Ерик Лончи-Имагоу

1 Лаборатория за молекулярна медицина и метаболизъм, Биотехнологичен център, Университет Яунде I, Яунде, Камерун

пъдпъдъчи

Агата Таня

2 Катедра по обществено здраве, Факултет по медицина и биомедицински науки, Университет на Яунде I, Яунде, Камерун

Карине Чанку

3 Лаборатория по хранене и хранителна биохимия, Факултет на науките, Университет в Яунде I, Яунде, Камерун

Джудит Нгонди

3 Лаборатория по хранене и хранителна биохимия, Факултет на науките, Университет в Яунде I, Яунде, Камерун

Юлий Обен

3 Лаборатория по хранене и хранителна биохимия, Факултет на науките, Университет в Яунде I, Яунде, Камерун

Резюме

Заден план

Пъдпъдъчите яйца като хранителен продукт наскоро бяха въведени в диетата на някои камерунци. Тези яйца се продават на местните пазари, но с много необосновани здравни претенции. Едно от твърденията е, че пъдпъдъчи яйца могат да намалят нивата на кръвната захар при диабетици. Следователно беше необходимо да се оцени ефектът от консумацията на пъдпъдъчи яйца върху нивата на кръвната захар, липидните профили и параметрите на оксидативен стрес при индуцирани от диабет плъхове.

Методи

Двадесет плъха Wistar със средно тегло 250 g бяха разделени на четири групи от по пет плъха. Група 1 се състои от плъхове с нормална кръвна глюкоза, а останалите три групи (2, 3 и 4) се състоят от индуцирани от диабет плъхове, постигнати чрез интравенозно инжектиране на стрептозотоцин. В продължение на 16 дни плъхове от групи 1 и 2 получават дестилирана вода; и плъховете в групи 3 и 4 получават съответно пъдпъдъчи и пилешки яйца с гастроезофагеална сонда в доза от 1 ml/200 g телесно тегло. Нивата на кръвната захар на гладно се определят във всички групи на 1-ви, 7-ми, 14-и и 17-ия ден след индукция на диабет. На 17-ия ден гладните плъхове бяха жертвани и проби от кръв и черен дроб бяха събрани за биохимични анализи.

Резултати

За 17 дни консумацията на пъдпъдъчи и пилешки яйца няма ефект върху нивата на кръвната глюкоза при плъхове с диабет. Общите нива на холестерола са по-високи в групи 3 (75,59 mg/dL) и 4 (59,41 mg/dL) в сравнение с група 2 (55,67 mg/dl), въпреки че тези разлики не са значителни (всички p> 0,05). Нивата на триглицеридите са значително по-високи (p Ключови думи: диабет, хиперлипидемия, оксидативен стрес, пъдпъдъчи яйца, пилешки яйца

Разпространението на захарен диабет тип 2 (T2DM) се е увеличило в световен мащаб (1, 2), включително в Африка, където се очаква най-голямо пропорционално увеличение (90%) на броя на случаите на диабет до 2030 г. (3, 4). Заседналият начин на живот, затлъстяването и нездравословното диетично поведение са най-честите рискови фактори за T2DM (5). T2DM води до сериозни усложнения като нарушения на нервната система, бъбречни заболявания и очни патологии; по този начин неговото предотвратяване и лечение трябва да се считат за приоритет (6). Диетата се използва за профилактика и управление на T2DM. Стратегиите, използвани за управление на затлъстяването, включват използването на диети с високо съдържание на фибри, ниско съдържание на въглехидрати и ниско съдържание на мазнини (7, 8). Конвенционалното диетично и поведенческо лечение се провали при дългосрочно управление.

Методи

Управление на животните и етични съображения

В това проучване са използвани възрастни мъжки плъхове албиноси Wistar на възраст 12 седмици и средно тегло 250 g. Плъхове (n = 20) са закупени от дома за животни на Факултета по медицина и биомедицински науки към Университета на Яунде I, Камерун. Животните се поддържат при 25 ° C в стая с 12/12-часов цикъл светлина/тъмнина и имат свободен достъп до вода и храна. Изследването е одобрено от институционалната комисия по етични животни.

Пъдпъдъчи и пилешки яйца

За да дадем възможност за сравнително проучване върху различни групи плъхове, използвахме както пъдпъдъчи, така и пилешки яйца. И двата вида яйца са закупени от един и същи животновъд в квартала Biyem-Assi (Яунде-Камерун), за да се избегнат промени, свързани с качеството на храните, които могат да променят състава на яйцата (14).

Администриране на яйца

Всяка сутрин на всеки плъх се прилагат пъдпъдъчи и пилешки яйца с гастроезофагеална сонда в доза от 1 ml/200 g телесно тегло. Тази доза отразява дозата, използвана от повечето камерунци за тяхното лечение. Яйцето се счупи, въведе се в мензура и след това се хомогенизира с помощта на стъклена пръчка. Обемът на яйцата, който се дава на плъховете, се изтегля с градуирана спринцовка в гастроезофагеалната сонда за приложение върху плъховете.

Оценка на хранителните ефекти на пъдпъдъчи и пилешки яйца върху кръвна захар на индуцирани от диабет плъхове

Индукция на диабет при плъхове

Една интраперитонеална доза от 55 mg/kg стрептозотоцин (STZ; Sigma-Aldrich, Германия) е приложена за индуциране на диабет (15). След 72 часа плъхове с изразена хипергликемия (кръвна захар на гладно от 250 mg/dL) се считат за диабетици. Животните бяха разделени на четири групи от по пет плъха. Четирите групи бяха третирани, както следва:

GroupDescription
1Нормални/нелекувани плъхове (отрицателна контрола), получаващи дестилирана вода в доза от 1 ml/200 g BW.
2Диабетици/нелекувани плъхове (положителен контрол), получаващи дестилирана вода в доза 1 ml/200 g BW.
3Диабетици/лекувани плъхове, получаващи пъдпъдъчи яйца в доза 1 ml/200 g BW.
4Диабетици/лекувани плъхове, получаващи пилешки яйца в доза 1 ml/200 g BW.

Вземане на кръв

Определени са ефектите на пъдпъдъчи и пилешки яйца върху кръвната глюкоза, липидния профил и параметрите на оксидативен стрес на четирите групи плъхове. Група 1 се състои от плъхове с нормална кръвна глюкоза, а останалите три групи (2–4) се състоят от индуцирани от диабет плъхове чрез интравенозно инжектиране на STZ. В продължение на 16 дни групи 1 и 2 получават дестилирана вода; групи 3 и 4 получиха съответно пъдпъдъчи и пилешки яйца от гастроезофагеална сонда в доза от 1 mL/200 g BW. Плъховете са били на тези специфични лечения в продължение на 16 дни и са имали свободен достъп до вода и са били на същата диета. Нивата на кръвната захар на гладно се определят във всички групи на 1-ви, 7-ми, 14-и и 17-ия ден след индукция на диабет. На 17-ия ден гладните плъхове бяха умъртвени чрез югуларна венезия след лека хлороформна анестезия.

За всеки плъх кръв се събира в епруветки с етилендиаминтетраоцетна киселина и се оставя да се съсирва при стайна температура. След това плазмата се отделя от съсирека чрез центрофугиране при 1,126 g за 15 минути. Плазмата се събира в чисти бутилки и се съхранява при -20 ° C, докато се наложи. След дисекцията на животните органите се поставят върху лед и се обработват възможно най-бързо.

Приготвяне на чернодробни хомогенати: Приблизително 10% (w/v) тъканни хомогенати се приготвят в 10% фосфатно буфериран физиологичен разтвор (рН 6.4) с помощта на микрохомогенизатор (Physcotron, Niti-on Inc., Chiba, Япония). Супернатантът се получава от хомогената след центрофугиране при 3000 rpm в продължение на 15 минути. След това пробата се съхранява при -20 ° C, докато се използва за определяне на концентрацията на малондиалдехид (MDA), концентрацията на хидропероксиди и активността на каталазата.

Приготвяне на хемолизати на еритроцити: След центрофугиране на обща кръв, 100 µL пелети се пипетира в друга епруветка и след това се промива два пъти с 2 ml 0,9% NaCl и се центрофугира при 1,126 g за 10 минути при стайна температура. Хемолизатите се получават чрез добавяне на 2 ml дестилирана вода и се съхраняват при -20 ° C. Този хемолизат се използва за анализи на протеини и определяне на активността на каталазата.

Биохимични анализи

Плазмата се приготвя от кръвни проби, събрани от плъхове на 17-ия ден сутрин след пост от 12 часа през нощта. Глюкозата в плазмата се определя с помощта на глюкометър GlucoPlus ™. Общият холестерол и триглицеридите се измерват ензимно, като се използват стандартни ензимни комплекти (Sigma Diagnostics). Оксидативни стресови маркери като ниво на MDA, ниво на хидроксилен (OH) радикал и активност на каталазата също са измервани.

Оценка на ефекта на пъдпъдъчи и пилешки яйца върху липидния профил на индуцирани от диабет плъхове

Общият холестерол и триглицеридите в плазмата са оценени ензимно според Watson (16) и Fossati и Prencipe (17), съответно, чрез използване на търговски комплекти от Ran-dox, Ltd., Co. (UK).

Оценка на антиоксидантните свойства на пъдпъдъчи яйца при индуцирани от диабет плъхове

Общото съдържание на протеин беше оценено във всички събрани проби (хемолизат на еритроцити, плазма и хомогенати на черния дроб) с помощта на комплекта „общ протеин колориметричен тест Biuret“, комерсиализиран от Cypress Diagnostics.

Нивото на MDA се изчислява спектрофотометрично от тиобарбитурова киселина съгласно методи, описани от Wilbur et al. (18). Тиобарбитуровата киселина реагира с плазмен MDA, който се получава чрез хидролиза на липидни хидропероксиди, за да образува розово-червен оцветен комплекс с висока абсорбция при 532 nm. Резултатите са изразени като микромоли на литър. Този комплекс обикновено се определя количествено спрямо стандартите MDA, които се генерират от 1,1,3,3-тетраетоксипропан при същите условия на реакция.

Нивото на OH радикали е измерено в кръвната плазма и хомогенатите на черния дроб съгласно протокола, описан от Jiang et al. (19). Този метод се основава на принципа, че в кисела среда пероксидният йон окислява Fe 2+ във Fe 3+, който след това реагира с ксиленол оранжев, образувайки комплекс, който абсорбира при 560 nm.

Каталазната активност в хемолизатите и чернодробните хомогенати се анализира, както е описано по-рано от Sinha (20). Аликвотна част от водороден прекис (0,8 ml) се дозира в епруветка на Eppendorf. Прибавят се фосфатен буфер (1.0 mL) и (0.002%, v/v) разреден хомогенат/хемолизат (125 uL). Реакционната смес (0,5 ml) се разпределя в 5% дихроматен реагент (1,0 ml) и се разклаща енергично. Сместа се нагрява във водна баня Clifton за 10 минути и се оставя да се охлади. Абсорбцията при 570 nm беше взета с помощта на спектрофотометър (BioMate 3S UV-Visible, Thermo Scientific, Wohlen, Швейцария). Получената абсорбция се екстраполира от следната стандартна крива: y = 0,0028x + 0,0132. След това активността на каталазата се изразява като единици в минута на милиграм протеин: каталаза (единица/mg протеин) = (Abs/min × 30 000 единици)/(40 cm/M × mg протеин) × df, където df е коефициент на разреждане и Abs е абсорбция.

Статистически анализ

Статистическият анализ на резултатите беше извършен с помощта на SPSS 10.1 за Windows (SPSS, Чикаго, IL, САЩ). Резултатите са представени като средно ± стандартно отклонение. Сравнението беше направено с помощта на еднопосочен дисперсионен анализ, последван от многократен пост-хок тест на Дънкан. Стойност на p Фиг. 1. Прилагането на пъдпъдъчи и пилешки яйца в продължение на 16 дни при диабетични плъхове няма ефект върху кръвната глюкоза. След 7, 14 и 16 дни лечение няма значителни разлики в кръвната глюкоза между положителните контролни диабетни плъхове, получаващи дестилирана вода, и диабетични плъхове, лекувани с пъдпъдъчи и пилешки яйца (p> 0,05).