2.1. Уча дизайн

Настоящото проучване беше подпроучване, свързано с разследването, което е докладвано другаде от Teekachunhatean et al. [9]. Това проучване беше открито, рандомизирано двуфазно кръстосано проучване. Единадесет здрави субекти бяха разпределени на случаен принцип да получат или 500 ml кафе клизма за 10 минути, или да консумират 180 ml кафе напитка. След период на измиване от поне 10 дни, всички субекти бяха сменени, за да получат алтернативна процедура за кафе. Субектите бяха рандомизирани от компютърно генериран списък. Последователността на разпределението беше приложена чрез поставяне на картите за разпределение в непрозрачни, запечатани и телбодирани пликове, за да се запази прикриването. Пликовете бяха номерирани предварително и се отваряха последователно само след като включените субекти завършиха всички базови оценки и беше време да се определи коя процедура за кафе трябва да се приложи първо в дадена последователност.

2.2. Субекти

2.3. Кълнене на кафе и процедура за клизма на кафе

Кафеният разтвор, използван в процедурата за клизма, се приготвя чрез смесване на 4 g фино смлени кафени зърна (VS кафе, произведено от V.S. coffee, Тайланд) със 100 ml пречистена вода. Разтворът се вари при 100 ° С за 15 минути (мин) и след това се оставя да къкри при 60 ° С за около 15 минути. След това разтворът се филтрира с помощта на фино сито, като общият обем се регулира до 500 ml и след това се оставя да се охлади до 37 ° С.

Устройствата за клизма за кафе, използвани в това проучване, бяха еднократният търговски комплект (комплект за почистваща клизма, произведен в Мексико, внесен от Thanyaphu Co. Ltd., Тайланд), състоящ се от пластмасова дюза, свързана чрез тръба към пластмасова торбичка, която ще съдържа кафе течност за клизма. Дюзата е смазана с 2 капки органичен зехтин и след това е поставена на 2 инча в ануса, докато субектът е легнал от лявата си страна, с крака, свити в корема. Височината на леглото беше 3 фута над пода, докато чантата за клизма беше окачена на 5 фута над пода. Кафеният разтвор в клизма се влива напълно в рамките на 5–10 минути. Субектът е помолен да задържи течността за кафе клизма за 10 минути. През този период субектът е инструктиран да промени легналото си положение в дясната страна за 3,5 минути и след това се превключва обратно в лявата страна за 3,5 минути и накрая в легнало положение за 3 минути преди евакуация. Процедурата за клизма е извършена в отделението по клинична фармакология, Катедра по фармакология, Медицински факултет, Университет Чианг Май, със съдействието на медицинската сестра.

2.4. Устна консумация на кафе

Кафето, използвано за орална консумация в това проучване, е наличната в търговската мрежа готова за пиене кафе напитка (разтворимо кафе с мляко и захар), Red Bull Coffee, произведена от TC Pharmaceutical Industry Co., Ltd. Нетният обем на 1 порция е 180 мл. Всеки субект е инструктиран да консумира цялата порция кафе в рамките на 1 минута, последвана от 100 ml вода.

2.5. Администриране на кафе клизма и перорална консумация на кафе

Субектите бяха помолени да посетят звеното по клинична фармакология, Катедра по фармакология, Медицински факултет, Университет Чианг Май в дните, посочени в протокола. Те бяха разпределени на случаен принцип да получат или кафе клизма, или да консумират устно кафената напитка. Кръвни проби бяха събрани в различни конкретни моменти от време (виж по-долу). След вземане на кръвна проба 12 часа (h) след дозата, субектите са били изписани от отделението по клинична фармакология. След период на измиване от поне 10 дни, субектите са преминали към втората фаза, получавайки алтернативно приготвяне на кафе, и кръвните проби са събрани по същия начин. По време на 2-те фази на изследване бяха сервирани еднакви ястия и течности. Всички субекти трябваше да се въздържат от пиене на напитки, съдържащи кофеин (с изключение на тези, дадени в това проучване) и алкохол от момента на скрининга до края на изследването. След започване на всяка процедура за кафе, субектите продължават да гладуват, докато водата и обядът се сервират съответно 2 часа и 6 часа след това.

2.6. Вземане на кръвни проби за определяне на фармакокинетичните параметри на кофеина

Във всяка фаза на изследване субектите са гладували през нощта в продължение на поне 8 часа. Взети са проби от венозна кръв чрез хепаринизиран IV катетър, поставен във вената на предмишницата. Петнадесет мл кръвни проби са взети от всеки субект преди прилагане или на кафе клизма, или на консумация на орално кафе и отново 10, 20, 30, 40 и 60 минути и 1,5, 2, 4, 8 и 12 часа след всеки процедура. Епруветките за събиране на кръв се центрофугират при 1200 rpm в продължение на 15 минути и плазмата се отделя и замразява при -80 ° C за по-късен анализ.

2.7. Определяне на концентрациите на кофеин в разтвори за кафе

Анализът на съдържанието на кофеин е модифициран от метода на високоефективната течна хроматография (HPLC) и условията, съобщени по-рано другаде [18, 19]. Един мл от всеки кафеен препарат (или разтвор за клизма, или готова за пиене кафе напитка) се разрежда 10 пъти с 10% метанол и след това се добавя с 10 μL вътрешен стандарт (IS, 100 μg/ml ацетаминофен). Пет uL пробен разтвор се инжектират в HPLC системата. Хроматографското разделяне се извършва на 5 μm C18, 100 × 4.6 i.d. аналитични и охранителни колони. Условието за хроматография се състои от две подвижни фази. Използваната подвижна фаза А е 1 mmol/L перхлорна киселина/изопропанол (1,000/56, v/v) /2,2 mmol/L натриев додецил сулфат, който се изпомпва през колоната при скорост на потока от 1 mL/min за 7 минути. Използваната подвижна фаза В е 1 mmol/L перхлорна киселина/изопропанол (1,000/88, v/v)/3 mmol/L натриев додецил сулфат и се изпомпва през колоната при скорост на потока 1 mL/min за 8 минути, и аналитите се откриват чрез ултравиолетова абсорбция при 274 nm, докато колоната се поддържа при 40 ° С. Съдържанието на кофеин в неизвестните проби беше определено с помощта на калибрационна крива на съотношенията на пикови височини на кофеин и IS спрямо съответните концентрации на кофеин (2 500–100 000 ng/ml) с използване на линейна регресия.

2.8. Определяне на концентрациите на кофеин в плазмата

Анализът е модифициран от процедурата за утаяване на протеини, описана по-рано другаде [18, 20]. Двеста и петдесет μL проба от плазма се добавя с 10 μL IS и след това се депротеинира чрез смесване на плазмената проба с 380 μL ацетонитрил и се държи при стайна температура в продължение на 20 минути. След вихрово смесване, протеинът се отстранява чрез центрофугиране при 14 000 g (стайна температура) за 5 минути. Аликвотна част от супернатантата (600 μL) се отстранява и се изпарява, за да се суши под вакуум в продължение на 2 часа при 60 ° С. Остатъкът се възстановява с 50 μL подвижна фаза В и след това се върти вихрово за 20 секунди. Пет μL от този разтвор се инжектират в HPLC системата, както е описано по-горе. Хроматограма на плазма, съдържаща кофеин и IS е представена на фигура 1. Плазмените концентрации на кофеин се определят чрез интерполиране на пиковите съотношения на височина на кофеин и IS спрямо съответните концентрации на кофеин (0,1–4 μg/ml).

след

Хроматограма на плазмена проба, съдържаща 4,00 μg/mL вътрешен стандарт (IS, време на задържане = 4,217 минути) и 4,00 μg/mL кофеин (време на задържане = 7,082 минути).

Процентът на вариационен коефициент (% CV) на дневната прецизност за плазмените концентрации на кофеин варира от 1.69 до 3.91%, докато процентът на CV на междудневната прецизност варира от 4.47 до 5.78%. Отклонението на вътредневния и междудневния анализ за плазмените концентрации на кофеин варира от -8,45 до 2,00% и -3,43 до 5,52%, съответно. Долната граница на количественото определяне (LLOQ) е 0,1 μg/mL. Средното възстановяване на кофеина от процедурата за определяне е 96,97%.

2.9. Определяне на кръвното налягане и сърдечната честота

Кръвното налягане и сърдечната честота са измервани с помощта на цифров апарат за кръвно налягане Omron (IntelliSense, Model HEM-711, Omron Healthcare, Inc.) преди или кафеената клизма, или оралната консумация на кафе и отново на 10, 20, 30, 40 и 60 минути и 1,5, 2, 4, 8 и 12 часа след двете процедури за кафе. Субектите са инструктирани да поддържат спокойна, полулегнала позиция за 5-минутен период на стабилизиране преди всяко измерване.

2.10. Анализ на данните и статистически методи

Всички статистически анализи бяха извършени с помощта на пакета SPSS за Windows и StatsDirect 2.5.6. Всички данни бяха сравнени с двустранен тест. Разликите се считат за статистически значими при Р2, съответно. Средните стойности на систоличното кръвно налягане, диастолното кръвно налягане и сърдечната честота (HR) са съответно 112,40 ± 6,87 mm Hg, 73,00 ± 8,52 mm Hg и 69,20 ± 12,62 удара/мин, съответно.

Шест порции от всеки разтвор на кафе са измерени за съдържание на кофеин. Средното съдържание на кофеин е 107,24 ± 2,22 mg/500 ml за разтвор на клизма за кафе и 96,34 ± 1,39 mg/180 ml за напитка от кафе, готова за пиене. Тези средни стойности на съдържанието на кофеин не се различават статистически между разтвора за кафе, приготвен за клизма, и готовата за пиене кафе напитка (P = 0,972).

Профилите на средната концентрация на кофеин в плазмата и времето и фармакокинетичните параметри на кофеина (C max A, AUC0–12, AUC0 – ∞, T max⁡ и t 1/2) след еднократно приложение на кафе клизма и перорална консумация на кафе са показани съответно на Фигура 2 и Таблица 1. Средните стойности на C max⁡, AUC0–12 и AUC0 – ∞ на кофеина, получен от кафеената клизма, са около 3,5 пъти значително по-ниски от тези на консумираното през устата кафе, въпреки че имат малко, но статистически по-бърз T max⁡. Независимо от това, средното t 1/2 кофеин, получен след двете процедури за кафе, не се различава статистически.

Средни криви на концентрация на плазмен кофеин-време след еднократно приложение на кафе клизма (CE) или орална консумация на кафе (CC) (n = 11). * Статистически значимо между групите (P Richards DG, McMillin DL, Mein EA, Nelson CD. Напояване на дебелото черво: преглед на историческите противоречия и потенциала за неблагоприятни ефекти. Journal of Alternative and Complementary Medicine. 2006; 12 (4): 389 –393. [PubMed] [Google Scholar]