Оригинални статии

  • Пълен член
  • Цифри и данни
  • Препратки
  • Цитати
  • Метрика
  • Лицензиране
  • Препечатки и разрешения
  • PDF

Резюме

Тази статия описва характеристиките на неспецифичния реактивен хепатит (NSRH) при делфини, заседнали на брега на Канарските острови (Испания). Хистологичният вид на NSRH е белязан от пролиферацията на клетки на Купфер и наличието на гранулоцити, плюс лимфоцити и плазмени клетки, разпръснати из чернодробния паренхим и в порталната или перивенуларна строма, без или с минимални доказателства за некроза на хепатоцитите. NSRH се състои от възпалителна инфилтрация на CD3 + Т-лимфоцити и IgG + плазмени клетки в порталните пространства и чернодробни синусоиди. Анти-S100 протеиновото поликлонално антитяло реагира с променлив брой лимфоцити от порталните области и чернодробните синусоиди и с клетки на Kupffer и епителните клетки на жлъчните пътища.

статия

1. Въведение

Хепатитът е често срещан при диви и делфини в плен (Baker 1992; Di Guardo et al. 1995; Kirkwood et al. 1997; Cornaglia et al. 2000; Jaber et al. 2004). Хроничното чернодробно заболяване с неизвестна причина е често срещано заболяване при делфините. Чернодробните лезии се състоят от дегенерация на хепатоцитите, мастни промени и фиброза. За разлика от това, острият хепатит при делфините е свързан с хранителни токсини или токсини от околната среда и биологични агенти като вируси, бактерии, гъбички и паразити. Хистопатологичните промени в черния дроб обикновено дават индикация за етиологията на острия хепатит при делфините (Ridgway 1972). Във всички тези предишни проучвания както негнойният, така и интерстициалният хепатит, както и подостър до хроничен перихолангит са най-често срещаните форми на хепатит. Въпреки това са съобщени няколко случая на неспецифичен реактивен хепатит (NSRH) при китоподобни (Jaber et al. 2004).

При сухоземните бозайници NSRH е форма на хроничен хепатит, която се определя като морфологична единица, широко разпространена в черния дроб, представляваща или остатъка от предишно възпалително интрахепатално заболяване, или отговор на различни процеси на извънчернодробно заболяване, включително фебрилни заболявания, възпаление в спланхнично легло или целиакия (Liaw et al. 1984; Mansuy 1997; Rothuizen & Van Den Ingh 1998; MacSween 2002; Volta 2008).

Китоподобните са на върха на морската хранителна верига; следователно те могат да натрупват замърсители в тъканите си през целия си живот. Проведени са множество токсикологични проучвания върху делфини (Corsolini et al. 1995; Jepson et al. 1999, 2005; Bull et al. 2006; Hall et al. 2006; Carballo et al. 2008; Kajiwara et al. 2008), но не са изследвани корелациите между токсикологичните и хистопатологичните изследвания на черния дроб. Целта на това проучване беше да се анализират хистопатологичните промени и естеството на възпалителните инфилтрати при лезии на NSRH, наблюдавани при делфини, заседнали на Канарските острови, като се отчете тежестта на NSRH с нивата на редица замърсители в мазнините и черния дроб и наличието на други инфекции и системни заболявания.

2. Материал и методи

2.1. Животни и патологично изследване

Общо 17 (9 мъжки, 8 женски) от 49 делфини (Tursiops truncatus), заседнали на Канарските острови, бяха включени в това проучване. За да се извършат хистохимичните и имунохистохимичните техники по подходящ начин, са използвани само добре запазени проби (17). Изследванията след смъртта са проведени съгласно стандартния протокол за китоподобни (Kuiken & Baker 1991). Всички основни вътрешни тъкани и органи бяха внимателно изследвани. В изследването бяха включени три проби от всеки черен дроб и чернодробните лимфни възли. Пробите от тъкани се фиксират в 10% неутрално буфериран формалин, дехидратиран чрез степенувани алкохоли и се влагат в парафин. Секции (с дебелина 4 µm) бяха изрязани и оцветени с хематоксилин и еозин и оцветяване Giemsa за хистопатологично изследване. Броят на инфилтриращите неутрофили, лимфоцити и плазмени клетки бяха преброени в 15 произволно избрани полета от 400 ×, включително синусоиди и портални пространства. NSRH е класифициран като лек (броят на клетките варира от 20 до 50 клетки на поле), умерен (50–75 клетки на поле) или тежък (повече от 75 клетки на поле).

2.2. Имунохистохимично изследване

Секции от белите дробове и ЦНС бяха оцветени с помощта на имунопероксидазен тест за морбиливирусен антиген (Kennedy et al. 1991). Методът с авидин-биотин-пероксидаза (ABC), описан другаде, е използван за изследване на имунофенотипа на чернодробния възпалителен инфилтрат (Jaber et al. 2003). Ендогенната пероксидазна активност се блокира чрез инкубиране с водороден пероксид 0,3% в метанол за 30 минути. Инкубация в 0,01% проназа (Sigma Chemicals, Сейнт Луис, МО 3500, САЩ) в продължение на 10 минути при стайна температура се използва като метод за извличане на антиген за всички антитела с изключение на MHC клас II mAb, за които инкубацията в 0,01 М лимонена киселина в микровълнова печка при 100 ° С за 7 минути (Таблица 1).

Публикувано онлайн:

Таблица 1. Подробности за първичните антитела, използвани в това проучване.

2.3. Токсикологично изследване

Пробите от мазнини и черен дроб са анализирани за хлорорганични полихлорирани бифенили (PCB) и дихлордифенилтрихлороетан (DDT) само в 11 от 17 делфина. Общата концентрация на PCB се изчислява като сумата от 11 CB конгенери (IUPAC # 28, 52, 101, 105, 118, 138, 149, 153, 156, 180 и 187). Концентрацията на DDT се изчислява като сумата от шестте съединения на DDT (pp′-DDE, pp′-DDT, pp′-DDD, op′-DDE, op′-DDT и op′-DDD). Аналитичният метод и хроматографските процедури са описани в други доклади (Carballo et al. 2008). Концентрациите на PCB и DDT са сравнени с токсикологичните прагови концентрации, предложени за морски бозайници (Jepson et al. 2005; Kajiwara et al. 2006; Castrillon et al. 2010).

3. Резултати

Хистопатологичните характеристики на лезиите, открити в черния дроб, са в съответствие с диагнозата NSRH. Две от 17 са диагностицирани като тежки, 2 от 17 са диагностицирани като умерени, а останалите 13 животни са диагностицирани като леки. Единственото макроскопско доказателство за това заболяване е леко увеличение на черния дроб. NSRH е класифициран в два различни типа според наличието на неутрофили във възпалителния инфилтрат: неспецифичен хроничен реактивен активен хепатит и неспецифичен хроничен реактивен хепатит.

Хистологичният вид на NSRH представлява възпалителен инфилтрат в порталните области и паренхима без данни за хепатоцелуларна некроза. При първия тип (неспецифичен хроничен реактивен активен хепатит) имаше лек до умерен инфилтрат, съставен главно от неутрофили, както и от лимфоцити и плазмени клетки, разположени в стромата на порталните зони и вариращи по интензивност между порталните области; включваше нормални портални тракти, лека до изразена левкоцитоза и пролиферация на клетки на Kupffer в синусоидите и някои неутрофили в стромата около чернодробните вени. При втория тип (неспецифичен хроничен реактивен хепатит) възпалението е съставено от плазмени клетки и лимфоцити в двете строми на порталните зони, около чернодробните вени и в синусоидите (Фигура 1).

Публикувано онлайн:

Неспецифичен хроничен реактивен активен хепатит е диагностициран при 3 от 17 животни, при които също е открит паразитен холангит. Китоподобните с тежък NSRH (един при хроничен реактивен хепатит и един при хроничен активен реактивен хепатит) показват изобилна възпалителна инфилтрация на неутрофили, лимфоцити и плазмени клетки в порталните зони и чернодробните синусоиди; при последната се наблюдават вътресъдови клъстери на лимфоцити и плазмени клетки (Фигура 1).

Паразити са открити в жлъчните пътища на пет делфина с NSRH и са идентифицирани като Campula spp. Тези метили причиняват тежко увреждане на жлъчните пътища и се наблюдават и в панкреатичните канали на две от животните с NSRH.

Всички животни, диагностицирани с NSRH, изглежда имат някакво предшестващо екстрахепатално заболяване, което би могло да отчете изследвания процес (Таблица 2). Тежка Nasitrema spp. заразяване се наблюдава в околоносните торбички на три животни с NSRH. Шест случая с тежки или леки инвазии с белодробни червеи (Pseudalius inflexus и Stenurus minor) са имали груби и хистологични лезии, които съответстват на паразитна пневмония, докато други два случая на пневмония се дължат на бактериална инфекция (Коринебактериум spp. и Стафилококи spp.). Други животни са диагностицирани с гастрит и/или ентерит; при четири от животните гастритът е резултат от нападение от нематода Anisakis simplex. Ентерит с неизвестна етиология е диагностициран при две животни с NSRH.

Публикувано онлайн:

Таблица 2. Диагнози на екстрахепатални причини при животни с различна тежест на NSRH.

Публикувано онлайн:
Публикувано онлайн:

Нивата на замърсители в мазнините и черния дроб на делфините са представени в таблица 3. И в двете тъкани са открити ПХБ в най-големи концентрации. Нивата на PCB в черния дроб са по-ниски от тези, установени в мазнините; нивата на тлъстината варират от 301 до 33,212 ng/g мокро тегло, докато нивата на черния дроб варират между 373 и 52 374 ng/g мокро тегло. Подобни PCG конгенерни състави се наблюдават в двете тъкани, с относително висок принос на хекса- и хепта-хлорбифенили. В рамките на органохлорните пестицидни съединения групите DDT присъстват в най-високи концентрации (Таблица 3). Концентрацията на DDT в мазнините варира от 147 до 21 050 ng/g мокро тегло; в черния дроб, концентрациите варират от 220 до 3171 ng/g мокро тегло. p, p′-DDE е съединението на DDT-групата, присъстващо с най-висока концентрация в двете анализирани тъкани. Интересно откритие беше, че двата делфина с тежък NSRH показват най-високите нива на PCB в черния дроб (Таблица 3).

Публикувано онлайн:

Таблица 3. ДДТ и ПХБ в мазнините (ng/g мокро тегло) и черния дроб (ng/g мокро тегло) на Tursiops truncatus и NSRH градуси.

4. Дискусия

Различни чернодробни и екстрахепатални възпалителни процеси са открити при животните в нашето проучване. Беше забелязано, че винаги, когато интрасинусоидалните клъстери на лимфоцити и плазмени клетки бяха открити в чернодробния паренхим на китоподобните с тежък NSRH, паразитни инвазии в жлъчните пътища, тежки белодробни червеи и параназални торбички и бактериални инфекции. Следователно това е най-вероятно резултат от постоянна локална или системна антигенна стимулация на имунната система, причинена от инфекция или заразяване, което също е съобщено при хора (Mansuy 1997) и кучета (Egenvall et al. 1998; Rothuizen & Van Den Ingh 1998) .

Поликлоналните антитела CD3, IgG, лизозим и S100 протеин дават имуномаркиране в участъци от тъкани на лимфни възли на делфини, подобно на това, получено при целевите видове и други видове, като прасето (Pérez et al. 2001). Имунохистохимичното проучване разкрива, че NSRH се състои главно от инфилтрация на плазматични клетки IgG + в синусоидите и в порталните пространства и по-малък брой CD3 + Т-лимфоцити, разположени главно в порталните пространства. При други видове, като кучето, неспецифичният хроничен реактивен хепатит също се характеризира с лимфоплазмацитен инфилтрат в порталните пространства и чернодробни синусоиди (Egenvall et al. 1998; Rothuizen & Van Den Ingh. 1998), но имунофенотипът на такъв инфилтрат не е докладвано. Естеството на възпалителния инфилтрат, наблюдавано при китоподобните в това проучване, предполага локален хуморален отговор, тъй като IgG-носещите плазмени клетки са в изобилие, докато променливото количество CD3 + лимфоцити показва променлив локален клетъчен отговор.

Нивата на PCB и DDT, открити в сала и черния дроб на животните в нашето проучване, се считат за средни в сравнение с предишни проучвания от други популации на делфини (Corsolini et al. 1995; Stein et al. 2003; Houde et al . 2005; Панаир и др. 2010). Концентрацията на PCB в салата при четири от нашите делфини е по-висока от праговата концентрация, установена за морски бозайници (Kannan et al. 2000). Разумно е да се предположи, че установените концентрации на ПХБ при изследвани животни могат да имат неблагоприятно въздействие върху здравословното им състояние, но тяхната хепатотоксичност не може да бъде установена. Въпреки това, концентрациите на PCB в мазнини, по-високи от 35 000 ng/g липидно тегло при дългоплавни пилотни китове, са свързани с високо разпространение на някои неспецифични чернодробни лезии, като инфилтрати на портални клетки и натрупване на хепатоцитни липиди (Sonne et al. 2010).

Двете животни с тежък NSRH показват най-високата концентрация на PCB конгенер, която може да бъде свързана с патогенезата на този процес. Концентрациите на DDT при някои от възрастните мъже, анализирани в това проучване, може да са били опасни: в черния дроб на три възрастни мъжки делфини от мъжки тип (TT 78, TT 93, C124) нивата на DDT са били повече от два пъти дозата, която предизвиква ендокринни нарушения при сухоземни (Kelce et al. 1995) и морски бозайници (Tanabe et al. 1994). Всички животни, анализирани за хлорорганични пестициди, показват NSRH, но при споменатите по-горе NSRH е много тежък. Съдови левкоцитни инфилтрации са наблюдавани в черния дроб на дивите видове, включително полярните мечки и арктическите лисици, изложени на устойчиви органични замърсители в естествения си хранителен режим (Sonne et al. 2005; Sonne et al. 2008).

В заключение, общо 17 делфини, заседнали в Канарските острови (Испания), представиха NSRH с различна тежест. Естеството на чернодробния възпалителен инфилтрат разкрива постоянна инфилтрация на IgG + плазмени клетки с променливи количества CD3 + Т-лимфоцити. Всички животни са имали извънчернодробни нарушения, свързани с паразитни или инфекциозни заболявания. Двата делфина с тежък NSRH показват най-високите нива на PCB в черния дроб. Въпреки че не може да бъде установен пряк ефект за която и да е от тези етиологии, разумно е да се предположи устойчив комбиниран ефект, какъвто се наблюдава при хора и други животински видове. Трябва да се проведат изследвания върху по-големи серии животни, за да се научи повече за физиологичните ефекти на тези замърсители при морски бозайници.

най-добър метод за извличане на антиген от трите тествани за всяко антитяло.