Резюме

ОБЕКТИВЕН-Ние се опитахме да определим ролята на смъртта на адипоцитите при индуцираното от затлъстяването възпаление на мастната тъкан (AT) и усложненията на затлъстяването.

адипоцитите

ПРОЕКТИРАНЕ И МЕТОДИ НА ИЗСЛЕДВАНИЯ -Мъжки мишки C57BL/6 са хранени с високомаслена диета в продължение на 20 седмици, за да предизвикат затлъстяване. На всеки 4 седмици инсулиновата резистентност се оценява чрез интраперитонеални тестове за толерантност към инсулин и се събират епидидимни (eAT) и ингвинални подкожни AT (iAT) и черен дроб за хистологични, имунохистохимични и генни експресивни анализи.

РЕЗУЛТАТИ—Честотата на смъртта на адипоцитите в eAT се увеличава от -ΔΔCt, използвайки циклофилин В като ендогенен контролен ген при мишки, хранени с LF диета в продължение на 1 седмица като „сравнител” (31). Гените и последователностите на праймерите са изброени в таблица 1.

Мерки за инсулинова резистентност.

Набързо (през нощта) серумен инсулин се измерва чрез ензимно-свързан имуносорбентен анализ, използвайки миши инсулин като стандарт (Crystal Chem). Провеждат се интраперитонеални тестове за толерантност към инсулин (ITT) на неанестезирани мишки на гладно в продължение на 4–6 часа сутрин. Измервания на глюкозата са получени от кръв от вени на цялата опашка, като се използва автоматизиран глюкометър на изходно ниво и 15, 30, 45, 60 и 90 минути след интраперитонеално инжектиране на човешки инсулин (0,75 mU/kg). Площта на глюкозата под кривата (AUC0–90) беше определена за кохорти, захранвани с HF и LF, и отчетената разлика (ΔAUC).

Биохуморални мерки.

Кръв се получава от гладни (за една нощ) мишки чрез сърдечна пункция. Серумният лептин, резистин, адипонектин и MCP-1 бяха измерени чрез ензимно-свързан имуносорбентен анализ (Lincoplex миши адипокин; Millipore Bioscience) и нестерифицирани мастни киселини (NEFA) бяха измерени с помощта на NEFA-C комплект (Wako Chemicals).

Статистика.

Използвани са ANOVA или общи линейни моделни процедури заедно с честно значимия тест за разлика на Tukey (SYSTAT v10). Данните за честотата бяха трансформирани като arcsin√x преди статистическия анализ. Значимостта беше зададена на P 0,05) (Фиг. 1C и D). iAT масата се увеличава непрекъснато (> 10 пъти) през DIO, отразявайки двукратно увеличение на броя на адипоцитите (P 3 μm 3]) е по-малко от половината от измереното в eAT (фиг. 2В). При контролни мишки, хранени с LF диета, честотата на смърт на адипоцитите при iAT не надвишава 0,5% (данните не са показани).

Серумните нива на лептин и резистин (но не и на адипонектин) са били повишени след една седмица HF хранене и след това (P дискусия).

В iAT експресията на ген на маркера на ATMΦ остава ниска през целия период на DIO. Отбелязахме скромна (приблизително двукратна) възходяща тенденция при експресия на F4/80, CD68 и CD11c в iAT между 12 и 20 седмица (онлайн приложение Фиг. 2D), съвпадаща с настъпването на смъртта на адипоцитите, започваща на 12 седмица (Фиг. 1D ). Като цяло обаче ниската честота на смъртност на адипоцитите в iAT (фиг. 1С и D) е свързана с ниска експресия на гена ATMΦ.

Смъртта на адипоцитите индуцира ATMΦ експресия на възпалителни белези на затлъстяването.

Ако смъртта на адипоцитите е основна причина за възпаление на AT, CLS, заобикалящ мъртвите адипоцити, трябва да експресира възпалителни медиатори, които са увеличени в ATM на затлъстели мишки. Освен това нивата на експресия на тези медиатори трябва да бъдат положително свързани с честотата на индуцирана от затлъстяване смърт на адипоцитите в eAT. Имунохистохимията (Фиг. 4А) демонстрира експресия както на TNF-α, така и на IL-6 протеин от ATMΦs, подредени в CLS около остатъчни липидни капчици от мъртви адипоцити. Имайте предвид, че всички ATM в рамките на всеки CLS оцветяват положително за прицелния цитокин. MGCs също експресират провъзпалителни цитокини (фиг. 4В). По този начин изчистването на мъртвите адипоцити е свързано с ATMΦ експресия на цитокини, замесени в развитието на инсулинова резистентност.