Резюме

Заден план

Постоянната хипергликемия е може би основната причина за невровъзпаление и увреждане на нервите, водещо до невропатична болка. Nrf2 е редокс-регулиран транскрипционен фактор, участващ в модулацията на антиоксидантните защитни системи. Nrf2 стимулира производството на ендогенна антиоксидантна защита и детоксикиращи ензими. NF-kB е транскрипционен фактор, участващ в производството на възпалителни цитокини, в допълнение към неговата имунологична функция. Регулирането на Nrf2 е координиран с този на NF-kB за поддържане на редокс хомеостазата в здрави клетки. Тази регулация обаче е нарушена при патологични условия; като такава става очевидна възможност за терапевтична намеса. Диабетната невропатия е състояние, при което се променя моделът на експресия на Nrf2 и NF-kB е докладвано [22].

В нашето проучване е установен модел на DPN на плъх и са наблюдавани хистологични промени в пародонталните тъкани под ултраскоп. С електрофизиологичен метод бяха открити показатели на нервната проводимост. Нивата на изразяване на NF-kB и Nrf2 са наблюдавани чрез имуноблот. Нашето проучване имаше за цел да изследва ролята на Nrf2 и NF-kB при диабетна невропатия и за обобщаване на терапевтичните резултати от моксибустията, насочени към Nrf2-NF-kB при диабетна невропатия.

Материали и методи

Реактиви и животни

Групи животни и модел

В този експеримент бяха използвани 100 плъха. След като плъховете бяха подложени на гладно за една нощ, диабетът беше индуциран до 80 плъха чрез интраперитонеално инжектиране на STZ, разтворен в 0,1 М натриев цитратен буфер (рН 4,5) в доза от 60 mg/kg [23]. Успешното индуциране на диабет е потвърдено, когато кръвната захар на гладно надвишава 16,7 mmol/L 3 дни след инжектирането на STZ и остава при> 16,7 mmol/L през цялото проучване. В нормалната контролна група (N), 20-те останали плъхове са третирани със същия обем студен цитратен буфер и се считат за недиабетни плъхове.

Ишемия-реперфузия се предизвиква при диабетни плъхове в групата на DPN модел, както беше описано по-рано [24]. Накратко, STZ-диабетичните плъхове бяха анестезирани чрез интраперитонеално приложение на 50 mg/kg разтворим пентобарбитал натрий [25] след 4 седмици индукция. Исхемията се предизвиква чрез запушване на коремната аорта, дясната обща илиачна артерия и феморалната артерия с артериални скоби, които се отстраняват след 3 часа. Шестдесет и три плъха бяха включени в последното проучване, проведено в продължение на 4 седмици. Седемнадесет плъха са изключени от общо 80 плъхове поради смърт по време на операция поради инфекция (n = 5, процентът е 6,25%) или поради недостатъчно увеличение на кръвната захар на гладно (

Резултати

Ефекти от моксибустията върху скоростта на проводимост на нервите на плъховете с DPN

За да се определи потенциалният терапевтичен ефект от моксибустията върху DPN, първоначално идентифицирахме ефекта от моксибустията върху нервната проводимост на плъховете с DPN. В сравнение с тези от нормалната контролна (N) група, SNCV, NAP амплитудата и TNCV са значително намалени в групата на DPN модел (DPN) [N срещу DPN; SNCV (m/s): 44.23 ± 5.3 срещу 25.18 ± 3.35; NAP амплитуда (mV): 12,2 ± 2,42 срещу 6,25 ± 1,08; TNCV: 31,46 ± 6,14 срещу 16,27 ± 2,83; n = 20 в група N докато н = 23 в група DPN, стр Фиг. 1

насочени

Ултраструктура на седалищния нерв

Като се има предвид, че лечението с моксибуция подобрява NCV на плъховете с DPN, ние предположихме, че моксибустията може да защити ултраструктурата на нервната тъкан срещу диабетни и исхемични обиди. Ултраструктурата на седалищните нерви е визуализирана с помощта на трансмисионен електронен микроскоп. Фигурите показват представителните характеристики на ултраструктурата в групата N: × 6000, фигура а; групата DPN: × 6000, фигура b; групата M1: × 6000, фигура c; и групата М2: × 6000, фигура d. Фигура 2 показва типичните резултати от електронна микроскопия, които потвърждават оточния и исхемичен нервен миелин. Фигура 2 също така разкрива подуване и разрушаване на миелиновата обвивка, аксонална атрофия и намаляване на клетъчните органели в групата на DPN модел. След прилагане на моксибустионно лечение за 15 или 30 минути, патологичните промени в лекуваните плъхове бяха намалени в сравнение с тези в нормалната контролна група. Патологичните промени включват смекчаване на отока и нараняване на миелиновата обвивка и аксоните.

Ултраструктура на седалищния нерв (оцветяване с уран и олово). Нормална контролна група (N) (а): седалищния нерв с непокътнати миелинови обвивки и здрави аксони с плодови клетъчни органели. Група модели (DPN) (б): седалищният нерв с тежка загуба на миелинизирани аксони и повишен ендоневриален колаген, нарушени и извити миелинови обвивки и намалени клетъчни органели. M1 (° С): моксибусия за 15 минути на ден. M2 (d): моксибусия за 30 минути на ден

Експресионни нива на серумни IL-1β, IL-6 и IL-8

ELISA анализът показва, че нивата на експресия на серумни IL-1β, IL-6 и IL-8 в модела на плъхове значително се увеличават в сравнение със съответните стойности в групата на DPN (n = 23., стр Фиг. 3

Имуноблот на седалищния нерв

Определихме протеиновата експресия на NF-kB и Nrf2 в седалищния нерв, за да потвърди данните, получени от предишни експерименти. В сравнение с група N (n = 20), нивото на изразяване на NF-kB в седалищните проби от групата DPN е значително увеличен, докато нивото на експресия на Nrf2 значително намален (n = 23., стр Фиг. 4

RT-PCR на седалищния нерв

За да потвърдим наблюденията, получени от експеримента с имуноблот, ние допълнително изследвахме експресията на иРНК на NF-kB и Nrf2. В сравнение с групата N (n = 20), нивото на експресия на иРНК на NF-kB в седалищния нерв в групата на DPN е значително увеличен (n = 23., стр Фиг. 5

Дискусия

DPN отчита най-честите дългосрочни усложнения на захарния диабет. Като такива нервните клетки играят важна роля в патогенезата на DPN. Невронните дефицити са свързани с анормални реакции на глиални клетки и неврони в отговор на хипергликемия [27]. Moxibustion се прилага като ефективно и безопасно лечение за DPN [28, 29]; терапевтичният механизъм обаче все още не е напълно изяснен. В това проучване неврологичните ултраструктурни промени и проводимостта в седалищния нерв на плъховете са количествено определени след индуциране на DPN. Дали тези промени са свързани с NF-kB и Nrf2 по време на моксибуция също е изследвано лечение.

Превантивното лечение за акупунктура и моксибуция на болести, което е важният компонент на превантивното лечение на заболявания при ТКМ, има широко приложение от древни времена. Акупунктурата може да подобри способността да се противопоставя на болестта и да възстанови способността да поддържа стабилното състояние на тялото. Това е и набирането на китайска медицина „пазете здраве, не бъдете зли“. Точките ST 36 и BL 26 имат тясна връзка с вродения бъбрек и придобития далак и стомах чи съответно, докато EX-B 3 елиминира нездравословните тенденции. Точковата комбинация е насочена към справяне както със симптомите, така и с първопричините, като обръща равно внимание на превенцията.

Посочени са основните силни страни на това проучване. Доколкото ни е известно, това проучване е първото, което изследва ефектите от лечението с моксибуция върху DPN; по този начин това проучване предостави предварителни резултати като основа на бъдещи проучвания. Новата стратегия за лечение може да има важна роля в експериментална среда, тъй като настоящите фармакологични подходи са недостатъчни за свързаното с DPN невро възпаление. Получихме също така, че 15-минутното лечение при принуждаване може да подобри в достатъчна степен DPN, което значително допринася за съществуващата литература.

Нашето проучване показа, че моксибуцията може да регулира и възстанови баланса между нивата на експресия на NF-kB и Nrf2 и патологичните промени в пародонталните тъкани на диабетични плъхове. Моксибустията облекчава разграждането на пародонталните тъкани и потиска синтеза и секрецията на интерлевкини, като IL-1β, IL-6 и IL-8, при DPN плъхове. Моксибуцията е инхибирана NF-kB и спаси Nrf2 експресия в седалищния нерв. В заключение, моксибуцията може да предизвика терапевтични ефекти, които едновременно са насочени към Nrf2 и NF-kB пътища в DPN.

Едно от ограниченията на това проучване е, че въпреки че плъховете с DPN са били третирани в продължение на 4 седмици, за да се оцени тяхната нервна проводимост, не са провеждани непрекъснати измервания, за да се оцени дългосрочният ефект на моксибуста върху баланса между NF-kB и Nrf2 изрази. Бъдещите проучвания трябва да комбинират експериментална оценка с микроскопични и молекулярни изследвания на нервната проводимост, за да се изясни дългосрочната ефикасност на моксибуцията. По-нататъшните проучвания също трябва да изяснят дали моксибуцията директно инхибира или регулира метаболитната функция на организма чрез елиминиране на възпалителните фактори и чрез индиректно регулиране NF-kB и Nrf2 пътека. Освен това преходът към клинични изследвания върху хора се нуждае от допълнителни изследвания.

Заключения

Нашите резултати показват, че моксибустията инхибира протеиновата и иРНК експресията на NF-kB но индуцира експресията на протеин и иРНК на Nrf2 в седалищния нерв. Moxibustion възстанови баланса между NF-kB и Nrf2 при плъхове с DPN. По този начин нервното възпаление се облекчава чрез регулиране на възпалителните фактори на интерлевкин [Фиг. 6].