Афилиации Изследователски институт Робинсън, Училище по педиатрия и репродуктивно здраве, Университетът в Аделаида, Аделаида, Австралия, 5005, Катедра по акушерство и гинекология, Асоциираната болница на Медицински колеж Гуиянг, Гуян, Китай, 550004, Медицинска дисциплина, Университет на Аделаида, Аделаида, Австралия, 5005

отговор

Присъединителен изследователски институт Робинсън, Училище по педиатрия и репродуктивно здраве, Университетът в Аделаида, Аделаида, Австралия, 5005

Медицинска дисциплина на филиалите, Университетът в Аделаида, Аделаида, Австралия, 5005, Спешно отделение, Асоциираната болница на Медицински колеж Гуиянг, Гуянг, Китай, 550004

Дисциплина на принадлежност към медицината, Университетът в Аделаида, Аделаида, Австралия, 5005

Присъединителен изследователски институт Робинсън, Училище по педиатрия и репродуктивно здраве, Университетът в Аделаида, Аделаида, Австралия, 5005

Присъединителен изследователски институт Робинсън, Училище по педиатрия и репродуктивно здраве, Университетът в Аделаида, Аделаида, Австралия, 5005

Афилиации Изследователски институт Робинсън, Училище по педиатрия и репродуктивно здраве, Университетът в Аделаида, Аделаида, Австралия, 5005, Медицинска дисциплина, Университетът в Аделаида, Аделаида, Австралия, 5005

  • Миаоксин Чен,
  • Линда Ву,
  • Fang Wu,
  • Гари А. Уитър,
  • Робърт Дж. Норман,
  • Ребека Л. Робкер,
  • Леони К. Хайлброн

Фигури

Резюме

Лицата, заченати чрез ин витро оплождане (IVF), могат да бъдат изложени на повишен риск от сърдечно-метаболитни нарушения. Наскоро съобщихме, че заченати от IVF мъжки мишки показват нарушен метаболизъм на глюкозата при нормално и високо телесно тегло. В това проучване изследвахме метаболизма на глюкозата при зрели женски мишки C57BL/6J, които са заченати чрез естествено зачеване (NC), чрез стимулация на яйчниците (OS) или чрез IVF след чау или диета с високо съдържание на мазнини (HFD) в продължение на 8 седмици. По дизайн размерът на постелята е сравним между отделните групи, но интересно е, че теглото при раждане на жени от IVF и OS е било по-ниско от женските в NC (p≤0,001). Зрелите IVF женски мишки показват повишена глюкоза на гладно в сравнение с NC и OS мишки, независимо от диетата. Зрелите IVF и OS мишки също са по-податливи на метаболитните последици от диета с високо съдържание на мазнини в сравнение с NC жени, с нарушен глюкозен толеранс (p≤0,01), докато периферната инсулинова резистентност и повишена чернодробна експресия на глюконеогенни гени Ppargc1α, Pck1 и G6pc е наблюдавано само при IVF мишки (p - (ΔΔCT) метод и изразено като промяна в сгъването спрямо контролна проба, която е избрана от NC групата, хранена с чау и е включена във всеки цикъл.

Западна имуноблотинг

Количествено определяне на номера на копие на митохондриална ДНК (mtDNA)

ДНК бяха извлечени от квадрицепс (10 mg) с помощта на QIAamp DNA Micro Kit (Qiagen), следвайки инструкциите на производителя. Концентрацията и чистотата на ДНК се определят от Nanodrop (Thermo Fisher Scientific). След това се използва ДНК за оценка на средния брой/клетка на mtDNA копие, както е описано в [31]. Праймерите за амплификация на митохондриалния ген (12S rRNA) бяха 5′-CGT TAG GTC AAG GTG TAG CC-3 ′ и 5′-CCA GAC ACA CTT TCC AGT ATG-3 ′. Праймерите за амплификация на ядрения ген (β-актин) бяха 5′-GGAAAAGAGCCTCAGGGCAT-3 ′ и 5′-CTGCCTGACGGCCAGG-3 ′. PCR амплификация на митохондриална ДНК и ядрена ДНК се извършва едновременно във всяка проба в три екземпляра, използвайки SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems) и Rotor-Gene 6000 (Corbett, Valencia, CA) ротационен анализатор в реално време. Стойността на Ct за β-актин е извадена от тази за 12S rRNA, за да се получи стойността на ΔCt и броят на копията на mtDNA на ядрен геном (две копия на ген на актин) се изчислява като 2 × 2 - (ΔCt) .

Статистически анализ

Данните са показани като средна стойност ± стандартната грешка на средната стойност, освен ако не е посочено друго. Данните бяха анализирани статистически с SPSS 20 (SPSS, Чикаго, IL, САЩ) и трансформирани в дневник за анализ, ако не са нормално разпределени. Площта под кривата (AUC) за глюкоза и инсулин се изчислява, като се използва трапецовидното правило [32]. Общите нива на OXPHOS протеин бяха изчислени като средната стойност на OXPHOS комплекси I – V и относителната плътност на PPARGC1A и общата OXPHOS беше нормализирана от бета-тубулин. Бяха извършени единични сравнения с еднопосочен ANOVA за ефект на лечение или двупосочен ANOVA с диета и лечение като между групови фактори, докато времевите курсове бяха анализирани чрез повторни измервания ANOVA и Bonferroni post hoc анализ. Инсулиновата чувствителност, оценена чрез тест за инсулинов толеранс, се представя чрез делта нива на глюкоза между изходното ниво (0 минути) и 15 минути и се анализира чрез двупосочен ANOVA, като се коригират изходните нива на глюкоза, които се различават значително между групите и са свързани с промяната в глюкозата. При необходимост бяха използвани непараметрични тестове (U-тест на Mann-Whitney или Kruskal-Wallis). За номинални данни са използвани тестове с хи квадрат Разликите се считат за статистически значими при P Фигура 1. Телесно тегло и скорост на растеж при потомството на женски мишки.

Специфичният темп на растеж се изчислява, както следва: (Wn-W (n-1)/W (n − 1). W е телесното тегло, а n е възрастта в седмици. (A), * IVF срещу NC, P = 0,04; (п = 21-26). (B), * OS срещу NC, P = 0,004; #IVF срещу OS, P = 0,006. (п = 21-26). (D), Чау: * IVF срещу NC, P = 0,03. (E), HFD: #IVF срещу OS, P Таблица 1. Характеристики на котилото и тегло при раждане на женски малки.

Нарушен метаболизъм на глюкоза при OS и IVF женски мишки след HFD

Глюкозата на гладно беше значително по-висока при IVF спрямо NC и OS мишки, независимо от диетата (P Фигура 2. Глюкоза на гладно, инсулин на гладно, глюкоза (C – E) и инсулин (F – H), отговор на интраперитонеални тестове за толерантност към глюкоза и инсулинов толеранс тестове (I – K) при потомство женски мишки.

AU, произволна единица. (A), * IVF срещу NC, P = 0,01; IVF срещу OS, P = 0,03; ** Диетичен ефект, P = 0,01. (B), * IVF срещу OS, P = 0,03; ** Диетичен ефект, P = 0,002. (E), * OS срещу NC, P = 0,01; IVF срещу NC, P Фигура 3. Експресия на чернодробен ген на потомство на женски мишки.

Белите ленти представляват NC групата, сивите ленти представляват OS групата, а черните ленти представляват IVF групата (n = 6). (A), ** Диетичен ефект, P = 0,009. (B), * OS срещу IVF & NC, P Фигура 4. Протеинови нива на маркери за митохондриална биогенеза PPARGC1A и общо окислително фосфорилиране (OXPHOS) в черния дроб на потомството на женски мишки.