ОРИГИНАЛНИ СТАТИИ ARTIGOS ORIGINAIS

диета пребиотици

Преместване на Клебсиела sp. при мишки, хранени с ентерална диета, съдържаща пребиотици

Translocação de Klebsiella sp. em camundongos alimentados com dieta enteral contendo prebióticos

Даниеле Ферейра да Силва I; Хосе Марио да Силвейра Мезенсио II; Мария Кристина Дантас Ванети I; Пауло Роберто Цекон III; Матей Лурейро дос Сантос I

I Universidade Federal de Viçosa, Departamento de Microbiologia. Ав. P.H. Rolfs, s/n., 36570-000, Viçosa, MG, Brasil. Кореспонденция пара /Кореспонденция на: J.M.S. MEZÊNCIO. Електронна поща:
II Universidade Federal de Viçosa, Departamento de Biologia Geral. Viçosa, MG, Бразилия
III Universidade Federal de Viçosa, Departamento de Ciência da Computação. Viçosa, MG, Бразилия

Условия за индексиране: Инулин. Клебсиела sp. Ентерално хранене. Бактериална транслокация.

Termos de indexação: Инулина. Клебсиела sp. Ентерално хранене. Транслокационна бактерия.

ВЪВЕДЕНИЕ

K. pneumoniae възстановен от ентерална диета от Pereira 12 се активира в триптиказен соев бульон (TSB, Merck) при 37 ° С, в продължение на 24 часа и клетките се събират чрез центрофугиране. The Клебсиела клетъчният концентрат се разрежда с физиологичен разтвор (0,85% NaCl), за да се получи суспензия, съдържаща около 10 10 образуващи колонии единици (CFU) на милилитър ентерална диета.

Използваната ентерална диета беше соева диета без захароза (Support ®). Диетата на прах се разтваря в стерилна дестилирана вода в съответствие с препоръките на производителя. Ентералната диета, хранена с животинските групи, получаващи пребиотици, се приготвя чрез добавяне на 15,3 mg/100 g телесно тегло на ден FOS и 15,3 mg/100 g телесно тегло на ден инулин, като се има предвид средното тегло на животните 24 g и средната дневна стойност прием на приблизително 20 ml диета на животно. Животните от контролната група бяха хранени с диета AIN-93G, ad libitum 13 .

Използвани са четири до шестседмични швейцарски мишки-албиноси, разделени на случаен принцип в групи от по 10 животни и държани в дезинфекцирани клетки при стайна температура 25 ° C.

Експериментът е извършен в напълно рандомизиран дизайн, повторен два пъти, следвайки дизайн на разделен участък с обработките в участъците, показани на диаграма 1, и времената за оценка в разделените участъци.

Имунната система беше потисната от началото до края на експеримента чрез прилагане на 10 mg/kg преднизон на животните, както и 200 mg/kg карбеницилин през устата през първите четири дни от експеримента. Ентералната диета, замърсена с 10CFU/mL от Клебсиела също е доставен на 5-ия ден на животните от групи IV, V, VIII и IX (графика 1).

На 6, 7, 9 11 и 13 дни бяха убити две животни от всяка група и органи като сърце, черен дроб, далак, бъбреци и бели дробове бяха събрани, претеглени и съхранявани при 4 ° С в продължение на 24 часа в стерилни полиетиленови торбички (Whirl -Pak, Millipore). Типични колонии от Клебсиела бяха преброени чрез мацериране на органите 14, приготвяне на десетични разреждания и инокулиране в селективен агар на MacConkey-инозитол-карбеницилин (Merck), последвано от инкубация при 37 ° С в продължение на 48 часа 15. Резултатът е изразен в CFU от Клебсиела на грам орган. Включени са само плочите, съдържащи повече от 25 колонии.

Изследователите са били наясно с етичните и законови изисквания и разпоредби за изследвания, направени в Бразилия и с Colégio Brasileiro de Experimentação Animal (COBEA - Бразилски колеж за експерименти с животни).

Типични колонии от Клебсиела sp. в селективна среда на McConkey-Inositol-Carbenicillin не са открити в черния дроб, далака, сърцето, бъбреците и белите дробове на животните при лечения I, II и VI, на които не е дадено лекарство за потискане на имунитета или замърсена диета.

На 6-ия ден около 10 5 типични CFU/g от Клебсиела sp. са открити в черния дроб (Фигура 1А) при лечение III имуносупресирани животни, хранени с незамърсена ентерална диета. Клебсиела sp. също е възстановен от бъбреците, черния дроб и далака на тези животни на 7-ми ден (Фигура А).

Когато имуносупресираните животни получават ентерална диета без K. pneumoniae и добавяне на пребиотици (лечение VI), преместване на местни Клебсиела също беше потвърдено и органи като далак, черен дроб и бели дробове имаха от 10 3 до 10 5 CFU/g (Фигура 1В).

Добавянето на пребиотици FOS и инулин към ентералната диета, замърсена с K. pneumoniae не попречи Клебсиела транслокация при здрави животни (лечение IV). Въпреки това, когато на здрави животни се дава замърсена диета без пребиотици (лечение VIII), Клебсиела броят беше много по-висок в анализираните органи и продължи по-дълго (Фигура 1C и D).

Лечението на V имуносупресирани животни, при които е била заразена ентерална диета с пребиотици, е имало 10 4 до 10 5 CFU/g Клебсиела sp. в бъбреците, черния дроб и далака (Фигура 1Е). Транслокацията за период до 9 дни е потвърдена при имуносупресирани животни от лечения VII, VIII и IX, хранени или с замърсена или незамърсена диета с пребиотици. Третираните IX животни са показали най-високите стойности на CFU/g от типичните Клебсиела колонии, около 10 6 CFU/g. Пребиотиците в диетата са по-ефективни за намаляване на периода на транслокация, отколкото за намаляване на броя на транслокираните клетки.

Резултатите, получени от животните при лечение I, II и VI предполагат, че при неинокулирани гостоприемници с ефективна имунна система, храносмилателния тракт е местен Клебсиела не могат да се транслоцират в анализираните органи.

Транслокацията на Клебсиела sp. наблюдавано в различните органи засилва изявлението на Берг 5: K. pneumoniae е един от бактериалните видове, който транслоцира най-много от чревния тракт на мишки, получаващи преднизон и други имуносупресиращи лекарства.

Черният дроб е най-често замърсеният орган Клебсиела sp. (Фигура 1A, B, D, E и F) и това може да се отдаде на големия брой бактерии, преминаващи от чревната лигавица към порталната система, непременно преминаващи през лобовете на черния дроб, преди да достигнат до системната циркулация 16. Pereira 12 също така отбеляза, че K. pneumoniae щам P15, транслоциран по-често в черния дроб, отколкото в други органи при имуносупресирани животни.

Едновременната употреба на имуносупресия, антибиотик и замърсена ентерална диета увеличава процеса на бактериална транслокация, потвърдена от резултатите, получени от животните при лечение IV (замърсена ентерална диета с пребиотици, дадени на здрави животни), V (замърсена ентерална диета с пребиотици дава се на животни, лекувани с преднизон и карбеницилин), VIII (замърсена ентерална диета без пребиотици, дадени на здрави животни) и IX (замърсена ентерална диета без пребиотици, давана на животни, лекувани с преднизон и карбеницилин). Резултатите са в съгласие с литературата, която твърди, че има увеличение на скоростта на транслокация, когато се появи комбинация от два или три механизма, отговорни за транслокацията 6,15 .

Данните относно употребата на пребиотици в диетата са в съгласие с редица публикувани проучвания. Инулинът и FOS са несмилаеми олигозахариди, класифицирани като диетични фибри и функционални съставки 8,20,21. Целта на техния функционален ефект е микробиотата на дебелото черво, която е способна да ги ферментира и за която те действат като селективни агенти на стомашно-чревната физиология, имунната функция, между другото 9,20-25. Научните данни, изложени в тази работа, показват сериозни доказателства за пребиотичния ефект на FOS и инулина, тъй като те намаляват риска от транслокация на опортюнистичен патоген при животни, получаващи замърсени храни и имуносупресиращи лекарства.

С оглед на риска ентералните диети да бъдат замърсени с бактерии, които представляват заплаха за пациентите, приемащи кортикоиди и антибиотици, пребиотиците трябва да се превърнат в една от основните съставки на ентералните диети поради тяхната основна защитна роля.

Животните, хранени с FOS и инулин (15,3 mg/100 g на ден), са имали по-кратки периоди на транслокация, отколкото животни, които не са хранени с пребиотици.

D.F. SILVA: Преглед на литературата, изследвания, анализ на данни и писане на статията. J.M.S. MEZENCIO: Научен съветник, анализ на данни и корекция на статията. M.C.D. VANETTI: Съветник по изследвания, анализ на данните и корекция на статията. P.R. CECON: Съветник по изследвания, анализ на данни и корекция на статията. М.Л. SANTOS: Проучване, анализ на данни и писане на статията.

1. Gales AC, Sader HS, Jones RN. Патогени на дихателните пътища, изолирани от пациенти, хоспитализирани със съмнения за пневмония в Латинска Америка: честота на поява и профил на чувствителност към антимикробни средства. Резултати от Програмата за антимикробно наблюдение SENTRY (1997-2000). Diag Microbiol Infect Dis. 2002; 44 (3): 301-11. [Връзки]

2. Mehall JR, Kite CA, Saltzman DA, Wallett T, Jackson RJ, Smith SD. Проспективно проучване на честотата и усложненията от бактериално замърсяване на ентералното хранене при новородени. J Ped Surg. 2002; 37 (8): 1177-82. [Връзки]

3. Oliviera MH, Bonelli R, Aidoo KE, Batista RV. Микробиологично качество на разтворените ентерални състави, използвани в болници. Хранене. 2000; 16 (9): 729-33. [Връзки]

4. Pinto UM, Cardoso RR, Vanetti MCD. Detecção de Листерия, салмонела д Клебсиела em serviço de alimentação hospitalar. Rev Nutr. 2004; 17 (3): 319-26. [Връзки]

5. Berg RD. Бактериална транслокация от стомашно-чревния тракт на мишки, получаващи имуносупресивни химиотерапевтични средства. Curr Microbiol. 1983; 8 (5): 879-82. [Връзки]

6. Wiest R, Rath HC. Бактериална транслокация в червата. Най-добрият Prac Res Clin Gastroenterol. 2003; 17 (3): 397-425. [Връзки]

7. Kapkac M, Erikoglu M, Tuncyurek P, Ersin S, Esassolak M, Alkanal M, и др. Обогатени с фибри диети и радиационно увреждане на червата. Nutr Res. 2003; 23 (1): 77-83. [Връзки]

8. Gibson GR, Roberfroid MB. Диетична модулация на човешката микрофлора на дебелото черво: въвеждане на пребиотици. J Nutr. 1995; 125 (6): 1401-12. [Връзки]

9. Kaplan H, Hutkis RW. Ферментация на фруктоолигозахариди от млечнокисели бактерии и бифидобактерии. Appl Environment Microbiol. 2000; 66 (6): 2682-4. [Връзки]

10. Guarner F, Malagelada JR. Чревната флора в здравето и болестите. Лансет. 2003; 361 (9356): 512-9. [Връзки]

11. Rayes N, Hansen S, Seehofer D, Müller AR, Serke S, Bengmark S, и др. Ранно ентерално снабдяване с фибри и лактобацили спрямо конвенционалното хранене: контролирано проучване при пациенти с големи коремни операции. Хранене. 2002; 18 (7/8): 609-15. [Връзки]

12. Pereira SCL. Caracterização molecular e de fatores de virulência de Клебсиела sp. isoladas de dietas enterais [tese]. Viçosa: Universidade Federal de Viçosa; 2001. [Връзки]

13. Reeves PG, Nielsen RH, Fahey GC Jr. AIN-93 пречистени диети за лабораторни гризачи: окончателен доклад на Американския институт по хранене ad hoc комисия по преформулиране на диетата за гризачи AIN-76A. J Nutr. 1993; 123 (11): 1939-51. [Връзки]

14. Nader de Macíaz ME, Apella MC, Romero NC, González SN, Oliver G. Инхибиране на Шигела соней от Lactobacillus casei и Lactobacillus acidophilus. J Appl Bacteriol. 1992; 73 (5): 407-11. [Връзки]

15. Berg RD. Бактериална транслокация от стомашно-чревния тракт. Тенденции Microbiol. 1995; 3 (4): 149-54. [Връзки]

16. Bagley ST, Seidler RJ. Основна Клебсиела идентификация с агар на MacConkey-инозитол-карбеницилин. Appl Environment Microbiol. 1978; 36 (3): 536-8. [Връзки]

17. Gianotti L, Alexander JW, Fukushima R, Pyles T. Стероидната терапия може да модулира чревната бариерна функция, защитата на гостоприемника и оцеляването при термично ранени мишки. J Surg Res. 1996; 62 (1): 53-8. [Връзки]

18. Alverdy J, Aoys E. Ефектът от прилагането на глюкокортикоиди върху бактериалната транслокация. Am Surg. 1991; 214 (6): 719-23. [Връзки]

19. Jones WG, Barber AE, Kapur S, Hawes AJ, Fahey TJ, Minei JP, и др. Патофизиологични нива на глюкокортикоиди и оцеляване на транслоциращи бактерии. Arch Surg. 1991; 126 (1): 50-5. [Връзки]

20. Roberfroid MB, van Loo JAE, Gibson GR. Бифидогенната природа на цикория инулин и неговите продукти на хидролиза. J Nutr. 1998; 128 (1): 11-9. [Връзки]

21. Manning TS, Gibson GR. Пребиотици. Най-добрият Prac Res Clin Gastroenterol. 2004; 18 (2): 287-98. [Връзки]

22. Роберфроид, М. Концепция за функционална храна и нейното приложение към пребиотиците. Копайте черен дроб Dis. 2002; 34 (2): S105-S10. [Връзки]

23. Wile TV, Boon N, Possemiers S, Jacobs H, Verstraete W. Пребиотични ефекти на цикория инулин в симулатора на човешката чревна микробна екосистема. FEMS Microbiol Ecol. 2004; 51 (1): 143-53. [Връзки]

24. Montesi A, Garcia-Albiach RG, Pozuelo MJ, Pintado C, Goni I, Rotger R. Молекулярен и микробиологичен анализ на цекалната микробиота при плъхове, хранени с диети, допълнени или с пребиотици, или с пробиотици. Int J Food Microbiol. 2005; 98 (3): 281-9. [Връзки]

25. Rinne M, Gueimonde M, Kalliomäki M, Hoppu U, Salminen SJ, Isolauri E. Подобни бифидогенни ефекти на частично хидролизирана диета за кърмачета и кърмене, допълнена с пребиотици и кърмене върху микробиота на бебета в червата. FEMS Immunol Med Microbiol. 2005; 43 (1): 59-65. [Връзки]

Получава се на: 9.9.2007
Окончателната версия е представена повторно на: 18/7/2008
Одобрен на: 8/8/2008

Цялото съдържание на това списание, с изключение на случаите, когато е отбелязано друго, е лицензирано под лиценз Creative Commons Attribution