Резюме

Преди началото и в края на интервенцията се вземат кръвни проби на гладно и 24-часови проби от урина и се съхраняват при -30 ° C за хормонални анализи. Извършен е и орален тест за толерантност към глюкоза, включващ събиране на кръвни проби 1, 2 и 3 часа след поглъщането на 100 g глюкоза.

бионаличните

Вземайки предвид вътрешноиндивидуалните вариации в нивата на хормоните (48), ние изчислихме, че изследването има статистическа мощност над 90% за откриване на 20% промяна в основните променливи на резултата.

Диетична намеса.

Жените от интервенционната група бяха поканени на общи хранения и уроци по готвене два пъти седмично в продължение на 18 седмици. При всеки случай менюто беше различно, но основно се базираше на средиземноморски вегетариански и макробиотични рецепти. Използваните храни са описани в допълнението. Препоръчахме едни и същи храни да се консумират ежедневно у дома, но не предписвахме менюта. Предоставихме обаче писмени инструкции, които посочват как да заменим месото, яйцата и млечните продукти с растителни източници на незаменими аминокиселини, витамини и минерали; препоръчва месото, яйцата и млечните продукти да не се ядат повече от веднъж седмично; настоятелно се призовава да се намали консумацията на рафинирани въглехидрати (захароза, бял хляб, рафинирано брашно), като се заменят пълнозърнести продукти от зърнени храни, като се използват плодове или ферментирали зърнени култури като edulcorants; и препоръчително готвене с малко добавена мазнина и сол.

Жените също бяха насърчавани да ядат поне една порция от соев продукт (соево мляко, мисо супа, тофу, темпе или соеви зърна) всеки ден, за да подправят умерено с нерафиниран зехтин и различни семена, но не и млечни мазнини, и да консумирайте риба и водорасли.

Всяка седмица всяка жена получаваше 1 кг хляб, приготвен от пълнозърнесто брашно и 8% ленено семе (наполовина цели семена и наполовина смлени), от време на време смесени с овес или ръж, както и безплатна опаковка от други препоръчани продукти, които са не е нормална част от северноиталианската диета.

През първия месец от проучването участниците бяха помолени да променят своите навици постепенно, за да предотвратят нежелани реакции поради прекомерна ферментация в червата. Диетата е била ad libitum и не е даден съвет за намаляване на общия прием на храна или за преброяване на калориите.

Оценка на приема на храна и антропометрични измервания.

Преди рандомизацията всички жени съставят въпросник за честотата на храните, разработен за EPIC (49). По време на проучването спазването на диетичните препоръки се наблюдава от 24-часови дневници за честотата на хранене, които се попълват 24 пъти от интервенционната група и 10 пъти от контролните жени. През четвъртия месец от проучването бяха интервюирани всички жени и бяха помолени да си припомнят всичко, което са яли през предходните 24 часа, включително количествата. Данните бяха събрани с компютъризираната 24-часова система за напомняне за хранене EPIC (50), която след това беше използвана за оценка на абсолютния прием на хранителни вещества и енергия в двете групи. Системата използва италианската база данни за състава на храните (51), която също включва няколко храни, използвани в макробиотични рецепти. Средната консумация на изофлавоноиди и лигнани от интервенцията и контролните групи се изчислява от наличните бази данни за съдържанието на фитоестрогени в храните (23, 24, 25, 26, 52, 53) и от дневниците за честотата на храните, като се използват като стандартни размери порции извлечени от интервютата.

Височина, тегло, обиколки на талията (при естествена талия, когато е ясно разпознаваема или по средата между долното ребро и илиачния гребен) и обиколката на тазобедрената става (в чатала) са измерени в началото и в края на изследването.

Лабораторни анализи.

Циркулиращите хормони бяха измерени с помощта на търговски комплекти: комплекти RIA от ORION Diagnostic (Турку, Финландия) за тестостерон и естрадиол; Комплекти IRMA от Farmos (Oulunsalo, Финландия) за глобулин, свързващ половите хормони; и MEIA комплекти от ABBOTT (Abbott Park, IL) за инсулин. Коефициентите на вариация в рамките на интра- и интрасесия в осем повторения са съответно: 4.2 и 12.5% ​​за тестостеронова стойност от 0.420 ng/ml; 5,2 и 11,1% за концентрация на естрадиол от 10 pg/ml; 3,5 и 6,7% за стойност на глобулина, свързващ половия хормон, от 34,0 nmol/литър; и 2,5 и 4,6% за инсулинова стойност от 14,2 μIU/ml. За инсулин пробите бяха анализирани в рамките на 2 седмици след събирането. За да се намалят ефектите от вариабилността на взаимодействие, за глобулин, свързващ половите хормони, тестостерон и естрадиол, в една и съща партида са анализирани изходните и крайните серумни проби на същата жена. По-рано показахме, че естрадиолът и тестостеронът са стабилни в серума, запазен при ниска температура (47) .

Измерихме уриновия даидзеин и неговия метаболит еквол чрез газова хроматография след екстракция в твърда фаза и високоефективно пречистване с течна хроматография. Коефициентите на вариация са 7,5% за ниски (14 ng/ml) и 10,7% за високи (9982 ng/ml) даидзеин концентрации и 4,0% за ниски (80 ng/ml) и 2,9% за високи (10 500 ng/ml) концентрации на еквол. Всички проби от кръв и урина са анализирани сляпо до статуса на интервенция-контрол.

Съответствие и теми, изключени от статистическия анализ.

Петдесет от 52-те жени от интервенционната група спазваха цялата диетична програма. Две жени следваха само около половината от програмата, но бяха включени във всички анализи. Само пет жени отсъстваха повече от пет пъти от 36-те урока и общите хранения. Нивата на даидзеин в урината и еквол са използвани като индикатор за съответствие с консумацията на соя. Две жени от интервенционната група и една жена от контролната група бяха изключени, тъй като те получиха хормонални лекарства по време на периода на изследване. Други две жени от контролната група бяха изключени, тъй като не присъстваха на последния преглед. Бяха анализирани общо 99 жени: 50 в интервенционната група и 49 контролни. От тях четирима (двама в интервенционната група и две контролни) са с липсващи стойности за инсулин на гладно, а пет (един в интервенционната група и четири в контролната група) са с липсващи стойности за оралния глюкозен толеранс.

Статистически методи.

Резултати

Средният прием на енергия и хранителни вещества за интервенция и контрол на жените, както се изчислява преди началото и към края на проучването

Ние изчислихме, че жените от интервенционната група консумират средно ~ 38-45 mg изофлавоноиди на ден. Изчисленият среден дневен прием на лигнани е по-несигурен (9–32 mg) поради големи несъответствия между различните методи на химичен анализ в храната (24, 25). Съответните оценки за контролите обаче са много по-ниски (около 2 mg/ден изофлавоноиди и 1 mg/ден лигнани). Високият прием на богата на изофлавон храна от интервенционната група е потвърден чрез анализ на даидзеин и неговия метаболит еквол в проби от урина за 24 часа, събрани към края на периода на изследване. Средната кумулативна екскреция е 5,32 mg/24 h в интервенционната група (диапазон, 0,02–10,18) спрямо 0,17 mg/24 h в контролите (диапазон, 0,01–1,09). В контролната група само една жена е имала стойности над 1 mg/24 h, а 29 стойности са били под 0,1 mg/24 h; в интервенционната група девет жени са имали стойности под 1 mg/24 h и само три под 0,1 mg/24 h, включително двете жени, които не са завършили интервенцията.

Средни стойности на антропометрични променливи при интервенция и контрол на жените преди и след диетична интервенция

Използвайки многовариантна ANOVA, установихме статистически значима промяна (P ⇓. В контролната група имаше и малки промени в глобулина, свързващ половите хормони (+ 3.6%), тестостерона (-7.1%) и естрадиола (-5.5%) нива, в същата посока като при интервенционната група. Промените в нивата на глобулин и тестостерон, свързващи половите хормони, са значително по-големи при интервенцията, отколкото в контролната група (P ⇓). Гликемия на гладно и общата площ под кривата на инсулина по време на тестът за глюкозен толеранс също намалява значително в интервенционната група в сравнение с контролите (Р = 0,0260 и Р = 0,0404, съответно); промяната в инсулина на гладно обаче не е значителна (Таблица 3) ⇓ .

Средни стойности на хормонални променливи при интервенция и контрол на жените преди и след диетична интервенция

Разпределение на участващите жени според промяната в тестостерона: SHBG съотношение от изходното ниво до края на диетичната интервенция

Храни, препоръчани за домашна консумация и използвани за приготвяне на общи ястия за интервенционната група в проучването DIANA

Дава се и кумулативната консумация за 36 хранения/уроци (g на жена).

В началото индексът на телесна маса корелира силно със серумните нива на естрадиол (коефициент на корелация на Spearman r, 0,60) и отрицателно с нивата на глобулин, свързващ половите хормони (r, -0,53), но не и с нивата на тестостерон (r, 0,19). В интервенционната група промените в телесното тегло значително корелират с промените в серумните нива на глобулин, свързващ половите хормони (r, -0,33), но не и с промени в нивата на инсулин (r, 0,20), тестостерон (r, 0,19), и естрадиол (r, 0.09). Съотношението тестостерон: глобулин, свързващ половите хормони, значително намалява при жени, загубили над 4,5 kg телесно тегло, но намалява и при жени, загубили по-малко от 3 kg (Таблица 4) ⇓. След корекция за промени в теглото обаче разликите между промените в хормоналните нива в интервенцията и в контролната група вече не са статистически значими (Таблица 3) ⇓, което предполага, че хормоналните ефекти от диетичната интервенция могат да бъдат до голяма степен медиирани чрез промени в телесно тегло. Сред жените, които първоначално са имали високи нива на тестостерон, диетичната интервенция е предизвикала по-голямо намаляване на нивата на тестостерон, отколкото при жените с първоначално ниски нива, но взаимодействието не е било значително (P = 0,0849).

Дискусия

Наблюдавахме значителни и благоприятни промени в хормоналните показатели за риск от рак на гърдата при група жени в менопауза, живеещи в Северна Италия, първоначално с високи серумни нива на тестостерон, които са спазвали ad libitum диета с радикално модифициран състав в продължение на 4,5 месеца. Основните резултати бяха, че серумните нива на глобулин, свързващи половите хормони, бяха повишени и серумните нива на тестостерон и естрадиол бяха намалени. Открихме също намалено телесно тегло, намален инсулинемичен отговор на перорална глюкоза, намалена глюкоза на гладно и намален холестерол: всички тези промени бяха предвидени от хипотезата на изследването. Незначителни промени в същата посока се наблюдават и при жени от контролната група, които са слепи за диетичната стратегия на проучването, но може да са променили леко диетата си, следвайки публично достъпни насоки за превенция на рака.

Тези резултати предполагат, че многофакторната диетична интервенция, приложена в това проучване, може да предотврати рака на гърдата, ако продължи в дългосрочен план. Вътрешно ограничение обаче е, че многофакторната намеса изключва оценката на приноса на отделните фактори за общия ефект. Следователно е от интерес да изследваме нашите резултати във връзка с публикувани, предимно унифакториални, интервенционни проучвания.

Наблюдаваното намаляване на теглото е в съответствие с резултатите от предишни рандомизирани контролирани проучвания на диета с ниско съдържание на мазнини ad libitum, които показват, че теглото може да бъде загубено само чрез намаляване на съдържанието на мазнини в диетата, без да се ограничава приема на храна (56, 57, 58), което би компрометирало ситостта, качеството на живот и, в дългосрочен план, съответствието. Спад в телесното тегло от 3,52 кг (4,06 в диетичната група минус 0,54 в контролната група) съответства на кумулативен енергиен дефицит от около 26 400 kcal (7,5 kcal на грам мастна тъкан) и следователно на средно намаление от около 200 kcal на ден в продължение на 4,5 месеца, което се вписва добре с прогнозната разлика в енергийния прием между интервенционната и контролната групи: 255 (1805 - 1550) kcal на ден, измерена близо до края на периода на изследване, когато интервенцията е била напълно изпълнена (Таблица 1) ⇓. Този намален енергиен прием е постигнат чрез увеличена консумация на силно засищаща обемиста храна с ниска енергийна плътност, което предполага намаляване както на общата енергия, така и на дела, получен от мазнините. Ефектът от консумацията на захари върху апетита и приема на храна е спорен (59), но подозираме, че намаляването на гликемичния товар може да е допринесло за намаляване на теглото.

Наблюдаваното намаляване на количеството инсулин, необходимо за справяне със стандартното натоварване с глюкоза след бърза нощ, показва, че успяхме да подобрим инсулиновата чувствителност. Няколко наблюдателни проучвания показват пряка връзка между общия или наситения прием на мазнини, от една страна, и показателите за инсулинова резистентност и развитие на непоносимост към глюкоза, от друга (42, 43, 60, 61), но предишни интервенционни проучвания, които намаляват съдържанието на мазнини в храната показа само слаб или никакъв ефект (39). В повечето от тези проучвания обаче енергийният прием се поддържа постоянен, за да се поддържа телесно тегло (изокалорично заместване на въглехидратите с мазнини), а заместващите въглехидрати имат относително високи гликемични индекси и интервенционните периоди са кратки (1–3 седмици). Следователно подобрението в чувствителността към инсулин, наблюдавано в настоящото проучване, може да се дължи не само на намаляването на общия прием на мазнини и енергия и последваща загуба на телесно тегло (39), но и на увеличения дял на ненаситените мазнини (40, 41, 42, 43 ) и по-нисък гликемичен индекс на богати на въглехидрати храни (44, 45, 46; Таблица 1 ⇓).

Неотдавнашен преглед на 13 диетични интервенционни проучвания предполага, че диетите с ниско съдържание на мазнини (10-25% от общите калории) могат значително да намалят плазмените концентрации на естрадиол. Цитираните средни стойности са -7,4% преди менопаузата (9 проучвания) и -23,0% след менопаузата (4 проучвания; Реф. 72). В повечето от тези проучвания обаче приемът на богати на фибри храни също се е увеличил значително. Получихме подобно намаляване на серумния естрадиол (18%) с много по-ниско намаляване на приема на мазнини (от около 37 до 31% от общите калории), но с голяма промяна от животински към растителни мазнини и от високо- към ниско-гликемични- индекс въглехидрати.

Интервенционни проучвания, при които определени видове диетични фибри (73, 74, 75, 76) или богата на фибри храна (77, 78) са установени, не са установили значително увеличение на плазмените нива на глобулин, свързващ половите хормони, въпреки че плазмените нива на естрадиол обикновено са [ но не винаги (75)] намален, ефект, който може да се дължи на инхибирането на влакната на реабсорбцията на стероиди от червата (79). Липсата на ефект на добавките от пшенични влакна върху плазмения глобулин, свързващ половите хормони, е в съответствие с липсата на ефект от добавките с единични влакна върху нивата на инсулин след хранене и на гладно (80), за разлика от пълнозърнестата храна (81) . В настоящото проучване жените бяха помолени да разчитат на препоръчаните храни и да избягват фибри или други добавки.

В настоящото проучване ефектите от диетичната интервенция върху хормоналните нива са по-ясни от тези от предишни опити, включващи интервенция с един фактор, например намаляване на общия прием на мазнини или допълване със зърнени влакна, соев протеин или ленено семе. Предлагаме тези благоприятни промени да се отдадат на кумулативните ефекти на цялостна диетична стратегия, която съчетава понижен общ прием на мазнини, намален дял на наситени мастни киселини и намалена консумация на храни с висок гликемичен индекс с увеличен прием на диетични фибри от зърнени култури, бобови растения и зеленчуци и висока кумулативна доза от различни фитоестрогени от различни източници на храна. Много високото съответствие, получено в това проучване, обаче изискваше около 150 часа сесии за преподаване и консултиране в продължение на 4,5 месеца, което не би било осъществимо в мащабните програми за публично здравеопазване и може да не бъде устойчиво в дългосрочен план. Необходими са допълнителни проучвания за установяване на стратегии за успешни дългосрочни диетични промени в общата популация.

Благодарности

Благодарим на персонала в Associazione Attivecomeprima, където беше извършена теренната работа. Благодарим на A. Burrone, S. Gastaldi, C. Gazzola и д-р A. Ricciuti, всички от които помогнаха за логистичната организация на проекта; Е. Биганзоли, д-р. S. Catania и A. V. Ciardullo, G. Ciullo, R. Legnani, C. Guglielmo и Drs. E. Portalupi и P. Rubba, които ни посъветваха относно протокола за изследване; M. Miginiac и S. Oldani, които помогнаха за статистическия анализ; Д-р. T. Campa и V. Cioffi, R. Fissi, д-р G. Iannuzzo, J. Karlson, M. Larossa, F. Maffei, д-р A. Magni и S. Sieri, които извършиха полевата работа; A. Cavalleri, д-р A. Mastroianni, G. J. Minuit, S. Rinaldi и E. Venturelli, които са извършили лабораторната работа; и Д. Уорд, който провери английския. Благодарим също на C. Berta, L. Bragalini, O. Bolzoni, M. Cabras, D. Corbari, G. Ferrante, S. Lovati, E. Roggero, R. Suergiu и всички участващи жени.

Бележки под линия

Разходите за публикуване на тази статия бяха покрити отчасти чрез плащането на такси за страница. Следователно тази статия трябва да бъде маркирана с реклама в съответствие с 18 U.S.C. Раздел 1734 единствено, за да посочи този факт.

↵ 1 Това проучване беше подкрепено от безвъзмездни средства от фондация CARIPLO, Програмата „Европа срещу рака“ на Европейския съюз и Италианската асоциация за изследване на рака (AIRC).

↵ 2 До кого трябва да бъдат отправени искания за препечатвания, в отдел „Епидемиология“, Istituto Nazionale Tumori, Via Venezian 1, 20133 Милано, Италия. Телефон: 39-02-70-60-18-53 или 39-02-70-63-83-98; Факс: 39-02-23-90-762; Имейл: berrinoistitutotumori.mi.it

↵ 3 Използваните съкращения са: DIANA, диета и андрогени; EPIC, Европейско перспективно разследване на рака и храненето; IRMA, имунорадиометричен анализ; MEIA, ензимен имуноанализ на микрочастици.