Шан Денг

1 Катедра по алергии, Медицинска колежа в Пекинския съюз, Китайска академия за медицински науки и Медицински колеж в Пекински съюз, Пекин, Китай.

2 Пекинска ключова лаборатория за прецизна медицина за диагностика и лечение на алергични заболявания, Пекин, Китай.

Джия Ин

1 Катедра по алергии, Медицинска колежа в Пекински съюз, Китайска академия за медицински науки и Медицински колеж в Пекин, Южна Корея, Пекин, Китай.

2 Пекинска ключова лаборатория за прецизна медицина за диагностика и лечение на алергични заболявания, Пекин, Китай.

Свързани данни

Резюме

Предназначение

Малко се знае за значението на сенсибилизацията на липидния трансфер на протеини (LTP) в Китай. В това проучване ние изследвахме връзката между сенсибилизацията на LTP и тежестта на клиничните симптоми при популация от пациенти с хранителна алергия, свързана с полени от мъглица.

Методи

Симптомите, предизвикани от храната, са оценени при 148 пациенти с алергия към цветен прашец на мъгла чрез стандартизиран въпросник. Специфичният имуноглобулин Е (IgE) към Art v 1, Art v 3, Pru p 3, Arah 9 и Cor a 8 се определят количествено от ImmunoCAP. Имуноблотинг на прасковени екстракти се извършва със серуми от пациенти с алергия към праскова.

Резултати

Общо 72% (107/148) от изследваната популация са имали хранителна алергия. Четиридесет и осем процента (51/107) от пациентите с хранителна алергия, свързана с цветен прашец, изпитваха поне 1 епизод на индуцирана от храната анафилаксия. Хранителната алергия корелира с IgE реактивността към Art v 3, но не и към Art v 1. Сенсибилизацията към Pru p 3, Ara h 9 или Cor a 8 е преобладаваща (съответно 80%, 69 или 63%) сред лица с хранителна алергия. Пациенти с алергия към храни със системни реакции (SR) са имали по-високи стойности за Pru p 3, Ara h 9 и Cor a 8, отколкото пациентите със синдром на орална алергия (OAS). Освен това, силната IgE реактивност, открита в имуноблоти от екстракти от праскови, показва, че Pru p 3 е основният алерген и е по-разпространен при пациенти със SR, отколкото при пациенти с OAS (100% срещу 55%).

Заключения

LTPs са основни хранителни алергени за хранителна алергия, свързана с полени на червеника, в Китай и могат да допринесат за SR.

ВЪВЕДЕНИЕ

Цветният прашец на черницата е една от най-честите причини за алергичен риноконюнктивит и астма в края на лятото и есента в Китай. 1 В допълнение към сезонните респираторни симптоми, пациентите с алергия към цветен прашец могат да развият незабавни алергични реакции към плодове и зеленчуци, включително синдром на орална алергия (OAS), уртикария, ангиоедем и анафилаксия. 2, 3 Хранителна алергия, свързана с цветен прашец Mugwort често се забелязва в клиничната практика. Съобщава се за синдром на подправка от целина, целина, подправка, синдром на горчица и праскова. 4, 5, 6 Разпространението, профилите на сенсибилизация и клиничните симптоми на тази форма на хранителна алергия могат да се различават географски. В Китай системните реакции (SR) са основната проява на хранителна алергия, свързана с полени на червеника, а прасковата е най-честата причина. 7

Хранителната алергия, свързана с цветен прашец, се счита за последица от имунологичната кръстосана реактивност между поленови алергени от мъглица и структурно свързани хранителни протеини. Все още не е идентифициран кръстосано реактивният алерген в цветен прашец. Art v 1 е доминиращият алерген на прашеца на червен мъх и над 95% от пациентите с алергия към цветен прашец са чувствителни към него. 8 Наскоро Art v 3, липиден трансферен протеин (LTP) от червеника, беше идентифициран като сенсибилизиращ алерген в популация от китайски праскови. 9 Art v 3 има 43% до 50% идентичност на последователността с LTP от ябълка, слива и праскова. В резултат на тази хомология на последователността, няколко LTPs имат висока кръстосана реактивност. Въпреки това, малко се знае за значението на LTP-сенсибилизацията при хранителна алергия, свързана с полени от мъглица. Спекулирахме, че Art v 3 може да е сенсибилизаторът за хранителна алергия, свързана с полени на червеника и че LTPs ще се окажат основните хранителни алергени при този вид хранителна алергия.

В това проучване изследвахме значимостта на реактивността на имуноглобулин Е (IgE) към Art v 1 и Art v 3 за хранителна алергия, както и корелацията между LTP сенсибилизация и алергични реакции към храни.

МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ

Проучвайте популация

Общо 148 пациенти с полиноза на червея са били записани в алергичния център на болница в Пекинския съюз (PUMCH) от юли 2011 г. до май 2012 г. Изборът на такива пациенти е извършен въз основа на клиничната история на есенната полиноза, положителна кожен тест за екстракт от черниче и наличие на IgE за полени от червен пипер. Критериите за изключване бяха сенсибилизация към полен от бреза и анамнеза за лечение със специфична за алергена имунотерапия. Всички субекти са били подложени на интрадермални кожни тестове с екстракти от 8-те най-често срещани полени и серумни IgE тестове за храни от бреза, бреза и виновник. Извършена е задълбочена клинична оценка от опитен алерголог, който има за цел да установи всички епизоди на хранителна алергия, използвайки стандартизиран въпросник, приет от Fernández-Rivas et al. 10, които включват 16 храни, а именно плодове/зеленчуци (праскова, ябълка, манго, грозде, лонган, личи, целина и зеле), бобови/фъстъци (фъстъци и зелен боб), ядки/семена (лешник, орех, кестен, и слънчогледови семена) и подправки (чесън и лук).

Диагнозата алергия към растителни храни се основава на убедителна история на алергични реакции непосредствено след консумация на храна, повишен специфичен за храната IgE и/или положителен кожен тест за убождане. Според клиничните симптоми след консумация на алергенни храни, пациентите са категоризирани в 2 групи, както следва: група 1, симптоми, локализирани в устната лигавица (OAS); група 2, SR, включително обща уртикария, ангиоедем, ангионевротичен оток на ларинкса, затруднено дишане, стомашно-чревни нарушения или симптоми на кръвообращението на анафилаксия. Диагнозата на анафилаксията се основава на критериите 11 на Националния институт по алергии и инфекциозни болести (NIAID) от 2006 г. с леки промени: пациентите са имали симптоми на поне 2 органни системи (на кожно-лигавичната тъкан, стомашно-чревната система, респираторен компромис и хипотония), настъпила бързо след консумация на храна.

Получено е писмено информирано съгласие и Комитетът по етика на болницата в Пекинския съюз одобри проучването (№ PUMCH1103).

Определяне на специфични за алергена IgE

Всички наети пациенти бяха скринирани с ImmunoCAP (ThermoFisher Scientific, Упсала, Швеция) за цветен прашец, прашец от бреза, хранителни алергени и алергенни компоненти Art v 1, Art v 3, Pru p 3 (праскова LTP), Pru p 1 (Bet v 1 хомолог), Pru p 4 (профилин), Ara h 9 (фъстъчено LTP) и Cor a 8 (лешник LTP). Специфични нива на IgE> 0,35 kUA/L се считат за положителни.

Кожен тест

Всички пациенти са били подложени на интрадермални кожни тестове с екстракти от 8-те най-често срещани полени в Китай (червен лист, бреза, амброзия, лондонски самолет, японски хмел, кипарис, пепел и кохия; Производствен и изследователски център за алергени, PUMCH, Пекин, Китай). Поленовите алергени се екстрахират в съотношение 1:20 (тегл./Об.). След това екстрактите бяха подложени на разреждане 1: 100 (v/v; с изключение на 1: 1000 за червеника и японския хмел) с алергенен разтворител за употреба; хистамин фосфат (0,01 и 0,1 mg/ml, съответно) се използва като положителна контрола, а алергенният разредител е отрицателна контрола. Реакциите се считат за положителни, когато средният диаметър на пшеницата надвишава 5 mm.

При някои заподозрени пациенти с алергия към храна са извършени кожни тестове за убождане на сурови зеленчуци, плодове и/или подправки. Хистамин фосфат (10 mg/ml) и алергенният разредител служат съответно като положителни и отрицателни контроли. Тестът се счита за положителен, когато средният диаметър на пшеницата е по-голям от 3 mm. 12

Идентифициране на прасковени алергени

Екстракт от праскова

Пресни праскови бяха получени от местния пазар. За да приготвим екстракти от праскови, следвахме метода на Pastorello et al. 13 пресни прасковени кори бяха разредени 4: 1 (тегл./Об.) В 10 mmol/L буфериран с фосфат физиологичен разтвор (PBS; pH 7) с 2% динатриева сол на поливинилполипиролидон, 2 mmol/L етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA) и 10 mmol/L натриев диетилдитиокарбамат. След хомогенизиране и центрофугиране при 15 000 g при 4 ° С в продължение на 30 минути, супернатантата се диализира срещу PBS при 4 ° С за 24 часа. Екстрактите се центрофугират за 10 минути и се замразяват при -80 ° С.

Електрофореза и имуноблотинг

За имуноблотинг екстрактите от праскови се разделят чрез електрофореза на натриев додецил сулфат-полиакриламиден гел (SDS-PAGE) и се прехвърлят в мембрани от поливинилиден дифлуорид. Свързващите протеини ленти бяха инкубирани със серуми на пациенти, алергични към праскова, и открити с белязана с хрян пероксидаза (HRPO) анти-човешко IgE антитяло. Десет пациенти с алергия към цветен прашец, без алергия към храната, послужиха като отрицателни контроли.

Проведено е проучване за инхибиране на имуноблотинг с обединени серуми от 6 пациенти, алергични към праскова. Накратко, 500 μL обединени серуми бяха инкубирани в продължение на 1 час с 500 μL разтвор, съдържащ 400 μg мугурт, прасковен протеин и 4 μg пречистен прасковен LTP (Alpco Diagnostics, Windham, NH, USA), съответно. След инхибиране се извършва имуноблотинг с праскови и червеи, както е описано по-горе.

Масова спектрометрия

За анализ на масова спектрометрия, нарязани гелове се упражняват от подходящата област (12 kD) от оцветени с Coomassie SDS-PAGE гелове и се подлагат на триптично разграждане. Идентифицирането на протеини беше извършено на MicrOTOF-QII (Bruker Daltonics Inc., Manning Park Billerica, MA, USA). Резултатът е сравнен с базата данни за масова спектрометрична протеинова последователност (MSDB) за идентифициране на протеини с помощта на софтуера Mascot (Matrix Science, Лондон, Великобритания).

Статистически анализ

Стойностите са представени като средно ± стандартно отклонение (диапазон) или число (%).

* Хора с алергия към растителна храна; † Лица без алергия към растителна храна.

Основни симптоми и причинители на хранителна алергия, свързана с полени от червеника

В обобщение 107 от 148 (72%) пациенти съобщават за алергични реакции към поне 1 от 16-те храни, включени във въпросника. Честотата на причинените от храната симптоми е посочена в таблица. От 107 пациенти, 51 (48%) са имали поне 1 епизод на индуцирана от храната анафилаксия, а 15 (14%) съобщават за влошаване на симптомите, предизвикани от храната по време на сезона на цветен прашец.

Прасковите представляват най-голям брой съобщени реакции (n = 68, 64%), последвани от ябълки (n = 26, 24%), манго (n = 21, 20%), фъстъци (n = 17, 16%), и лешници (n = 15, 14%, фиг. 1).

хранителна

Хранителната алергия, свързана с цветен прашец, е свързана със сенсибилизация на LTP

IgE, имуноглобулин Е; LTP, протеин за липиден трансфер.

Нашите данни от ImmunoCAP показват, че нивата на специфичен IgE до Pru p 3, Ara h 9 и Cor a 8 са значително по-високи при пациенти със системни реакции в сравнение с пациентите с OAS. Наблюдавано е добро съгласие между ImmunoCAP и резултатите от имуноблотинг при пациенти с алергия към праскова. Няколко предишни проучвания също показват, че сенсибилизацията към растителна храна LTP е свързана с риск от системни алергични реакции. 23, 30, 31 Стабилна и компактна вторична структура в LTPs придава тяхната устойчивост както на топлинна обработка, така и на стомашно-чревна протеолиза, които са характеристики, свързани с индуцирането на тежки симптоми. 32 Следователно високите стойности на LTP сенсибилизация представляват рисков фактор за тежки алергични реакции при хранителна алергия, свързана с полени.

Предишни проучвания показват, че в сенсибилизацията към прашеца на червеника е имало множество компоненти. В допълнение към Art v 3 са съобщени и други кръстосано реактивни алергени, като Art v 4 (profilin) ​​33 и Art v 60 kDa. 34 Сенсибилизационните модели на кръстосано реактивни алергени могат да варират в зависимост от географското местоположение и хранителните навици. Сенсибилизацията на LTP обаче преобладава в колектива на китайски алергични пациенти, свързани с полени на мугворт.

Понастоящем нашето проучване е първата оценка на напречното сечение на LTP сенсибилизацията в свързана с хранителен алергичен полен насекома. Това проучване може да бъде ограничено от неговия анализ на един център и потенциална пристрастност. В допълнение, диагнозата на хранителна алергия се основава на клинична история и кожен убоден тест и/или специфичен IgE, а не на двойно сляпо плацебо-контролирано предизвикателство за храна поради предизвикателната медицинска среда в Китай.

В заключение, хранителната алергия, свързана с цветен прашец, е разпространена в Китай и често е тежка. LTPs са основните хранителни алергени за синдрома на прашец с хранителен прашец и са свързани със системни алергични реакции. Следователно определянето на LTP сенсибилизация е полезно за оценка на риска при тази хранителна алергия. В допълнение, имунотерапията със специфичен LTP, кръстосано реактивен алерген, съществуващ във всички алергенни храни, може да бъде ефективна за лечение на хранителна алергия при такива пациенти.

ПРИЗНАВАНИЯ

Признаваме изследователите и пациентите, участвали в проучването. Това изследване беше подкрепено от Иновационния фонд за медицински науки от Китайската академия на медицинските науки (грант № 2016-I2M-1-003).