Резюме

Обективен

За да се определи връзката на несинонимичните варианти rs2280205 и rs2276961 на гена SLC2A9 с подагра при камерунци.

генетичен

Резултати

В проучване за контрол на случая, включващо 30 пациенти с остра подагра, съответстващи на 30 здрави доброволци. Търсихме полиморфизъм на целевите варианти, използвайки полиморфизъм с дължина на рестрикционния фрагмент след полимеризираща верижна реакция. Точният тест на Fisher и t-тестът на Student са използвани за сравняване на променливи, като прагът на значимост е определен на 0,05. Средната възраст на участниците е 58 ± 8 години при 28 (93%) мъже. Фамилната анамнеза за подагра е открита в една трета от случаите (p> 0,05). Урикемията е била по-висока в случаите, отколкото контролите (р 0,05). Предшестващите алели (G и C) и техните хомозиготни генотипове (GG и CC) от целевите варианти са преобладаващи и в двете групи (p

Въведение

Основен текст

Методи

Уча дизайн

Това беше пилотно проучване с дизайн на случай-контрол, проведено от юни до декември 2017 г. в Яунде (Камерун).

Проба за изследване

Съставен от 30 пациенти с остра подагра (случаи), диагностицирани съгласно ACR критериите 1977 [16], и консултирани в централната болница Яунде. Контролите бяха 30 здрави индивида, без подагра и с нормална урикемия. Те бяха сдвоени помежду си по възраст (± 2 години) и пол. Всички участници, за които е известно, че са засегнати от поне една патология, която може да модифицира урикемия, като: хронично бъбречно заболяване или участници със скорост на гломерулна филтрация по-малка от 60 ml/min/1,73 m 2, лекувани или без рак, лекувани или не хронично възпалителни заболяване и др., не бяха включени в това проучване. Не включихме нито едно лице, което приема лекарства, които модифицират урикемия. Размерът на пробата се изчислява с помощта на формула на Cochran (1965: 75) с 80% мощност и 5% грешка. Вземането на проби беше последователно и неизчерпателно.

Събиране на данни

За всеки участник събрахме клинични данни, включително: възраст, пол, националност, лична и фамилна анамнеза за подагра, хранителни навици; кръвно налягане и антропометрични параметри. Хиперурикемичната диета се определя като честа консумация (поне два пъти седмично, по време на хранене) на хиперурикемични храни. След клинична оценка събрахме 5 ml венозна кръв и 24 часа урина. Капка кръв се поставя върху стерилна филтърна хартия за всеки участник и се съхранява в плик, съдържащ силикагел при 25 ° С в затворена кутия. Вторичните изследователи, извършили биологичния анализ на пробите, бяха заслепени.

Биохимичен анализ

Това включваше тестове за урикемия, 24 часа уратурия и серумна креатинемия, проведени в лабораторията по биохимия на университетския болничен център Яунде. Дозирането на пикочна киселина се извършва по ензимен и колориметричен метод Uricase [17]. Хиперурикемията се определя като нива на пикочна киселина над 60 mg/L за жени и 70 mg/L за мъже [18]. Дозировката на серумния креатинин е направена по кинетичния метод на Jaffé [17] и е използвана за определяне на скоростта на гломерулна филтрация, използвайки формулата MDRD (Модификация на диетата при бъбречни заболявания) с 4 параметъра. Бяха проведени две технически повторения за биохимичния анализ.

Молекулярен анализ

Те бяха извършени в Лабораторията за биотехнологии за обществено здраве на Биотехнологичния център на Университета в Яунде I, като се използва RFLP-PCR (полиморфизъм-полимеразна верижна реакция с дължина на рестрикционен фрагмент). Първичната екстракция на ДНК върху филтърна хартия се извършва по метод Chelex; вторичните екстракти от ДНК се амплифицират с PCR, използвайки специфични праймери (Допълнителен файл 1: Таблица S1). Грундовете за всеки вариант са проектирани с помощта на софтуера Oligo Calculator (достъпен на: http://www.pitt.edu/

Статистически анализ

Извършен е с помощта на S.P.S.S. версия на софтуера 21.0. Количествените променливи бяха изразени като средно и стандартно отклонение. Качествените променливи бяха изразени по отношение на броя и техните пропорции. Сравнението на средните количествени променливи между двете групи беше направено чрез t-тест на Student, след като групите бяха тествани за тяхната нормалност. За да сравним средствата на повече от 2 групи, използвахме теста на Kruskal – Wallis. Качествените променливи бяха сравнени чрез точния тест на Fisher. Прагът на значимост е определен на 0,05.

Резултати

Характеристики на пробата

Всяка група е съставена от 30 души, от които 28 (93,3%) мъже. Участниците са били на възраст 58 ± 8 години за случаите и 57,8 ± 8 години за контролите. Всички засегнати жени са били в менопауза. Фамилна анамнеза за подагра е установена при една трета от пациентите с остра подагра и това е подобно за контролите (p> 0,05) (Таблица 1). Индексът на телесна маса и кръвното налягане на участниците от всяка група бяха доста сходни (p> 0,05) (Таблица 1). Хиперурикемичната диета и хиперурикемията са статистически свързани с остра подагра (р 0,05). Острата криза при хронична подагра е клиничната картина в 22 (73,3%) случая.

Полиморфизъм на rs2280205 и rs2276961

В рамките на изследваната извадка е имало подчертано преобладаване (p Таблица 2 Асоциация на полиморфизмите на вариантите на изследването и подагра

Асоциация на полиморфизма и подаграта

Въпреки че се установи, че родовите алели и техните хомозиготни генотипове са преобладаващи и за двата варианта, те не са свързани с подагра (p> 0,05) (Таблица 2). Не е установено, че различните изследвани алели влияят върху нивата на пикочна киселина в кръвта и урината (p> 0,05) (Таблица 3).

Дискусия

Разпространението на подагра в Африка на юг от Сахара се увеличава със застаряването на населението и нарастването на съпътстващите заболявания като диабет тип II, хипертония и хронични бъбречни заболявания. Определянето на генетичните рискови фактори за тези заболявания е актуално предизвикателство. В това предварително проучване се опитахме да определим влиянието на два несинонимни варианта rs2280205 и rs2276961 на гена SLC2A9 върху появата на подагра при камерунците. Изглежда, че полиморфизмът на тези варианти не е повлиял на патогенезата на подагра.

Установихме, че тези алели не са свързани с подагра и че нивата на пикочната киселина в кръвта и урината не са модифицирани от тях. Това може да е резултат от фамилния компонент, открит в сходни пропорции както за случаите, така и за контролите, което предполага споделено генетично наследство и оправдава едно и също разпределение на предците и второстепенните алели и техните хомозиготни генотипове, като се има предвид един и същ етнически произход на двете групи, което е не е случаят в предишни проучвания [12, 23, 24]. Въпреки това, въпреки че генетичните фактори играят основна роля в патогенезата и предаването на подагра и определят популацията в риск от развитие на подагра, ролята на околната среда е също толкова важна, тъй като тя определя индивидуалния риск от подагра [21]. Разстройствата, причинени от тези мутации на транспорта на урат, могат да се проявят по-късно в живота или в контекста на хиперурикемична диета, както се наблюдава в случаите, но не и при контролите. По този начин проследяването на хората, засегнати от тези мутации в кохортно проучване, ще даде по-добри отговори относно тяхното значение.

Това проучване разкрива голяма част от родовите алели и техните хомозиготни генотипове на вариантите rs2280205 и rs2276961 и предполага, че те не са замесени в патогенезата на подагра при камерунците. Поради това се подозира съществуването на други генетични и екологични фактори в тази популация.

Ограничения

Границите на тълкуването на тези резултати идват от:

Малкият размер на извадката на изследването, като пилотно проучване;

Липсата на силни критерии, определящи хиперурикемичната диета, адаптирана в нашия контекст.