Ветеринарни специалисти на Дейвис, Хичин, Великобритания

Автор-кореспондент: М. Лоури, RCVS и европейски специалист по ветеринарна неврология, Ветеринарни специалисти на Дейвис, Бизнес парк Manor Farm, Higham Gobion, Hitchin SG5 3HR, Великобритания; e-mail: [email protected]. Потърсете още статии от този автор

Департамент по клинични науки и услуги, Кралски ветеринарен колеж, Хатфийлд, Хартфордшир, Великобритания

Отделение по неврология, болница Royal Hallamshire, Шефилд, Великобритания

Катедра по фармакология, UCL School of Pharmacy, Лондон, Великобритания

Отделение по гастроентерология, болница Royal Hallamshire, Шефилд, Великобритания

Диагностични услуги на Powell Torrance, Higham Gobion, Великобритания

Ветеринарни специалисти на Дейвис, Хичин, Великобритания

Ветеринарни специалисти на Дейвис, Хичин, Великобритания

Автор-кореспондент: М. Лоури, RCVS и европейски специалист по ветеринарна неврология, Ветеринарни специалисти на Дейвис, Бизнес парк Manor Farm, Higham Gobion, Hitchin SG5 3HR, Великобритания; e-mail: [email protected]. Потърсете още статии от този автор

Департамент по клинични науки и услуги, Кралски ветеринарен колеж, Хатфийлд, Хартфордшир, Великобритания

Отделение по неврология, болница Royal Hallamshire, Шефилд, Великобритания

Катедра по фармакология, UCL School of Pharmacy, Лондон, Великобритания

Отделение по гастроентерология, болница Royal Hallamshire, Шефилд, Великобритания

Диагностични услуги на Powell Torrance, Higham Gobion, Великобритания

Ветеринарни специалисти на Дейвис, Хичин, Великобритания

Резюме

Заден план

Синдромът на кучешки епилептоидни спазми (CECS) е пароксизмално нарушение на движението на граничните териери (BT). Тези кучета може да реагират на диета без глутен.

Цели

Целта на това проучване е да се изследва клиничният и серологичен ефект на безглутенова диета при BTs с CECS.

Животни

Шест BT, притежавани от клиенти, с клинично потвърдена CECS.

Методи

Набирани са бъдещи кучета, които са имали поне 6-месечна история на CECS въз основа на наблюдаваната феноменология (с помощта на видео) и са показвали поне 2 отделни епизода през различни дни. Кучетата бяха тествани за анти-трансглутаминаза 2 (TG2 IgA) и анти-глиадин (AGA IgG) антитела в серума при представяне и 3, 6 и 9 месеца след въвеждането на диета без глутен. Биопсии на дванадесетопръстника са извършени при 1 куче.

Резултати

Титрите на серумния TG2 IgA са увеличени в 6/6 BT (P = .006) и титрите на AGA IgG бяха увеличени в 5/6 BT при представяне в сравнение с тези на контролите (P = .018). След 9 месеца имаше клинично и серологично подобрение във всички BT, като CECS стриктно се придържаше към безглутенова диета (5/5). Едно куче постоянно е повишавало титрите на антителата. Това куче почисти конски тор. При стриктното въвеждане на безглутенова диета това куче също имаше подобрен клиничен и серологичен отговор. Подобрението, свързано с диетата, беше обратимо при 2 кучета след завършване на проучването, и двете претърпяха рецидив на CECS при повторното въвеждане на глутен.

Заключения

Синдромът на кучешки епилептоидни спазми при BT е чувствително към глутен разстройство на движението, задействано и поддържано от глутен и по този начин реагиращо на безглутенова диета.

Съкращения

Целиакия (CD) е имунно-медиирана ентеропатия, предизвикана при генетично чувствителни индивиди от поглъщането на глутен. 3 Този термин обаче трябва да бъде запазен за тези пациенти, чувствителни към глутен ентеропатия; характеризираща се с необичайна дуоденална биопсия с повишена плътност на интраепителни лимфоцити до вилозна атрофия, в присъствието на антитела срещу трансглутаминаза-2 (автоантитела срещу ензим, който разгражда глиадин) в серума. 3 По-наскоро измисленият термин, нецелиакална глутенова чувствителност (NCGS), включва спектър от състояния при хората, всички от които се характеризират с имунен отговор на поглъщането на глутен, но с различни прояви 4 като ентеропатия 5 (различна от CD), дерматопатия (дерматит херпетиформис) 6; и неврологични разстройства като глутенова атаксия. 7 При пациенти с неврологични прояви на NCGS антителата срещу глиадин (протеинът, отговорен за чувствителността към глутен) са най-добрите диагностични маркери. 8, 9

Първата ни цел беше да установим каквито и да е терапевтични ефекти от безглутенова диета в BTs с CECS. Втората ни цел беше да предоставим серологични доказателства, че съществува връзка между CECS и чувствителността към глутен.

Материали и методи

Животни

Взети са серумни проби от 6 BT с клинична диагноза CECS, представена на ветеринарните специалисти на Дейвис между март 2012 г. и юли 2014 г. Собствениците бяха помолени да подпишат документ за информирано съгласие преди включването на кучето им в проучването.

Критерии за избор на дело

Получено е видео на типичен епизод от всяко куче и е оценено от 2 от авторите (ML, LSG). Въз основа на наблюдаваната феноменология във връзка с медицинската история е поставена диагноза CECS. Това е в съответствие с диагнозата CECS в предишно проучване. 2

Информацията, получена и записана от медицинските досиета на кучета CECS, се състои от сигнализация (възраст и пол); анамнеза (първо начало, прогресия, честота и продължителност на епизодите); признаци, предполагащи стомашно-чревно заболяване (по-специално повръщане, диария, персистираща борборигмия); и съпътстващи медицински състояния. Кучета с анамнеза за безглутенова диета преди присъединяването бяха изключени от проучването. Всички кучета трябваше да имат поне 6-месечна история на CECS и да са показвали поне 2 отделни епизода в различни дни.

Всяко куче беше подложено на пълен общ физикален и неврологичен преглед от ветеринарен невролог (ML, LSG). Минималната база данни за всяко куче се състои от следното: пълен брой на кръвните клетки (CBC), серумен биохимичен профил, рутинен анализ на урината и динамични концентрации на жлъчни киселини. При избрани кучета беше извършено допълнително тестване, включително магнитно-резонансно изображение на мозъка (с помощта на магнит 0.4T1 1 Aperto постоянен магнит, Hitachi, Токио, Япония
), анализ на цереброспиналната течност (събрани от церебеломедуларното казанче) чрез цитологичен преглед и анализ на общия протеин и гастродуоденоскопия със събиране на ендоскопски биопсични проби от стомаха и низходящия дванадесетопръстник, получени с гъвкави ендоскопски биопсични форцепс.

Диетичен опит

След това всички кучета бяха хранени с изключително безглутенова диета 2 Hypoallergenic Canine Dry, Royal Canin, Camargue, Франция
Участниците бяха инструктирани да превключват кучето си към новата диета постепенно, в продължение на 7 дни, чрез постепенно увеличаване на дела на новата диета, хранена. Бяха дадени и указания за осигуряване на храненето на избраната диета изключително чрез избягване на консумация на лакомства или остатъци от масата, предотвратяване на изчистването на открито и избягване на достъп до храна на други кучета в домакинството чрез отделно хранене на отделни кучета и повдигане на купички с храна, когато не се използват . По време на изпитването не са дадени други лекарства. През това време собствениците бяха помолени да водят дневник и да записват всички епизоди.

Последващи действия

Назначен е повторен преглед 3, 6 и 9 месеца след започване на безглутенова диета, при който е извършен пълен общ физикален и неврологичен преглед заедно с CBC и серумен биохимичен профил.

Събиране на проби

При представяне и на 3, 6 и 9 месеца при всички кучета беше събрана серумна проба. Взети са и серумни проби от BT, без анамнеза за CECS, провеждащи медицински изследвания за състояния, несвързани с неврологични или стомашно-чревни заболявания, които да служат като контрол. Всички серумни проби се съхраняват при -80 ° C, докато се анализират.

Серология

Всички серумни проби бяха тествани за серологични доказателства за антианцинови трансглутаминаза-2-IgA (TG2 IgA) автоантитела и антиканинови глиадин-IgG (AGA IgG) антитела с помощта на търговска лаборатория, 3 3 ZEDIRA GmbH, Дармщат, Германия
Тези маркери са избрани поради тяхната полезност като диагностични маркери за чувствителност към глутен при хората. 3, 8, 9

За откриване на антитела срещу кучешка тъкан, трансглутаминаза-2, антигенът е покрит върху микротитърна плака. Повърхността на плочата беше блокирана с говежди серумен албумин преди употреба с кучешки серуми и контролни проби. Свързани антитела срещу кучешки TG2 бяха открити чрез инкубация с конюгирано с пероксидаза вторично антитяло срещу кучешки IgA. В последния етап пероксидазата превръща субстрат (тетраметилбензидин) в син продукт, който след добавяне на стоп разтвора (0,5 М H2SO4) пожълтява. Отрицателните контролни стойности бяха записани с помощта на буфер и конюгат.

Що се отнася до IgG антиглиадиновите антитела, беше използвана покритата с глиадин микротитърна плака от ELISA за определяне на антитела (IgG) срещу глиадин от Steffens Biotechnische Analysen. 4 Steffens Biotechnische Analysen GmbH, Ebringen, Германия
Откриването на свързани антитела срещу глиадин се получава чрез инкубация с конюгирано с пероксидаза вторично антитяло срещу кучешки IgG1. Отрицателните контролни стойности бяха записани с помощта на буфер и конюгат.

Статистически анализ

Анализите на корелациите между кучетата CECS и контролната група бяха извършени с помощта на теста Mann-Whitney. A P-стойност на 5 XLStats; Excel, Windows

Резултати

Животни

В това проучване бяха включени общо 6 BT. Средната възраст на BT в началото на епизода е 2,6 години (медиана 3 години; диапазон, 1-4 години). Три BT са жени (50%; 2/3 кастрирани) и 3 мъже (50%; 3/3 кастрирани).

Дискинезия Епизоди

Граничните териери са показали клиничните признаци за средно 1,4 години при представяне (медиана 1,5 години; диапазон, 6 месеца – 2 години). Средната честота на епизодите е 1 на месец (медиана 1 епизод на всеки 2 месеца; диапазон, 1 епизод на всеки 3 месеца до 1 епизод на седмица). Средната продължителност на епизода е 15 минути (медиана 5 минути; обхват, 2–60 минути).

Едновременни клинични признаци

При 2/6 BT собствениците съобщават за признаци, предполагащи стомашно-чревни заболявания. При 1 куче това включва борборигми и случайно повръщане. При другото куче това се съобщава като чести меки изпражнения.

Разследвания

Резултатите от общ физикален преглед, неврологичен преглед, CBC, серумен биохимичен профил и динамични концентрации на жлъчна киселина не откриват никакви отклонения (n = 6). При 4 кучета беше направено ЯМР сканиране с анализ на гръбначната течност, което даде нормални резултати. При 1 куче (куче 1) с признаци, предполагащи стомашно-чревно заболяване (борборигми и случайно повръщане), гастродуоденоскопия със събиране на ендоскопски биопсии на стомаха и дванадесетопръстника не разкрива аномалии.

Отговор

Три BT (кучета 1, 4 и 5) не са имали допълнителни епизоди на CECS след започване на диетичното изпитване. Две BT (кучета 2 и 3) са имали съответно 1 и 2 епизода в рамките на 4 седмици от началото на проучването, но впоследствие не са имали повече епизоди. Последното куче (куче 6) продължи да има епизоди през целия период на изследване.

Титри на антитела

серологичен

Антиглиадиновите антитела (AGA IgG) също са значително увеличени (медиана 0,398; диапазон 0,175–0,641) в сравнение с контролните кучета при представяне (медиана 0,121; диапазон 0,092-0,162; P = .018), но обхватът на увеличението не е такъв, че да има клинично значение. Буферните и конюгатните отрицателни контролни стойности бяха съответно 0,096 и 0,105. Титрите обаче намаляват при въвеждането на безглутенова диета при всичките 5 кучета, които са реагирали клинично и в крайна сметка при шестото куче, след като стопанинът се е съобразил с безглутеновата диета (Фигура 2).

Дискусия

Тези изследвания подкрепят хипотезата, че CECS е проява на чувствителност към глутен, което прави това първото пароксизмално разстройство на движението във ветеринарната медицина със серологична връзка с глутена.

Глутенът включва както глиадин, така и глутенин протеини с доказателства, предполагащи, че глиадиновата фракция предизвиква заболяване. 10 Gliadin е уникален протеин, тъй като съдържа голям брой глутаминови остатъци. Тъканната трансглутаминаза е ензим, който наред с другите си функции катализира дезаминирането на остатъците от глутамин до глутаминова киселина. 11 Този процес може да доведе до създаването на нови епитопи, които биха могли да играят ключова роля в имунопатогенезата на чувствителността към глутен. Понастоящем причинно-следствената връзка между активността на трансглутаминазата и чувствителността към глутен не е категорично установена, въпреки че доказателствата в подкрепа на тази хипотеза са силни. 13

През последните години възгледът на CD претърпя дълбока ревизия. Първата индикация, че глутенът може да причини извън чревни признаци, идва от проучване, което описва зависим от глутен кожен обрив (известен като дерматит херпетиформис), който може да се появи дори без хистологични доказателства за чревно засягане. 6 Неврологични признаци се наблюдават при пациенти с хистологично потвърден CD. 14 Разпознаването на неврологичните прояви на NCGS оттогава се е увеличило, като най-честите са глутенова атаксия 7 и периферна невропатия. 15 Въпреки това, признаци на хорея, 16 синдром на схванат човек, 17 гърчове, 18 и наскоро описана клинична единица на миоклонична атаксия 19 са по-редки. Ориентировъчните връзки на PNKD при 10-годишно момиче, отговарящо на безглутенова диета, не са подкрепени от серологични анализи. 20.

Свързването на глутена с CECS може да даде обяснение защо част от кучетата с CECS проявяват признаци на стомашно-чревни заболявания. 2 При глутенова атаксия 23 Едно куче в настоящото проучване с борборигми и повръщане от време на време няма хистологични доказателства за ентерит. Собственикът на второто куче с признаци, предполагащи стомашно-чревни заболявания, не е дал съгласие за ендоскопско изследване. Необходими са допълнителни проучвания, за да се оцени разпространението и естеството на хроничната ентеропатия при BT с CECS, за да се определи дали тези кучета имат неврологична проява на CD или NCGS.

Добавянето на рекомбинантен кучешки антиген TG2 към пробите преди тестването им в ELISA е необходимо, за да се изключат неспецифичните ефекти. Въпреки това, измерването на кучешки антитела срещу TG2 преди това е било извършено в цереброспиналната течност на кучета, представящи се с възпалителен менингоенцефалит, при които е била извършена проверка на ELISA успешно. 24 Измерване в серума не е предприето преди това.

Доказателствата за съществуването на CESS, отговарящи на глутен, представени в това проучване са наличието на антиглиадин и TG2 антитела в множество серумни проби и клиничния и серологичен отговор на безглутенова диета. Освен това повторното въвеждане на глутенова диета при 2 кучета доведе до рецидив на CECS. Въпреки това ще е необходим по-голям брой кучета, за да се установи клиничното значение и полезността на тези наблюдения.

Дизайнът на нашето проучване може да бъде свързан с пристрастия - например, по-вероятно е собствениците да се откажат от диетата, ако не видят незабавно подобрение в признаците. Въпреки това подчертахме на собствениците, че подобряването на диетата, ако изобщо е вероятно, ще бъде бавно и ще отнеме няколко месеца. Допълнителен източник на пристрастия е, че 1 изследовател е извършил всички клинични оценки и не е бил заслепен за лечението на кучетата. Освен това собствениците може да са успели да намалят излагането на подбудителни причини като вълнение след консултация с ветеринарен невролог, което отчасти може да обясни намаляването на честотата на епизодите след подбуждането на диетата. За преодоляване на някои от тези ограничения е необходимо двойно-сляпо рандомизирано плацебо-контролирано проучване. Освен това бъдещите проучвания ще проверят клиничната полезност на тези резултати чрез добавяне на кучешки антиген TG2 към пробите преди тестването им в ELISA, за да се изключат неспецифичните ефекти.

Заключения

Серологичните тестове за анти-трансглутаминаза-2 и анти-глиадинови антитела могат да представляват полезен диагностичен инструмент за CECS и за проследяване на спазването на диетата, особено при кучета, които не се придържат към безглутенова диета. Определянето на чувствителността към глутен и преминаването към диета без глутен трябва да се има предвид при BT, показващи дискинезия.

Благодарности

Декларация за конфликт на интереси: Нито един от другите автори на тази статия няма финансови или лични отношения с други хора или организации, които биха могли да повлияят по неподходящ начин или да пристрастят към съдържанието на тази статия.

Извънкласна антимикробна декларация: Авторите декларират, че не са използвали антимикробни средства извън етикета.