Феру Артунк, д-р

Отделение по вътрешни болести, Отдел по ендокринология, диабетология, ангиология

и нефрология, Университетска болница в Тюбинген, Otfried-Mueller-Str. 10, 72076

Тюбинген (Германия), тел. + 49-7071-2982711, факс + 49-7071-293174

Сродни статии за „“

  • Facebook
  • Twitter
  • LinkedIn
  • електронна поща

Резюме

Въведение

В това проучване ние изследвахме развитието на SHPT по време на прогресията на бъбречната недостатъчност в модел на протеинурична мишка, който рекапитулира всички етапи на хронично бъбречно заболяване [15] и е свързан с дефицит на витамин D поради загуба на урина [16]. След това тествахме дали заместването на естествения или активен витамин D или диетичното ограничение на фосфора е в състояние да предотврати SHPT в този модел.

Материали и методи

Животни

Експерименти бяха проведени върху мишки от див тип 129 S1/SvImJ, закупени от Charles River, Германия. Мишките бяха държани на 12: 12-часов цикъл светлина-тъмнина и хранени със стандартна диета (C1000, съдържание на фосфор 7,5 g/kg, Altromin, Lage, Германия) с чешмяна вода ad libitum. Всички експерименти с животни са проведени съгласно германския закон за хуманно отношение към животните и са одобрени от местните власти.

За да се индуцира протеинуричен миши модел, 8-месечни мишки бяха лекувани с еднократна интравенозна инжекция на доксорубицин (2 µg/µl, Cell Pharm, Bad Vilbel, Германия) в левия ретробулбарен венозен сплит под лека изофлуранова анестезия. Дозата на доксорубицин е 12,6 µg/g т.т. за индукция на ХБН 1-3, 14 µg/g т.т. за индуциране на ХБН 4-5 и 15,4 µg/g т.т. за индуциране на AKI. Проби от спонтанно унищожена урина се събират сутрин 2 дни преди (изходно ниво) и до 30 дни след инжектиране на доксорубицин. Взети са кръвни проби преди и на ден 10 и 30 след инжектиране на доксорубицин.

Леченията за потискане на SHPT се състоят от диета с ниско съдържание на фосфор (C1048, съдържание на фосфор 0,13 g/kg, Altromin, Lage, Германия) или диета, обогатена с холекалциферол (C1000 + 25 000 IE/kg, Altromin, Lage, Германия). При CKD 4-5 мишки холекалциферол (D3-Vicotrat, 100 000 IE/ml, Heyl, Берлин, Германия) трябва да се инжектира в доза от 15 IE/g телесно тегло три пъти седмично i.p. за преодоляване на протеиновите загуби и за постигане на нормализиране на концентрацията на 25-OH витамин D. 1,25-OH-лечение се състои от три i.p. инжекции седмично в доза от 100 pg/g телесно тегло при ХБН 1-3 и 300 pg/g телесно тегло при мишки с ХБН 4-5. Таблица 1 показва броя на инжектираните животни от съответната серия.

маса 1

Брой инжектирани животни от съответната серия с нефротични (CKD 1-3) мишки и мишки, умрели преди достигане на крайната точка

Лабораторни анализи

Уреята, фосфорът, калцият и протеините се измерват с колориметрични тестове (Labor + Technik, Берлин, Германия). Свободният калций се измерва с помощта на анализатор на кръвни газове IL GEM® Premier 3000 (Instrumentation laboratorium GmbH, Kirchheim, Германия). Концентрациите на PTH, FGF23, 25-OH витамин D и 1,25-OH витамин D бяха измерени с помощта на комплекти ELISA (Immutopics, CA, USA и IDS Immunodiagnostic Systems, Франкфурт на Майн, Германия).

Количествени RT-PCR измервания

Нивата на транскрипт на klotho, 1α- и 24-хидроксилаза в бъбреците от нелекувани или третирани мишки бяха измерени с помощта на LightCycler System (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany), както е описано по-горе [17]. Праймерите и условията са показани в Таблица 2. Амплифицираните продукти бяха потвърдени чрез анализ на кривата на топене и секвениране. Резултатите са изразени като съотношение на целта спрямо GAPDH транскриптите на домакинския ген.

Таблица 2

Използвани праймери и протоколи за усилване

Хистопатологичен анализ

Бъбреците на мишките бяха фиксирани в 4% параформалдехид/0,1 М натриев фосфатен буфер рН 7,4, дехидратирани и вградени в парафин. Бъбреците бяха нарязани на филийки с дебелина 2 µm и оцветени с периодично киселинен реагент на Schiff. Секциите се оценяват по заслепен начин за признаци на гломеруларно и тубулно увреждане, като се използва полуколичествен анализ, съответно чрез индекс на гломерулна склероза (GSI) [18] и оценка на тубулна травма (TSI) [19]. За изследване на калцификати са извършени оцветявания на Von-Kossa от бъбреците, както и от определена част от гръдната аорта (напречни сечения).

Статистически анализ

Данните се предоставят като аритметични средни ± SE, като n представлява броят на независимите експерименти. Всички данни бяха тествани за значимост с параметричен или непараметричен ANOVA, сдвоен или несдвоен t-тест на Student или U-тест на Mann-Whitney, където е приложимо, с помощта на GraphPad InStat и Prism 6, GraphPad Software (Сан Диего, Калифорния, www.graphpad. com). Стойност p

Свързани статии:

Препратки

  1. Yamashita T, Yoshioka M, Itoh N: Идентифициране на нов фибробластен растежен фактор, FGF-23, преференциално експресиран във вентролатералното таламусно ядро ​​на мозъка. Biochem Biophys Res Commun 2000; 277: 494-498.

Авторски контакти

Феру Артунк, д-р

Отделение по вътрешни болести, Отдел по ендокринология, диабетология, ангиология

и нефрология, Университетска болница в Тюбинген, Otfried-Mueller-Str. 10, 72076

Тюбинген (Германия), тел. + 49-7071-2982711, факс + 49-7071-293174

Подробности за статия/публикация

влияние

Прието: 23 февруари 2015 г.
Публикувано онлайн: 29 март 2015 г.
Дата на издаване на изданието: април 2015 г.

Брой страници за печат: 13
Брой фигури: 8
Брой таблици: 2

Лиценз за отворен достъп/Дозировка на наркотици/Отказ от отговорност

Препратки

  1. Yamashita T, Yoshioka M, Itoh N: Идентифициране на нов фибробластен растежен фактор, FGF-23, преференциално експресиран във вентролатералното таламусно ядро ​​на мозъка. Biochem Biophys Res Commun 2000; 277: 494-498.

Изтеглете фигури и таблици (.pptx)