ОРИГИНАЛНИ СТАТИИ

  • Пълен член
  • Цифри и данни
  • Препратки
  • Цитати
  • Метрика
  • Препечатки и разрешения
  • PDF

Резюме

Въведение

Развитието на некротичен ентерит зависи от наличието на предразполагащи фактори, като два от най-важните са уврежданията на лигавицата, причинени от кокцидни патогени и фуражи, съдържащи високи нива на протеин (Kaldhusdal & Skjerve, 1996; Williams, 2005; Dahiya и др., 2006). Смята се, че протеолитичните ензими играят роля в ранните етапи на развитие на лезиите (Olkowski и др., 2008). Наскоро беше открит нов порообразуващ токсин, netB, в C. perfringens щам на огнището (Keyburn и др., 2008; Ван Имерсиел и др., 2009). Доказано е, че този токсин е от съществено значение за индуциране на некротичен ентерит. Почти никой от C. perfringens щамове, изолирани от здрави домашни птици и почти всеки изолат от болни пилета, носят гена, кодиращ този токсин (Van Immerseel и др., 2009). По този начин се спекулира, че само субпопулация от щамове може да причини заболяване и наличието на такива щамове в птицефермата е друг съществен фактор за индукция на некротичен ентерит. Предоставихме допълнителни доказателства в подкрепа на тази хипотеза (Timbermont и др., 2008), показващи, че изолатите на огнището, но не и нормалните изолати на микробиота, могат да причинят заболяване при експериментално заразени пилета.

статия

След забраната за допълване на антибиотиците, стимулиращи растежа, във фуражите за птици в Европейския съюз, некротичен ентерит, причинен от C. perfringens се появява отново при бройлери (Grave и др., 2004; Ван Имерсиел и др., 2004; Уилямс, 2005). Основно именно субклиничната форма на заболяването е основният проблем, водещ до тежки производствени загуби (Van Der Sluis, 2000; Hermans & Morgan, 2007). Конвенционалните терапевтични антимикробни средства могат да се използват за контрол на некротичния ентерит. Този подход обаче противоречи на целта да се намали и сведе до минимум употребата на антибиотици в производството на птици. Следователно птицепроизводството в момента се нуждае от алтернативни стратегии за управление или диета за предотвратяване и контрол на честотата и тежестта на това заболяване.

Кандидат хранителни добавки за предотвратяване на некротичен ентерит са късоверижните и средноверижните мастни киселини и етерични масла. Антибактериалната активност на мастните киселини е известна отдавна (Nieman, 1954). Сред тях лауриновата киселина има висока антимикробна активност срещу C. perfringens (Скриванова и др., 2005). За разлика от това, бутиратът не инхибира C. perfringens но се счита за стимулатор на растежа на вилусите (Kien и др., 2007) и следователно може да бъде от значение за профилактиката или регенерацията на епителните лезии. Доказано е, че някои смеси от етерични масла подобряват производителността на бройлери, когато се дават като хранителни добавки (Suk и др., 2003; Ернандес и др., 2004; Кръст и др., 2007). Известно е, че тимолът, цинамалдехидът и евкалиптолът имат антимикробна активност срещу C. perfringens (Кандан и др., 2003; Мич и др., 2004; Jujena & Friedman, 2007). Доказано е също така, че някои смеси от етерични масла намаляват C. perfringens колонизация и разпространение (Mitsch и др., 2004). Освен това, специфични смеси от етерични масла изглежда контролират кокцидиалните инфекции и следователно могат да намалят некротичния ентерит (Giannenas и др., 2003).

В настоящото проучване ефикасността на маслена киселина, средноверижни мастни киселини (С6 до С12, но главно лауринова киселина) и етерични масла (тимол, цинамалдехид и етерично масло от евкалипт), или комбинация от тези продукти, за контрол на некротичния ентерит е разследван.

Материали и методи

Щамове и ваксини

C. perfringens щам 56 е изолиран от червата на бройлерско пиле с тежки некротични чревни лезии. Това е щам тип А (без гени на бета-2 или ентеротоксин) и произвежда умерени количества алфа токсин инвитро (Gholamiandehkordi и др., 2006). Щамът е netB-положителен и е използван преди това за индуциране на некротичен ентерит в in vivo модел (Gholamiandehkordi и др., 2007; Тимбърмонт и др., 2008). Преди инокулиране на пилетата, бактериите се култивират анаеробно в инфузионен бульон от мозъчно сърце (Oxoid, Basingstoke, UK) в продължение на 24 часа при 42 ° C.

Търговската ваксина Nobilis Gumboro D78 (Intervet — Schering-Plough Animal Health, Брюксел, Белгия) и антикокцидиалната ваксина Paracox-5 ™ (Schering-Plough Animal Health, Брюксел, Белгия), съдържащи живи, атенюирани ооцисти на Еймерия acervulina, Eimeria maxima (два реда), Eimeria mitis и Eimeria tenella, са използвани в това проучване.

Минимални инхибиторни концентрации на добавки

Определени са минимални инхибиторни концентрации (MIC) за добавките при рН 6. Маслена киселина, лауринова киселина, тимол, цинамалдехид и етерично масло от евкалипт (всички продукти от Sigma, Сейнт Луис, Мисури, САЩ) са тествани като серийни двукратни разреждания в 96-ямкови микроплаки в инфузионен бульон от мозъчно сърце. Концентрациите варират от 220 до 0,86 mg/ml за маслена киселина, от 0,5 до 0,0078 mg/ml за лауринова киселина, от 3,76 до 0,029 mg/ml за тимол, от 1 до 0,008 mg/ml за цинамалдехид и от 10,67 до 0,67 mg/ml за етерично масло от евкалипт. Бактериалните суспензии се разреждат във фосфатно буфериран физиологичен разтвор до плътност от McFarland 0,5. Инокулум от 5 µl от тази суспензия се добавя към 195 µl среда в плоча за микроямки. Тези суспензии бяха инкубирани анаеробно в продължение на 20 часа при 42 ° С и бактериалният растеж беше оценен визуално. Експериментите бяха проведени в три екземпляра.

Птици и жилища

In vivo Проведени са опити с некротичен ентерит с експериментални инокулации с пилета бройлери Ross 308, които са получени като еднодневни пилета от търговска люпилня. Птиците бяха държани в изолация. Всички групи за лечение бяха настанени в една и съща стая, в клетки от 1 m 2, с постеля на пода. Всички клетки бяха разделени от плътни стени, за да се предотврати контакт между птици от различни третирани групи. Преди всяко изпитание стаите бяха обеззаразени с пероцетна киселина и водороден прекис (Hygiasept® изпарител климасепт; SARL Hygiasept, Севрей, Франция) и търговски антикокцидиален дезинфектант (OO-CIDE; DuPont Animal Health Solutions, Wilmington, Delaware, USA) В първото проучване 175 пилета бяха разделени на седем групи от 25; и във второто проучване 200 пилета бяха разделени на две групи от 22 (отрицателна контролна група и група, получаващи само кокцидии) и шест групи от 26. Те получиха питейна вода и фураж ad libitum. Приложена е програма от 23 часа/1 час за светлина/тъмнина. Експериментите с птици бяха проведени в съответствие с препоръките и след одобрение от Етичния комитет на Факултета по ветеринарна медицина, Университета в Гент.

In vivo модел на некротичен ентерит

Проучванията бяха извършени, както е описано по-горе (Gholamiandehkordi и др., 2007). Накратко, бройлерите са били хранени с диета на основата на пшеница/ръж (43%/7,5%), със соево брашно като източник на протеин. Съставът на фуражите е описан в Gholamiandehkordi и др. (2007). Ваксината Gumboro е дадена в питейната вода на 18-ия ден във всички групи. От 19-ия ден нататък се използва същата диета с изключение на това, че рибеното брашно (30%) се използва като източник на протеин. Всички групи бяха орално предизвикани с помощта на пластмасова епруветка (три пъти на ден) с приблизително 4,10 8 образуващи колонии единици C. perfringens бактерии на 19, 20, 21 и 22. ден. На 20 ден всички птици, с изключение на тези от контролната група, бяха орално инокулирани с 10-кратна доза Paracox-5 ™. На 23, 24 и 25 дни осем птици от всяка група бяха евтаназирани чрез интравенозно инжектиране на T61 (Intervet, Mechelen, Белгия). Извършва се точкуване на некротични ентеритни лезии и вземане на проби, както е описано по-долу.

В първото проучване четири групи пилета са хранени с диета, допълнена с маслена киселина (група But), с маслена киселина в комбинация със средноверижни мастни киселини (C6 до C12, но главно лауринова киселина; група But/мазнини), с маслена киселина в комбинация със средноверижни мастни киселини и етерични масла (тимол, цинамалдехид и етерично масло от евкалипт; група But/Fat/Eo) и само с етерични масла (група Eo). Концентрациите на добавките са представени в таблица 1.