Резюме

Измерват се глюкоза и инсулин на гладно на гладно. Евгликемично-хиперинсулинемична скоба беше стартирана, както беше описано по-рано (17). Протоколът за затягане е модифициран, за да не включва първоначална инфузия на инсулин. Скоростта на инфузия на инсулин е 120 mU · m -2 · min -1 за 240 минути и е успоредна с инфузия на глюкоза за поддържане на евгликемия. Калиев хлорид (0,1 mmol/l) се влива със скорост 10 mmol/h по време на скобата, за да се предотврати хипокалиемия. Паралелно на инфузионната инфузия, инулинът се влива с постоянна скорост (24 ml/h) в продължение на 300 минути. Взети са проби от артериална и венозна кръв на всеки 15 минути за инулин и инсулин и на всеки 30 минути за глюкоза. Всяка проба се съхранява при -18 ° C преди анализ.

транскапилярен

Три микродиализни катетъра (CMA Microdialysis AB; CMA, Стокхолм) бяха вкарани под ъгъл 45 ° (през стоманената мандарина на 20-калибърна канюла) в десния брахиорадиалисен мускул. Контролните експерименти в нашата лаборатория, включително изследвания с компютърна томография (КТ) или електромиограма, показват, че позицията на катетъра се установява задоволително чрез тази процедура. За измерване на инулин и инсулин бяха използвани два катетъра с диализна мембрана 12 × 0,5 mm 100-kDA молекулно отрязване, а за глюкоза беше приложен друг катетър с 16 × 0,5 mm 20-kDa молекулно отрязване. Принципът на мускулната микродиализа е описан по-рано подробно (3,18, 19). Входовете на катетрите бяха свързани към микроинжекционна помпа (CMA 100). Перфузионната течност се състои от изотоничен физиологичен разтвор с добавяне на 1,5 mmol/l глюкоза и 1% албумин. Скоростта на перфузия е 2,5 μl/min (измервания на глюкозата) и 1,5 μl/min (в катетър за измерване на инсулин и инулин). След уравновесяване от 45 минути диализатите за измерване на инсулин, инулин и глюкоза се събират на интервали от 15 минути.

Калибрирането на катетрите за измерване на глюкозата се извършва с използване на урея като вътрешна референция (20). В това проучване средното получено възстановяване in vivo е 18 ± 1% за глюкозата. Измерванията на интерстициалния инсулин бяха взети съгласно външната референтна техника за калибриране (3) в стационарно състояние. Връзката между възстановяването на инулин и инсулин in vitro е 1,7. Средното относително възстановяване на инулин (диализатен инулин/плазмен инулин) в експерименти, проведени in vivo, е 6,7 ± 0,4%. След това се изчислява in vivo възстановяването на инсулина за всеки субект. Средното изчислено in vivo възстановяване на инсулина е 3,4 ± 0,2%. Факторът за възстановяване in vivo се използва за преизчисляване на съдържанието на инсулин в стационарен диализат до интерстициални концентрации на инсулин. Кръвният поток на предмишницата се измерва чрез плетизмография на венозна оклузия, като се използва щампомер на Уитни (21).

CT беше проведен за определяне на телесния състав. Изследванията бяха направени със система CT на General Electric HiSpeed ​​Advantage (HSA, освобождаване RP2; GE Medical Systems, Милуоки, Вирджиния) със следните настройки: 120 kV, дебелина на резета 5 mm и фиксирана филтрация. Получено е едно сканиране в багажника, т.е. четвъртото ниво на лумбалния прешлен (L4), и едно сканиране в предмишницата, т.е. средната част на m. ниво брахиорадиалис. Изображенията бяха прехвърлени в отделна UNIX-базирана аналитична единица. Областите на тъканите бяха определени, както е описано по-рано (22), със следните грешки в прецизността, изчислени от двойни определяния: 0,5% подкожна мастна тъкан, 1,2% висцерална мастна тъкан, 0,3% мускулна тъкан и 3,4% костна тъкан. Общите обеми на мастната тъкан и висцералната мастна тъкан са изчислени от прогнозни уравнения съгласно Kvist et al. (23). Очакваната маса се получава чрез умножаване на обемите на тъканите по плътността на мастната тъкан, 0,923 g/cm 3. Тогава телесна маса може да се определи като телесно тегло - мастна тъкан (24).

Изчисления

Скорости на усвояване на инсулин и глюкоза.

Принципът на Fick се използва за оценка на регионалната скорост на усвояване на глюкоза и инсулин. По време на стационарно състояние се прилага формулата (A-V) · поток.

Производствена повърхност на пропускливост за инсулин и глюкоза.

Продуктът с повърхностна пропускливост (PS) е получен от следната формула:

където A е артериалната плазмена концентрация, V е дълбоката венозна плазмена концентрация, I е интерстициалната концентрация, ln е естественият логаритъм, а Q е плазменият поток.

Аналитични методи.

Концентрациите на глюкоза и урея в плазмата и във фракциите на диализата се определят с колориметричен метод (глюкоза) и UV метод (урея), върху анализатор за микродиализа CMA 600. Кръвната глюкоза по време на скобата се анализира ензимно на биохимичен анализатор YSI 2700 select (Yellow Springs Instrument, Yellow Springs, OH). Плазменият инсулин се определя с ензимен имуноанализ (Insulin ELISA; Mercodia, Uppsala, Швеция), а концентрацията на инсулин в микродиализатите се определя с ултрачувствително есе (Mercodia Ultra sensitive Insulin ELISA). Концентрациите на инулин в плазмата и диализатите се определят фотометрично (25).

Статистика.

T1/2 и Tmax за повишаване на диализатен инсулин и инулин показват времето за постигане на съответно половин максимална и максимална концентрация. In vitro са необходими 20 минути, за да се установи стабилна промяна в нивата на диализат на инсулин и инулин след промяна на концентрацията в околната среда (данните не са показани). По този начин се изваждат 20 минути при представяне на T1/2 и Tmax на интерстициалния инсулин и инулин, както е показано в Таблица 2. Кинетичните анализи са направени индивидуално и са представени средствата за T1/2 и Tmax. За изчисляване на интерстициалните концентрации е използвана средната стойност на четири проби, събрани през последния час на затягане. Резултатите са изразени като средни стойности ± SE. Значимостта на разликата беше тествана с тест на Student за сдвоени и несдвоени наблюдения. Когато данните бяха непараметрично разпределени, беше използван тестът на Ман-Уитни за несдвоени данни. P −1 · min −1, P −1 · min −1 при слаби и затлъстели субекти (NS). Очакваната PS за инсулин по време на стационарно затягане е 0,5 ± 0,3 срещу 0,3 ± 0,1 ml · 100 g - 1 · min -1, съответно при слаби и затлъстели лица (NS).

Инулин.

Концентрациите на инулин в стационарно състояние в артериалната плазма са 221 ± 16 и 215 ± 8 mg/l, а в дълбоката венозна плазма са съответно 222 ± 15 и 209 ± 8 mg/l при сухи и затлъстели лица (NS). Артериалните и дълбоките венозни нива на инулин за всички пациенти са показани на фиг. 3. T1/2 на инулина в диализата е значително по-дълъг, отколкото в плазмата (68 ± 5 срещу 34 ± 2 минути; P - 1 · min -1, P = 0,07) и е значително по-висока по време на стационарно притискане (5,1 ± 1,2 срещу 2,1 ± 0,5, P 2 = 0,32, P −1 · min −1 съответно при слаби и затлъстели лица (NS).