Сабине Мьонч

1 Lehrstuhl für Lebensmittelchemie, Technische Universität München, Фрайзинг, Германия

проучване

Майкъл Нетцел

2 Катедра по човешко хранене, Институт по хранене, Университет на Фридрих Шилер Йена, Йена, Германия

Габриеле Нетцел

2 Катедра по човешко хранене, Институт по хранене, Университет на Фридрих Шилер Йена, Йена, Германия

Undine Ott

3 Kuratorium für Dialyse und Nierentransplantation e.V., Йена, Германия

Томас Франк

4 Частен консултант, Бад Зоден, Германия

Майкъл Рихлик

5 Катедра по аналитична химия на храните, Technische Universität München, Фрайзинг, Германия

Резюме

Въведение

Материали и методи

Химикали

Следните химикали са получени в търговската мрежа от източниците, дадени в скоби: серум на плъх (Biozol, Eching, Германия), пилешки панкреас (Difco, Sparks, MD, САЩ), оцетна киселина, ацетонитрил, двуосновен дихидрат на натриев фосфат, мравчена киселина, хексан, метанол, калиев фосфат едноосновен, натриев хидроксид, натриев хлорид (Merck, Дармщат, Германия), алфа-амилаза, амониев формиат, аскорбинова киселина, птероилмоноглутаминова киселина, 4-морфолинетансулфонова киселина (MES), 2-меркаптоетанол, протеаза тип XIV, натриев ацетат (Sigma, Deisenhofen, Германия), (6S) -тетрахидрофолиева киселина, калций (6S) -5-метилтетрахидрофолат, 10-формилфолова киселина и (6S) -5-формилтетрахидрофолиева киселина (Schircks, Jona, Швейцария). Всички химикали са поне с аналитичен реагент. [2Н4] -5-метилтетрахидрофолиева киселина, [2Н4] -5-формилтетрахидрофолиева киселина, [2Н4] -тетрахидрофолиева киселина, [2Н4] -10-формилфолова киселина и [2Н4] -птероилмоноглутаминова киселина са синтезирани както по-рано докладвано (14).

Тест храни

В местен супермаркет в град Мюнхен, Германия, е закупено нискомаслено сирене камамбер (16 g мазнина/100 g). Разтворът на птероилмоноглутаминова киселина се приготвя чрез суспендиране на птероилмоноглутаминова киселина (2,0 mg) във вода от чешмата, която след това се алкализира с разреден натриев хидроксид, докато всички твърди вещества се разтварят и след това се регулира до рН 7 с разредена солна киселина, последвано от регулиране на обема (1 L) с чешмяна вода. Изследваното сирене камамбер се оценява по два различни начина: (а) цели проби от сирене се замразяват в течен азот и се хомогенизират изцяло и (б) пробите от сирене се сегментират в кората и тестото и се анализират отделно чрез анализи за стабилно изотопно разреждане, както е описано по-горе (15). Контролът на качеството беше извършен чрез оценка на възстановяване, прецизност, линейност, LOD, граница на количествено определяне (LOQ) и анализ на сушени, смесени зеленчуци като сертифициран референтен материал (16).

Плазма

Плазмени проби бяха анализирани чрез тестове за стабилно изотопно разреждане, използвайки почистване с фенил SPE, както е описано подробно от Mönch et al. (17). Накратко, аликвотни части от плазмата (400 μL) се добавят с [2H4] -5-метилтетрахидрофолиева киселина (5 ng в MES буфер) и след това се покриват с амониев формиат буфер (600 μL) и се уравновесяват за 30 минути при стайна температура и се подлагат на почистване на фенилови SPE патрони (Discovery DSC-ph, 100 mg, 1 ml, Varian, Дармщат, Германия). Фолатите се елуират от колони SPE с 0,5 ml смес от воден натриев хлорид (5%) и натриев ацетат (100 mmol/L; 1% аскорбинова киселина). Долната граница на количественото определяне (LLOQ) е 0,37 nmol/L.

Пилотно проучване и етично разрешение

Биокинетични изчисления

Плазменият 5-CH3-H4folate беше оценен. В първата стъпка индивидуалната предоза (t = 0 h) 5-CH3-H4folate плазмени концентрации се изважда от всички следващи стойности. Отрицателните концентрации, които могат да се получат в резултат на тази процедура, бяха изхвърлени. Коригираните концентрации на дозата са подложени на стандартен анализ, който не е отделен, за да се извлекат Cmax (наблюдавана максимална плазмена концентрация), tmax (време на Cmax) и AUC (площ под кривата плазмена концентрация-време) (18). Изчисляването на AUC беше направено по линейно трапецовидно правило и беше ограничено в интервала между 0 и 12 часа след дозата, тъй като след 12 часа настъпи малко неочаквано и значително увеличение до 24 часа след дозата (вж. Фигура Фигура 1). 1). Концентрациите под LLOQ се третират като 0.